抑制蜜蜂Rho1基因的siRNA及其应用制造技术

抑制蜜蜂Rho1基因的siRNA及其应用，本发明专利技术提供了可明显抑制Rho1基因转录的siRNA，通过向产卵蜂王腹部注射该siRNA可稳定获得小体积的蜜蜂受精卵，解决了现有的科研活动中难以大量获取小体积蜜蜂受精卵的难题。大量获取小体积蜜蜂受精卵的难题。大量获取小体积蜜蜂受精卵的难题。

【技术实现步骤摘要】
抑制蜜蜂Rho1基因的siRNA及其应用


[0001]本专利技术涉及生物技术，具体涉及抑制蜜蜂Rho1基因的siRNA及其应用。

技术介绍

[0002]蜜蜂不仅具有重要经济价值和生态价值，也是生物学研究的重要模式生物。蜜蜂作为一种真社会性昆虫具有精细的社会结构和丰富的社会行为，尤其是存在生殖分工，即雌性蜂王专司产卵，而后代的哺育工作由其它雌性共同承担。生殖是生活史的重要一环，是为繁衍后代而进行的“投资”行为，而自然选择总是青睐那些能够优化“成本”和“效益”平衡，提高自身在生态位中适应性的物种和个体。因此，生殖投资要求母体能够根据外部环境条件和自身的生理状态动态调整分配给后代的资源以达到后代以及母体自身适应性的最大化。在蜂群中，蜂王和工蜂在生殖行为中既相互配合、又相互影响，共同保证蜂群的生存和发展，为社会性生物的生殖调控研究提供了很好的模型。
[0003]蜂王在体积较大的巢房中产下的受精卵明显比在较小的巢房中产下的卵大，在相同的饲养条件下大卵发育成的蜜蜂体重更重，并且有更多的卵巢管。探明大卵和小卵在分子水平上的差异以及发育成的蜜蜂在生理机能上的差异将对蜜蜂健康养殖具有现实的指导意义。然而，如何获得稳定的获得大量的、具有大小显著差异的蜜蜂受精卵从而为后续研究提供生物材料这一问题尚未解决。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于一种抑制蜜蜂Rho1基因的siRNA，用于稳定获得小体积蜜蜂受精卵。
[0005]为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案具体如下：
[0006]抑制蜜蜂Rho1基因的siRNA，所述siRNA包括下列四条序列：
[0007]S1 siRNA，其正义链为：5'
‑
GGCAGCCAUUAGAAAGAAATT
‑
3'，其反义链为5'
‑
UUUCUUUCUAAUGGCUGCCTT
‑
3'；
[0008]S2 siRNA，其正义链为5'
‑
GCCCAAAUGUGCCCAUUAUTT
‑
3'，其反义链为5'
‑
AUAAUGGGCACAUUUGGGCTT
‑
3'；
[0009]S3 siRNA，其正义链为5'
‑
GGAAGGUAUUAGGGAAGUATT
‑
3'，其反义链为5'
‑
UACUUCCCUAAUACCUUCCTT
‑
3'；
[0010]S4 siRNA，其正义链为5'
‑
GAUGUUGGCUCCUAUAAUUTT
‑
3'，其反义链为5'
‑
AAUUAUAGGAGCCAACAUCTT
‑
3'。
[0011]本专利技术还提供了上述的抑制蜜蜂Rho1基因的siRNA在调控蜜蜂受精卵大小中的应用。
[0012]优选的，所述应用是减小蜜蜂受精卵体积。
[0013]本专利技术还提供了一种小体积蜜蜂受精卵的获取方法，包括：在产卵蜂王的第4
‑
5腹节注射权利要求1中所述4种siRNA的混合物，待产卵蜂王苏醒后放回原蜂群继续产卵即得
小体积蜜蜂受精卵。
[0014]优选的，包括：将产卵蜂王从蜂群中取出，用二氧化碳麻醉产卵蜂王，在产卵蜂王的第4
‑
5腹节注射权利要求1中所述4种siRNA的混合物，待产卵蜂王苏醒后放回原蜂群，在产卵蜂王产卵后，收集所产新卵即得小体积蜜蜂受精卵。
[0015]优选的，所述4种siRNA的混合物的注射量是1
‑
3μl/只。
[0016]优选的，所述混合物是4种siRNA的等量混合物，4种siRNA等量混合物的终浓度是1μg/μl。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的有益技术效果：
