质粒DNA纯化方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及核酸纯化技术领域，尤其是涉及质粒DNA纯化方法及试剂盒。使用本发明专利技术提供的质粒DNA纯化试剂盒及对应纯化方法得到的超螺旋质粒DNA纯度可高达90％以上，宿主细胞RNA<0.2％，宿主细胞DNA<1％，宿主细胞蛋白<0.05％，内毒素含量＜5EU/mg。本发明专利技术制备出来的原液产品质量达到美国食物和药品管理局(FDA)的质量标准要求，并且与现在常用三步层析或者两步层析的质粒纯化方法相比，本发明专利技术方法仅仅用一步层析就可以得到符合质量标准的产品，减少了层析步骤，操作简单易于放大，提高了生产效率，降低了生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及核酸纯化，尤其是涉及质粒dna纯化方法及试剂盒。

技术介绍

1、细胞及基因治疗的快速发展为人类疑难顽固疾病的防治带来了希望，其中以表达目的基因的重组质粒为基础的非病毒转移策略具有安全性好等突出优点，更加受到研究者的青睐。质粒dna既可以作为在mrna疫苗或者重组病毒载体疫苗的原料，也可以作为核酸药物单独使用，因此对质粒dna在质量与需求量日益升高下，质粒dna的生产工艺面临着新的挑战，因此我们急需开发一种高效制备质粒dna样品的纯化工艺，并且可进行工业化放大。

2、目前质粒dna的纯化方法最常用的是cytiva经典的三步层析法：包括凝胶过滤层析主要去除裂解中和后的rna杂质；亲和层析超螺旋质粒选择性吸附、以及离子交换层析内毒素和其他杂质去除。该纯化工艺第一步所用的凝胶过滤层析中上样体积受到柱体积和料液粘度影响，上样体积最多为柱体积的30％；同时凝胶过滤层析在操作使用过程中普遍存在流速低，易塌陷的现象，生产过程耗时对较长、层析柱重装频率相对较高，这在某种程度上限制了质粒dna大规模工艺化的生产需求。

3、此外，下游生产工本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.质粒DNA纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S2中，所述乙酸钾的浓度为1～2M；所述乙酸铵的浓度为3～7M；优选地，所述乙酸铵的浓度为6～7M。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S3中，所述滤袋选自尼龙材质或PP材质；所述滤袋的孔径为50μm～400μm，所述滤袋的面积为0.3m2～0.5m2；

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S4中，所述中空纤维的膜面积为1.25m2，截留孔径为100KD～800KD；所述中空纤维过滤样品时的进样流速为200～600LMH；...

【技术特征摘要】

1.质粒dna纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在s2中，所述乙酸钾的浓度为1～2m；所述乙酸铵的浓度为3～7m；优选地，所述乙酸铵的浓度为6～7m。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在s3中，所述滤袋选自尼龙材质或pp材质；所述滤袋的孔径为50μm～400μm，所述滤袋的面积为0.3m2～0.5m2；

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在s4中，所述中空纤维的膜面积为1.25m2，截留孔径为100kd～800kd；所述中空纤维过滤样品时的进样流速为200～600lmh；

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在s5中，所述阴离子交换层析柱的填料选自nanogel 50q；

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在s5中，平衡阴离子交换层析柱缓冲液中氯化钠的浓度为0.4m～0.5m；冲洗阴离子交换层析柱缓冲液中氯化钠的浓度为0.55m～0.8m；洗脱阴离子交换层析柱缓冲液中氯化钠的浓度为0...

【专利技术属性】
技术研发人员：居维艳，吴宗圣，
申请(专利权)人：艾棣维欣苏州生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：