长链非编码RNALINC01635在制备抗肺癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种长链非编码RNA LINC01635在制备抗肺癌药物中的应用。涉及LINC10635的序列及下调LINC01635表达的靶点序列。本发明专利技术首次发现一个从未报道的长链非编码RNA—LINC01635，实验验证发现其在肺癌组织和肺癌细胞系中高表达，在肺癌细胞中下调LINC01635的表达可有效降低肺癌的增殖和迁移，该长链非编码RNA可为肿瘤的诊断和治疗提供了新的靶点。供了新的靶点。供了新的靶点。

【技术实现步骤摘要】
长链非编码RNA LINC01635在制备抗肺癌药物中的应用


[0001]本专利技术涉及抗肺癌
，具体涉及长链非编码RNA LINC01635在制备抗肺癌药物中的应用。

技术介绍

[0002]肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，是全球癌症相关死亡的主要原因。在肺癌患者中，非小细胞肺癌(NSCLC)约占85％。在过去的几十年里，尽管已经开发了多种疗法，但NSCLC患者的5年生存率仍然很低。非小细胞肺癌的这种情况是由于早期诊断困难、缺乏靶向治疗、耐药、易复发等原因造成的。因此，发现用于早期诊断和治疗的新生物标志物对于NSCLC的临床治疗至关重要。
[0003]人类基因组的生物信息学分析表明，基因组序列中只有不到2％是蛋白质编码基因，而超过70％被转录为RNA，即非编码RNA。长链非编码RNA(lncRNA)是非编码RNA的重要类别，lncRNA的长度超过200个核苷酸。据报道，lncRNA通过多种机制在各种肿瘤中发挥重要作用。通过对NSCLC和正常组织的微阵列和下一代测序数据的比较分析，数千种lncRNA在NSCLC样本中不同表达。迄今为止，尽管一些研究表明几种lncRNA可以促进或抑制NSCLC的进展，但发现新的致癌lncRNA对NSCLC的诊断和治疗至关重要。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了长链非编码RNA LINC01635在制备抗肺癌药物中的应用。
[0005]为了达到上述专利技术目的，本专利技术所采用的技术方案如下：本专利技术为长链非编码RNA LINC01635在制备抗肺癌药物中的应用，所述的长链非编码RNA含有三个转录本，第一转录本的核苷酸序列如SEQID No.1所示，第二转录本的核苷酸序列如SEQID No.2所示，第三转录本的核苷酸序列如SEQID No.3所示。
[0006]进一步地，设计下调LINC01635三个转录本的小干扰RNA(siRNA)，其核苷酸序列为：5
’‑
GGAGUUUUGGAUACAUUCU
‑3’
。
[0007]有益效果：本专利技术首次发现一个从未报道的长链非编码RNA—LINC01635，实验验证发现其在肺癌组织和肺癌细胞中高表达，在肺癌细胞中下调LINC01635的表达可有效降低肺癌细胞的增殖和迁移，该长链非编码RNA为肺癌的诊断和治疗提供了新的靶点。本专利技术还发现LINC01635在肺癌细胞的核与质中都有分布，进一步研究发现其可与miR
‑
455
‑
5p直接结合，从而调节下游一系列肿瘤相关基因的表达。
附图说明
[0008]图1为本专利技术的通过siRNA敲降LINC01635抑制肺癌细胞的增殖和迁移。
[0009]图2为本专利技术的肺癌组织样本和肺癌细胞系中验证发现LINC01635的表达上调及含有3个不同转录本。
[0010]图3为本专利技术的斑马鱼肺癌移植瘤模型中验证敲降LINC01635降低肺癌的增殖和
转移。
[0011]图4为本专利技术的LINC01635在肺癌细胞中的定位以及其可通过结合miR
‑
455
‑
5p从而调节肺癌增殖和转移相关基因表达。
具体实施方式
[0012]为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更加全面的描述，附图中给出了本专利技术的若干实施例，但是本专利技术可以通过不同的形式来实现，并不限于文本所描述的实施例，相反的，提供这些实施例是为了使对本专利技术公开的内容更加透彻全面。