[0018]本专利技术提供了可明显抑制Rho1基因转录的siRNA，通过向产卵蜂王腹部注射该siRNA可稳定获得小体积的蜜蜂受精卵，解决了现有的科研活动中难以大量获取小体积蜜蜂受精卵的难题。
附图说明
[0019]图1是本专利技术实施例1中各组蜂王卵巢中Rho1基因的转录水平对比图；
[0020]图2是本专利技术实施例2中产卵蜂王在注射前后所产受精卵实物对比图；
[0021]图3是本专利技术实施例2中产卵蜂王在注射前后所产受精卵体积大小统计结果对比图；
[0022]图4是本专利技术实施例2中产卵蜂王在注射前后卵巢中Rho1基因的转录水平对比图。
具体实施方式：
[0023]下面将结合附图和具体实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。下列实施方式中，未注明具体条件的实验方法，通常按常规条件，如《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克，D.W.拉塞尔著，黄培堂，汪嘉玺，朱厚础，等译.第3版，北京：科学出版社，2002)中所述的方法进行。
[0024]实施例1
[0025]蜜蜂Rho1基因的siRNA为4条(S1，S2，S3，S4)分别为：正义链序列为S1
‑
F所示的核苷酸序列或反义链序列为S1
‑
R所示的核苷酸序列；正义链序列为S2
‑
F所示的核苷酸序列或反义链序列为S2
‑
R所示的核苷酸序列；正义链序列为S3
‑
F所示的核苷酸序列或反义链序列为S3
‑
R所示的核苷酸序列；正义链序列为S4
‑
F所示的核苷酸序列或反义链序列为S4
‑
R所示的核苷酸序列。
[0026]1、siRNA分子和Rho1基因实时定量PCR引物的准备
[0027]在NCBI网(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)找出蜜蜂Rho1基因序列(LOC409910，SEQ ID NO.1)，设计并合成四对siRNA。同时合成一对无关对照siRNA(scramble siRNA)。
[0028]S1 siRNA:
[0029]正义链(SEQ ID NO.2)：5'
‑
GGCAGCCAUUAGAAAGAAATT
‑
3'(S1
‑
F)
[0030]反义链(SEQ ID NO.3)：5'
‑
UUUCUUUCUAAUGGCUGCCTT
‑
3'(S1
‑
R)
[0031]S2 siRNA:
[0032]正义链(SEQ ID NO.4)：5'
‑
GCCCAAAUGUGCCCAUUAUTT
‑
3'(S2
‑
F)
[0033]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抑制蜜蜂Rho1基因的siRNA，其特征在于，所述siRNA包括下列四条序列：S1 siRN，其正义链为：5'
‑
GGCAGCCAUUAGAAAGAAATT
‑
3'，其反义链为5'
‑
UUUCUUUCUAAUGGCUGCCTT
‑
3'；S2 siRN，其正义链为：5'
‑
GCCCAAAUGUGCCCAUUAUTT
‑
3'，其反义链为5'
‑
AUAAUGGGCACAUUUGGGCTT
‑
3'；S3 siRNA，其正义链为：5'
‑
GGAAGGUAUUAGGGAAGUATT
‑
3'，其反义链为5'
‑
UACUUCCCUAAUACCUUCCTT
‑
3'；S4 siRNA，其正义链为：5'
‑
GAUGUUGGCUCCUAUAAUUTT
‑
3'，其反义...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩宾，徐书法，孟丽峰，胡菡，魏俏红，康伟鹏，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：