【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】加条形码的XTEN多肽及其组合物以及其制备和使用方法
[0001]序列表
[0002]本申请含有序列表，所述序列表已以ASCII格式电子提交，并且在此以引用的方式全文并入。于2020年11月6日创建的所述ASCII副本命名为20
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1761
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WO_Sequence_Listing_ST25.txt，且大小为1494字节。
技术介绍
[0003]多肽可以以导致多肽混合物的方式产生。多肽混合物经常可以包括全长多肽，连同其大小变体(例如，截短)。与所需全长产物在大小方面不同的变体的存在可以影响多肽原料药(drug substance)的生物学行为，潜在地影响多肽原料药的安全性和/或功效。例如，用于癌症治疗的基于蛋白质的前药可以被改造为具有肿瘤靶向激活机制。更具体而言，全长治疗性蛋白质可以无活性的(非细胞毒性的)前药形式产生且施用，所述前药形式通过在预期生物侧(例如，肿瘤)处优先去除前药多肽的一部分而转换为活性药物。全长构建体的截短变体可以丧失保护序列并变得细胞毒性的(活性的)，从而“污染”前药组合物并产生具有在预期生物学位点外非有意活性的组分的混合物。在一些情况下，此类较短长度的变体可以造成更大的免疫原性风险，对于肿瘤细胞具有更少的选择性毒性，或与全长蛋白质相比，显示更不期望的药代动力学概况(例如，导致治疗窗变窄)，或在预期部位外(例如在健康组织中)在受体中有害地具有非预期效应。结果，蛋白质结构变化的检测和定量对于评价生物治疗剂的生物学性质(例如临床安全性和药理功效)和开发新的生物治疗剂(例如具...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含延伸重组多肽(XTEN)的多肽，其包含：(a)延伸重组多肽(XTEN)，其包含(i)一组非重叠序列基序，其中所述组的每个非重叠序列基序在所述XTEN多肽中重复至少两次；和(ii)在所述XTEN多肽内仅出现一次的额外的非重叠序列基序；和(b)在被蛋白酶部分或完全消化后可从所述多肽中释放的第一条形码片段，其中所述第一条形码片段是所述XTEN多肽的一部分，其包含在所述XTEN多肽内仅出现一次并且在序列和分子量方面不同于所述多肽被所述蛋白酶完全消化后可从所述多肽中释放的所有其它肽片段的序列基序；其中所述条形码片段不包括所述多肽的N末端氨基酸或C末端氨基酸。2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述条形码片段不包括紧邻所述XTEN多肽中的另一个谷氨酸的谷氨酸。3.根据权利要求1
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2中任一项所述的多肽，其中所述条形码片段具有在其C末端处的谷氨酸。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的多肽，其中所述条形码片段具有之前紧为谷氨酸残基的N末端氨基酸。5.根据权利要求4所述的多肽，其中在所述N末端氨基酸之前的所述谷氨酸残基并不紧邻另一个谷氨酸残基。6.根据权利要求1
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4中任一项所述的多肽，其中所述条形码片段不包括在除所述条形码片段的C末端外的位置处的谷氨酸残基，除非所述谷氨酸紧随其后为脯氨酸。7.根据权利要求1
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6所述的多肽，其中所述条形码片段定位在距离所述多肽的N末端或C末端10个氨基酸至150个氨基酸。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的多肽，其中所述一组非重叠序列基序的序列基序通过SEQ ID NO:182
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203和1715
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1722进行鉴定。9.根据权利要求8所述的多肽，其中所述一组非重叠序列基序的序列基序通过SEQ ID NO:186
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189进行鉴定。10.根据权利要求9所述的多肽，其中所述一组非重叠序列基序包含通过SEQ ID NO:186
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189鉴定的序列基序中的至少两个、至少三个或所有四个。11.一种包含延伸重组多肽(XTEN)的多肽，其包含在被蛋白酶消化后可从所述多肽中释放的第一条形码片段，所述第一条形码片段是所述XTEN多肽的一部分，并且在序列和分子量方面不同于所述多肽被蛋白酶完全消化后可从所述多肽中释放的所有其它肽片段；并且其中所述条形码片段：(i)不包括所述多肽的N末端氨基酸或C末端氨基酸；(ii)不包括紧邻所述XTEN多肽中的另一个谷氨酸的谷氨酸；(iii)具有在其C末端处的谷氨酸；(iv)具有之前紧为谷氨酸残基的N末端氨基酸；并且(v)定位在距离所述多肽的N末端或C末端10个氨基酸至125个氨基酸。12.根据权利要求11所述的多肽，其中在所述N末端氨基酸之前的所述谷氨酸残基并不紧邻另一个谷氨酸残基。
13.根据权利要求11或12所述的多肽，其中所述条形码片段不包括在除所述条形码片段的C末端外的位置处的谷氨酸残基，除非所述谷氨酸紧随其后为脯氨酸。14.根据权利要求11所述的多肽，其中所述XTEN多肽包含多个非重叠序列基序，其中所述序列基序各自的长度为9至14个氨基酸。15.根据权利要求12所述的多肽，其中所述一组非重叠序列基序的序列基序通过SEQ ID NO:182
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203和1715
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1722进行鉴定。16.根据权利要求15所述的多肽，其中所述一组非重叠序列基序的序列基序通过SEQ ID NO:186
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189进行鉴定。17.根据权利要求16所述的多肽，其中所述一组非重叠序列基序包含序列基序SEQ ID NO:186
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189中的至少两个、至少三个或所有四个。18.根据权利要求1
