一种用于高体鰤性别检测的miRNA及试剂盒与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于高体鰤性别检测的miRNA及试剂盒与应用。所述用于高体鰤性别检测的miRNA，其核酸序列如Seq ID No.1所示或为Seq ID No.1中所示的核酸序列经修饰、取代、缺失或添加至少一个碱基获得的核酸序列。所述用于高体鰤性别检测的miRNA，能够区分高体鰤雌鱼和高体鰤雄鱼，是具有特异性表达的性别标签。所述用于高体鰤性别检测的miRNA，在高体鰤雄鱼样本中的表达量较高，而在高体鰤雌鱼样本中的表达量较低。依据miRNA定量分析结果，进行高体鰤雌鱼和高体鰤雄鱼的判定。高体鰤雌鱼和高体鰤雄鱼的判定。

【技术实现步骤摘要】
一种用于高体鰤性别检测的miRNA及试剂盒与应用


[0001]本专利技术涉及鱼类生物技术相关
，尤其是涉及一种用于高体鰤性别检测的miRNA及试剂盒与应用。

技术介绍

[0002]高体鰤(Seriola dumerili)是一种肉质好，生长速度快，营养价值高的世界性深远海经济鱼类。高体鰤是雌雄异体鱼类，但表型没有显著的性别二态性，因此难以从鱼体表面直接判断鱼的性别。此外，在人工养殖条件下，高体鰤表现出严重的生殖功能障碍，由于高体鰤性别鉴定困难，极大影响了高体鰤的催产繁育工作，严重制约了高体鰤的工厂化养殖。
[0003]鱼类性别鉴定有多种方法：生理解剖观察、性腺切片、性腺细胞观察、雌性特异分子标记等。有些方法虽然简单易行，但是结果并不十分准确，有些方法还不得不剖杀鱼。
[0004]因此，开发鉴定高体鰤雌鱼和雄鱼的方法不仅具有理论意义，而且也具有生产价值和市场价值。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的第一个技术问题是：
[0006]提供一种miRNA。所述miRNAs具有在高体鰤雌鱼和雄鱼中显著差异表达的特点，是特异的分子识别标记。
[0007]本专利技术所要解决的第二个技术问题是：
[0008]提供一种所述miRNA相关的生物材料。
[0009]本专利技术所要解决的第三个技术问题是：
[0010]提供一种用于高体鰤性别检测的特异性引物组。
[0011]本专利技术所要解决的第四个技术问题是：
[0012]提供一种高体鰤性别检测试剂盒。
[0013]本专利技术所要解决的第五个技术问题是：
[0014]提供一种用于高体鰤性别检测的miRNA的筛选方法。
[0015]为了解决所述第一个技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0016]一种miRNA，所述miRNA的核酸序列如Seq ID No.1所示或为Seq ID No.1中所示的核酸序列经修饰、取代、缺失或添加至少一个碱基获得的核酸序列。
[0017]所述miRNA性别标签为dre
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miR
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133b
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3p。
[0018]所述用于高体鰤性别检测的miRNA，在高体鰤雄鱼样本中的表达量较高，而在高体鰤雌鱼样本中的表达量较低。依据miRNA定量分析结果，进行高体鰤雌鱼和高体鰤雄鱼的判定。
[0019]根据本专利技术的一种实施方式，本专利技术的高体鰤性别检测的miRNA，来源于1龄左右的高体鰤的血清外泌体，需要注意的是筛选出的性别标记是转录水平的miRNA标志物，具有
时空特异性。
[0020]根据本专利技术的实施方式，所述技术方案中的一个技术方案至少具有如下优点或有益效果之一：
[0021]所述用于高体鰤性别检测的miRNA，能够区分高体鰤雌鱼和高体鰤雄鱼，是具有特异性表达的性别标签。所述用于高体鰤性别检测的miRNA，在高体鰤雄鱼样本中的表达量较高(表达量等于或高于14)，而在高体鰤雌鱼样本中的表达量较低(表达量低于14)。依据miRNA定量分析结果，进行高体鰤雌鱼和高体鰤雄鱼的判定。
[0022]本专利技术的高体鰤性别检测的miRNA，来源于高体鰤的血清外泌体，性腺和血液都是与性别密切相关的一个组织，但与取高体鰤的性腺相比，取高体鰤的血清不会使高体鰤致死，可以减少高体鰤的损失。
[0023]为了解决所述第二个技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0024]一种与所述的miRNA相关的生物材料，所述生物材料为1)～4)中任一种：
[0025]1)所述的miRNA前体；
[0026]2)所述的miRNA模拟物；
[0027]3)编码所述的miRNA或1)中所述的miRNA前体的DNA分子；
[0028]4)含有3)中所述的DNA分子的表达盒、重组载体或转基因细胞。
[0029]为了解决所述第三个技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0030]用于扩增如权利要求1所述的miRNA的引物组。