[0013]实施例中使用的试剂：
[0014]异丙醇、三氯甲烷、丙三醇、无水乙醇、甲醇、β
‑
巯基乙醇、DEPC水、结晶紫、琼脂糖、LB培养基等购自南京赛泓瑞生物科技有限公司；
[0015]核酸上样缓冲液、氨苄青霉素、TAE缓冲溶液、DNA分子Marker、胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒、一步法连接试剂盒、DH5α感受态等购自天根生物技术公司。
[0016]胎牛血清、1640培养基、DMEM培养基、opti
‑
MEM减血清培养基、磷酸盐缓冲盐溶液、Lipo2000转染试剂、胰酶、青霉素
‑
链霉素溶液、Trizol、HBSS缓冲溶液、DiI荧光染料、低熔点琼脂糖、RNA later、核质分离试剂盒等购自赛默飞世尔公司。
[0017]PCR试剂盒、反转录试剂盒、定量PCR试剂盒等购自宝日医生物技术有限公司。
[0018]CCK
‑
8试剂盒、Transwell、6孔板(转染)、24孔板(transwell)、96孔板(CCK8)、培养瓶、培养皿、50ml离心管、15ml离心管(细胞培养)、1.5mL离心管(转染)、5ml离心管、0.2mL PCR管等购自
[0019]PCR试剂盒、反转录试剂盒、qPCR试剂盒等购自宝日医生物技术(北京)有限公司。
[0020]实施例中采用的具体方法：
[0021]在肺癌临床组织样本中检测LINC01635的表达水平
[0022]肺癌患者的手术样本通过解剖后分离肺癌组织和癌旁组织，并置入RNA later溶液中，并与
‑
20度保存。收集一定数量的样本后，取出组织各自剪成米粒大的小块，并使用液氮研磨，研磨后加入Trizol提取组织的总RNA，利用反转录试剂盒通过随机引物获得cDNA，通过qPCR方法比较LINC01635在肺癌组织和癌旁组织中的表达水平。
[0023]在肺癌细胞系中检测LINC01635的表达水平
[0024]使用Trizol提取不同的肺癌细胞系及正常的肺上皮细胞的总RNA，利用反转录试剂盒通过随机引物获得cDNA，通过qPCR方法比较LINC01635在肺癌细胞系和正常肺上皮细胞中的表达水平。
[0025]LINC01635转录本的检测
[0026]利用反转录试剂盒通过随机引物获得A549肺癌细胞的cDNA，通过ENSEMBL和NCBI中已报道的cDNA克隆BC039533设计扩增LINC01635较长片段的引物，通PCR方法扩增获得特异性条带，将特异性条带克隆至pMD19
‑
T载体中，测序分析LINC01635表达的不同转录本。
[0027]肺癌细胞中敲降LINC01635后检测细胞增殖和迁移
[0028]根据克隆的LINC01635不同转录本，选取公共序列从通用生物设计并合成siRNA以及对照siRNA，使用Lipofectamine 2000将设计的siRNA转染至肺癌细胞系中，转染24小时后通过qPCR检测敲降效率；转染siRNA后，将2000个肺癌细胞铺到96孔板中，每个孔中加入
10uL的CCK
‑
8试剂，2个小时后通过microplate reader在OD 450nm下读数，之后每24小时读数一次，一直检测到96小时，然后分析细胞增殖水平；转染siRNA后，使用无血清的培养基重悬肺癌细胞，使用8
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.长链非编码RNA LINC01635在制备抗肺癌药物中的应用，其特征在于：所述的长链非编码RNA含有三个转录本，第一转录本的核苷酸序列如SEQID No.1所示，第二转录本的核苷酸序列如SEQID No.2所示，第三转录本的核苷酸序列如SEQID No.3所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：设计同时针对三个转录本...

【专利技术属性】
技术研发人员：左扬松，沈文沂，濮娟，顾珊烨，孙静，高霞，
申请(专利权)人：南京歆佳医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：