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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物,特别涉及一种多核苷酸、人5型复制缺陷型重组腺病毒、制备方法及预防新型冠状病毒的疫苗。
技术介绍
1、到目前为止,已被批准使用的新型冠状病毒感染疫苗超过200种。大多数批准的疫苗被分类为灭活疫苗、腺病毒载体疫苗、基于mrna的疫苗和重组蛋白疫苗。而主要的sars-cov-2结构蛋白是刺突(s)蛋白、核衣壳(n)蛋白、膜(m)蛋白。
2、已有研究表明,刺突蛋白通过受体结合结构域(rbd)与hace2受体结合,这是病毒进入的必要条件。此外,刺突蛋白的c端s2亚基,使用七肽重复序列1 (hr1)和七肽重复序列2 (hr2),介导病毒包膜和细胞膜之间的连接。且据观察,在感染sars-cov-2或新型冠状病毒感染疫苗后,最重要的中和抗体是针对rbd的,这表明该区域是设计疫苗的良好候选区域。因此,一些研究将rbd作为单一单体抗原,或以二聚体或三聚体形式构建重组新型冠状病毒感染疫苗。然而,尽管rbd疫苗具有较多优点,但其分子尺寸太小可能导致免疫原性差。除了刺突蛋白外,一些研究还将核衣壳(n)蛋白作为免疫原用于疫苗设计。核衣壳(n)蛋白作为冠状病毒中含量最多的结构蛋白,利用交叉反应性t细胞表位,可以增强t细胞应答。虽然这种蛋白质对呼吸系统的病毒感染有轻微的作用,但它通过诱导n特异性t细胞从而杀死感染细胞来控制远端感染的进一步进展,这一作用似乎至关重要。因此,通过连接子连接的多核苷酸表达的rbd蛋白和n蛋白候选疫苗的研发具有一定的前景和意义。
技术实现思路
1、为了克服
2、本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是:一种多核苷酸,所述多核苷酸能够表达截短蛋白,所述截短蛋白包含新型冠状病毒的受体结合结构域rbd和 n蛋白,且多核苷酸的序列如seq id no:2所示。
3、作为进一步的方案,所述多核苷酸为利用基因简并性,通过连接子连接受体结合结构域rbd对应的编码基因和 n蛋白对应的编码基因而得到的优化密码子多核苷酸。
4、作为进一步的方案,所述截短蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。
5、本专利技术还公开了一种人5型复制缺陷型重组腺病毒,所述人5型复制缺陷型重组腺病毒负载有上述的多核苷酸。
6、作为进一步的方案,所述人5型复制缺陷型重组腺病毒缺失e1基因和e3基因。
7、本专利技术还公开了人5型复制缺陷型重组腺病毒的制备方法,所述制备方法用于制备上述的人5型复制缺陷型重组腺病毒,所述制备方法包括以下步骤:
8、(1)对表达截短蛋白的多核苷酸进行优化;
9、(2)合成、扩增和鉴定步骤(1)中所述多核苷酸;
10、(3)构建与鉴定重组腺病毒穿梭质粒;
11、(4)构建与鉴定步骤(3)中所述重组腺病毒穿梭质粒对应的重组腺病毒;
12、(5)扩增、纯化与鉴定步骤(4)中所述重组腺病毒;
13、(6)滴度检测步骤(5)中所得重组腺病毒。
14、本专利技术还公开了预防新型冠状病毒的疫苗,采用上述人5型复制缺陷型重组腺病毒制备而成。
15、本专利技术至少具有以下有益效果之一:
16、1、本专利技术的多核苷酸rbd-n为受体结合结构域rbd对应的编码基因和n蛋白对应的编码基因通过连接子连接融合,通过对多核苷酸rbd-n的优化,可以明显地改善转染细胞的表达,并通过重组腺病毒制备对应的疫苗,制备的疫苗在细胞模型中具有较好的免疫原性,从而解决rbd疫苗分子尺寸太小可能导致免疫原性差的问题。
17、2、本专利技术所述的制备方法操作简单实用,可在短期内批量生产并用于突发事件。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种多核苷酸,其特征在于:所述多核苷酸能够表达截短蛋白,所述截短蛋白包含新型冠状病毒的受体结合结构域RBD和 N蛋白,且多核苷酸的序列如SEQ ID NO:2所示。
2.根据权利要求1所述的一种多核苷酸,其特征在于:所述多核苷酸为利用基因简并性,通过连接子连接受体结合结构域RBD对应的编码基因和 N蛋白对应的编码基因而得到的优化密码子多核苷酸。
3.根据权利要求1所述的一种多核苷酸,其特征在于:所述截短蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
4.一种人5型复制缺陷型重组腺病毒,其特征在于:所述人5型复制缺陷型重组腺病毒负载有如权利要求1-3中任一项所述的多核苷酸。
5.根据权利要求4所述的人5型复制缺陷型重组腺病毒,其特征在于:所述人5型复制缺陷型重组腺病毒缺失E1基因和E3基因。
6.人5型复制缺陷型重组腺病毒的制备方法,其特征在于:所述制备方法用于制备如权利要求4~5中任一项所述的人5型复制缺陷型重组腺病毒,所述制备方法包括以下步骤:
7.预防新型冠状病毒的疫苗,其特征在于:采用如权利要求4~
...【技术特征摘要】
1.一种多核苷酸,其特征在于:所述多核苷酸能够表达截短蛋白,所述截短蛋白包含新型冠状病毒的受体结合结构域rbd和 n蛋白,且多核苷酸的序列如seq id no:2所示。
2.根据权利要求1所述的一种多核苷酸,其特征在于:所述多核苷酸为利用基因简并性,通过连接子连接受体结合结构域rbd对应的编码基因和 n蛋白对应的编码基因而得到的优化密码子多核苷酸。
3.根据权利要求1所述的一种多核苷酸,其特征在于:所述截短蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。
4.一种人5型复制缺陷型重组...
【专利技术属性】
技术研发人员:李超男,郭艺凯,方仲表,蒋文杰,宋宛宸,
申请(专利权)人:浙江树人学院,
类型:发明
国别省市:
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