[0031]根据本专利技术的一种实施方式，所述引物组包括正向引物和反向引物，其中：
[0032]正向引物序列如Seq ID No.2所示；
[0033]反向引物序列如Seq ID No.3所示。
[0034]为了解决所述第四个技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0035]一种试剂盒，所述试剂盒包括所述的miRNA、所述的生物材料或，所述的引物组。
[0036]根据本专利技术的一种实施方式，所述试剂盒中还包括内参基因oni
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7a的定量检测引物、内参基因逆转录引物和PCR荧光定量试剂；优选地，所述内参基因oni
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7a的定量检测引物包括oni
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7a的引物的逆转录引物和oni
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7a的引物；更优选地，所述oni
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7a的引物的逆转录引物的核酸序列如Seq ID No.4所示。
[0037]根据本专利技术的一种实施方式，所述oni
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7a的引物包括正向引物和反向引物，其中：
[0038]正向引物序列如Seq ID No.5所示；
[0039]反向引物序列如Seq ID No.6所示。
[0040]根据本专利技术的一种实施方式，通过开发所述高体鰤性别检测试剂盒，并设计了针对该标签的扩增引物，从而使得高体鰤性别检测变得方便快捷、简单高效。
[0041]本专利技术还提供所述的miRNA、所述的生物材料、所述的引物组或所述的试剂盒在制备高体鰤性别检测试剂中的应用。
[0042]本专利技术还提供所述的miRNA、所述的生物材料、所述的引物组，或所述的试剂盒在高体鰤养殖中的应用。
[0043]为了解决所述第五个技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0044]一种用于高体鰤性别检测的miRNA的筛选方法，包括以下步骤：
[0045]对高体鰤血清外泌体small RNA进行测序、过滤与分析，筛选出高体鰤性别检测的microRNA。
[0046]根据本专利技术的一种实施方式，用于高体鰤性别检测的miRNA的筛选方法，具体包括以下步骤：
[0047]S1对高体鰤血清外泌体small RNA进行测序分析，得到clean reads；
[0048]S2对clean reads进行比对注释，统计已知miRNA并预测新的miRNA；
[0049]S3对S2中统计得到的已知miRNA进行差异分析，再对差异表达的miRNA进行GO和KEGG富集分析，经过样品相关性匹配，筛选出候选miRNAs生物标记物；
[0050]S4将候选标签miRNAs按照以下四个标准进行过滤：(1)在两种样品中表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种miRNA，其特征在于：所述miRNA的核酸序列如Seq ID No.1所示或为Seq ID No.1中所示的核酸序列经修饰、取代、缺失或添加至少一个碱基获得的核酸序列。2.与权利要求1所述的miRNA相关的生物材料，其特征在于：所述生物材料为1)～4)中任一种：1)权利要求1所述的miRNA前体；2)权利要求1所述的miRNA模拟物；3)编码权利要求1所述的miRNA或1)中所述的miRNA前体的DNA分子；4)含有3)中所述的DNA分子的表达盒、重组载体或转基因细胞。3.用于扩增如权利要求1所述的miRNA的引物组。4.根据权利要求3所述的引物组，其特征在于：所述引物组包括正向引物和反向引物，其中：正向引物序列如Seq ID No.2所示；反向引物序列如Seq ID No.3所示。5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的miRNA、权利要求2所述的生物材料或，权利要求3或4所述的引物组。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括内参基因oni
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7a的定量检测引物、内参基因逆转录引物和PCR荧光定量试剂；优选地，所述内参基因oni
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7a的...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵娜，张博，朱春华，邓秋霞，朱旭枫，黄洋，王秋梅，茹笑影，胡琴，
申请(专利权)人：南方海洋科学与工程广东省实验室湛江，
类型：发明
国别省市：