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17中任一项所述的多肽，其中所述XTEN多肽的至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸残基是甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸盐(E)或脯氨酸(P)。19.根据权利要求1
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17中任一项所述的多肽，其中所述XTEN多肽的长度为150至3000个氨基酸。20.根据权利要求19所述的多肽，其中所述XTEN多肽的长度为150至1000个氨基酸。21.根据权利要求1
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20中任一项所述的多肽，其中所述条形码片段定位于所述多肽的N末端的200、150、100或50个氨基酸内。22.根据权利要求1
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21中任一项所述的多肽，其中所述条形码片段定位于距离所述蛋白质的N末端10至200、30至200、40至150、或50至100个氨基酸之间。23.根据权利要求1
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22中任一项所述的多肽，其中所述条形码片段定位于所述多肽的C末端的200、150、100或50个氨基酸内。24.根据权利要求23所述的多肽，其中所述条形码片段定位于距离所述蛋白质的C末端10至200、30至200、40至150、或50至100个氨基酸之间。25.根据权利要求1
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24中任一项所述的多肽，其中所述条形码片段的长度为至少4个氨基酸。26.根据权利要求1
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24中任一项所述的多肽，其中所述条形码片段的长度为4至20、5至15、6至12、或7至10个氨基酸。27.根据权利要求1
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26中任一项所述的多肽，其中所述条形码片段通过SEQ ID No:8020
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8030(BAR001
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BAR011)进行鉴定。28.根据权利要求1
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27中任一项所述的多肽，其中所述多肽还包含第二条形码片段，其中所述第二条形码片段是所述XTEN多肽的一部分，其包含在所述XTEN多肽内仅出现一次并且在序列和分子量方面不同于所述多肽被所述蛋白酶完全消化后可从所述多肽中释放的所有其它肽片段的序列基序。29.根据权利要求28所述的多肽，其中所述多肽还包含第三条形码片段，其中所述第三条形码片段是所述XTEN多肽的一部分，并且在序列和分子量方面不同于所述多肽被所述蛋白酶完全消化后可从所述多肽中释放的所有其它肽片段。30.根据权利要求1
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29中任一项所述的多肽，其中所述XTEN多肽与通过SEQ ID NO:8001
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8019鉴定的序列具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的
序列同一性。31.根据权利要求1
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31中任一项所述的多肽，其中所述XTEN多肽的长度为至少200、至少250、至少300、至少350、至少400、至少450或至少500个氨基酸。32.一种生物活性多肽，其与根据权利要求1
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31所述的多肽连接。33.根据权利要求32所述的生物活性多肽，其中所述XTEN多肽具有关于所述生物活性多肽的近端和远端，其中所述近端相对于所述远端定位更接近于所述生物活性多肽，并且其中所述条形码片段定位于所述XTEN多肽的区域内，如从所述远端测量的，所述区域延伸所述XTEN多肽的长度的5％至50％、7％至40％、或10％至30％。34.根据权利要求32或33所述的生物活性多肽，其还包含在被所述蛋白酶消化后可从所述多肽中释放的一个或多个参考片段，其中所述一个或多个参考片段各自包含所述生物活性多肽的一部分。35.根据权利要求34所述的生物活性多肽，其中所述一个或多个参考片段是在序列和分子量方面不同于所述多肽被所述蛋白酶消化后可从所述多肽中释放的所有其它肽片段的单个参考片段。36.根据权利要求32
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35中任一项所述的生物活性多肽，其还包含定位于所述XTEN多肽和所述生物活性多肽之间的第一释放区段(RS1)。37.根据权利要求36所述的生物活性多肽，其中所述RS1包含与本文表8a
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8b中鉴定的序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的氨基酸序列。38.根据权利要求32
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37中任一项所述的生物活性多肽，其中所述生物活性多肽在本文中通过表4a
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4h和6a
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6f中的任何一种序列或序列组合进行鉴定。39.根据权利要求32
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38中任一项所述的生物活性多肽，其中与未连接至任何XTEN多肽的所述生物活性多肽相比，所述多肽具有至少两倍的终末半衰期。40.根据权利要求32
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39中任一项所述的生物活性多肽，其中与未连接至任何XTEN多肽的所述生物活性多肽相比，所述多肽是更少免疫原性的，其中免疫原性通过在向人或动物施用可比较剂量后，测量与所述生物活性多肽选择性结合的IgG抗体的产生来确定。41.根据权利要求32
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40中任一项所述的生物活性多肽，其中所述多肽在生理条件下显示出大于约6的表观分子量因子。42.根据权利要求32
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41中任一项所述的生物活性多肽，其还包含第二XTEN多肽，其中所述第一XTEN多肽定位于所述生物活性多肽的N末端，并且所述第二XTEN多肽定位于所述生物活性多肽的C末端。43.根据权利要求42所述的生物活性多肽，其还包含定位于所述生物活性多肽和所述第二XTEN之间的第二释放区段(RS2)。44.根据权利要求43所述的生物活性多肽，其中RS1和RS2序列相同。45.根据权利要求43所述的生物活性多肽，其中RS1和RS2序列不同。46.根据权利要求43
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45中任一项所述的生物活性多肽，其中所述RS1和RS2各自是用于被多重蛋白酶在每个释放区段序列内的一个、两个或三个切割位点处切割的底物。47.根据权利要求42
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46中任一项所述的生物活性多肽，其中所述多肽包含进一步的条形码片段，其是所述第二XTEN的一部分，并且在序列和分子量方面不同于所述多肽被所述
蛋白酶后完全消化后可从所述多肽中释放的所有其它肽片段。48.根据权利要求47所述的生物活性多肽，其中所述进一步的条形码片段不包括所述多肽的C末端氨基酸。49.根据权利要求47或权利要求48所述的生物活性多肽，其中所述进一步的条形码片段包含在其C末端处的谷氨酸残基。50.根据权利要求47
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49中任一项所述的生物活性多肽，其中所述第二XTEN的进一步的条形码片段定位于所述多肽的C末端200、150、100或50个氨基酸内。51.根据权利要求47
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50中任一项所述的生物活性多肽，其中所述第二XTEN的进一步的条形码片段定位于距离所述多肽的C末端10至200、30至200、40至150、或50至100个氨基酸之间。52.根据权利要求47
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51中任一项所述的生物活性多肽，其中所述进一步的条形码片段的长度为4至20、5至15、6至12、或7至10个氨基酸。53.根据权利要求47
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52中任一项所述的生物活性多肽，其中所述进一步的条形码片段通过SEQ ID No:8020
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8030(BAR001
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BAR011)进行鉴定。54.根据权利要求47
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53中任一项所述的生物活性多肽，其还包含一组条形码片段，所述一组条形码片段包括进一步的条形码片段和至少一个另外的条形码片段，其中所述一组条形码片段中的每个条形码片段是所述第二XTEN多肽的一部分，并且在序列和分子量方面不同于所述多肽被所述蛋白酶完全消化后可从所述多肽中释放的所有其它肽片段。55.根据权利要求42
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55中任一项所述的生物活性多肽，其中所述第二XTEN通过SEQ ID NO:8001
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8019进行鉴定。56.根据权利要求47
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55中任一项所述的生物活性多肽，其中所述进一步的条形码片段不包括紧邻所述多肽中的另一个谷氨酸残基的谷氨酸残基。57.根据权利要求42
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56中任一项所述的生物活性多肽，其中所述第二XTEN多肽的至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸残基是甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸盐(E)或脯氨酸(P)。58.根据权利要求42
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57中任一项所述的生物活性多肽，其中所述第一XTEN多肽中的氨基酸总数和所述第二XTEN多肽中的氨基酸总数之和为至少300、至少350、至少400、至少500、至少600、至少700或至少800个氨基酸。59.根据权利要求42
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58中任一项所述的生物活性多肽，其中所述第二XTEN多肽包含多个非重叠序列基序，其中所述第二XTEN多肽中的每个序列基序的长度为9至14个氨基酸。60.根据权利要求59所述的生物活性多肽，其中对于所述第二XTEN多肽，所述多个非重叠序列基序的序列基序通过SEQ ID NO:182
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203和1715
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1722进行鉴定。61.根据权利要求60所述的生物活性多肽，其中所述多个非重叠序列基序的序列基序通过SEQ ID NO:186
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189进行鉴定。62.根据权利要求59或权利要求60所述的生物活性多肽，其中对于所述第二XTEN多肽，所述多个非重叠序列基序包含下述基序中的至少两个、至少三个或所有四个：SEQ ID NO:186
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189。63.根...
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