细胞因子结合物制造技术

本发明专利技术涉及包含与延伸重组多肽(XTEN)连接的生物活性蛋白质(诸如细胞因子)的组合物，编码所述组合物的分离核酸以及含有所述核酸的载体和宿主细胞，以及使用此类组合物治疗相关病症和病况的方法。关病症和病况的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞因子结合物
序列表
[0001]序列表的计算机可读形式随此申请以电子方式提交申请且以全文引用的方式并入本申请中。序列表包含在2021年6月14日创建的文件中，其文件名为“776
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601_20
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1836
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WO_ST25_FINAL.txt”且大小为988kb。参考陈述
[0002]本申请要求于2020年6月25日提交的美国临时专利申请第63/044,335号，标题为“细胞因子结合物(CYTOKINE CONJUGATES)”；于2021年6月7日提交的美国临时专利申请第63/197,875号，标题为“细胞因子结合物(CYTOKINE CONJUGATES)”；及于2021年6月7日提交的美国临时专利申请第63/197,944号，标题为“细胞因子结合物(CYTOKINE CONJUGATES)”的优先权，以上所有美国临时专利申请的全部内容以引用的方式并入本文中。

技术介绍

[0003]细胞因子可用于治疗多种疾病或病况，诸如癌症、发炎性病况、自体免疫性病况、类风湿性关节炎、多发性硬化、重症肌无力、全身性红斑狼疮、阿尔茨海默氏症(Alzheimer's disease)、精神分裂症、病毒感染(例如，慢性C型肝炎、AIDS)、过敏性哮喘、视网膜神经退化性过程、代谢病症、胰岛素抗性及糖尿病性心肌症。然而，细胞因子的治疗效用可能由于细胞毒性、短半衰期、需要重复或频繁给药及引起患者的非所需免疫反应的潜在性而受到限制。
[0004]临床环境中的大部分细胞因子产品极其有效。诸如IL
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2及IL
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12及IFN
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a的白介素为细胞因子，其主要由免疫系统细胞产生以信号传导及组织免疫反应。在癌症中，细胞因子促进免疫系统将肿瘤细胞识别为异常及对宿主有害的能力。细胞因子进一步增加TME增殖，增强其存活且引导多种免疫细胞类型来浸润TME且促进有效抗肿瘤免疫反应，导致肿瘤细胞杀死及肿瘤清除。此限制细胞因子在治疗环境中，尤其在抗癌适应症中的实际应用。
[0005]尤其白介素
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12(IL12)已公认为具有作为用于肿瘤免疫疗法的理想有效负载的潜能。其可活化免疫系统的先天性及适应性组分。IL12刺激IFN
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γ的产生且活化NK细胞以及CD8+及CD4+T细胞。另外，此细胞因子亦诱导抗血管生成趋化因子、肿瘤细胞外基质的重塑及MHC I类分子表达的刺激，使其成为极具吸引力的抗癌候选物。然而，虽然研究人员已展示令人鼓舞的临床前资料，但此细胞因子的严重毒性概况已阻止了剂量递增，且显著抑制了作为抗癌剂的临床潜力。尽管自1996年首次进行人类IL12临床试验以来，多个临床试验一直在进行，但FDA批准的IL12产品仍然遥遥无期。
[0006]此对可克服治疗指数挑战以使用细胞因子作为抗癌剂的新策略提出了相当大的未满足需求。若如IL12的细胞因子的效力可被安全地利用且可控制毒性挑战，则这些药剂可充当针对广泛范围的癌症的潜在用途的强大治疗剂。

技术实现思路

[0007]本申请包括可解决一个或多个缺点或可提供一个或多个优点的细胞因子相关组
合物及相关方法。在一个方面中，本文公开一种融合蛋白，其包含：(a)延伸重组多肽(extended recombinant polypeptide，XTEN)，其特征在于：i.其包含至少12个氨基酸；ii.XTEN序列的至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸残基选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)及脯氨酸(P)；及iii.其具有4至6个选自G、A、S、T、E及P的不同氨基酸；及(b)与该XTEN连接的细胞因子。
[0008]在一些实施方案中，融合蛋白进一步包含释放区段，其中该释放区段(RS)与选自表6至表7中所阐述的序列的序列具有至少88％、至少94％或100％序列一致性。在一些实施方案中，融合蛋白具有XTEN
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RS
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细胞因子或细胞因子
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RS
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XTEN的自N端至C端的结构排列。
[0009]在一些实施方案中，细胞因子选自由白介素、趋化因子、干扰素、肿瘤坏死因子、群落刺激因子或TGF
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β超家族成员组成的群。在一些实施方案中，细胞因子为选自由以下组成的群的白介素：IL1、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、IL10、IL11、IL12、IL13、IL14、IL15、IL16及IL17。在一些实施方案中，细胞因子与选自表3或表A的序列具有至少90％序列一致性。在一些实施方案中，细胞因子为IL
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12或IL
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12变体。在一些实施方案中，细胞因子包含第一细胞因子片段(Cy1)和第二细胞因子片段(Cy2)。在一些实施方案中，Cy1及Cy2中之一者包含与白介素
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12次单元β具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列一致性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Cy1及Cy2中的另一者包含与白介素
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12次单元α具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列一致性的氨基酸序列。在一些实施方案中，第一细胞因子片段(Cy1)包含与序列SEQ ID NO.5具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列一致性的氨基酸序列。在一些实施方案中，第二细胞因子片段(Cy2)包含与序列SEQ ID NO.6具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列一致性的氨基酸序列。在一些实施方案中，细胞因子包含位于第一细胞因子片段(Cy1)和第二细胞因子片段(Cy2)之间的接头。在一些实施方案中，细胞因子为包含与SEQ ID NO.7具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列一致性的氨基酸序列的IL
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12变体。
[0010]在一些实施方案中，XTEN序列由多个非重叠序列模体组成，其中所述序列模体选自表2a至表2b的序列模体。在一些实施方案中，XTEN具有40至3000个氨基酸，或100至3000个氨基酸。在一些实施方案中，XTEN与表2a至表2b中所阐述的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％或100％序列一致性。
[0011]在一些实施方案中，其中当连接至融合蛋白中的XTEN时，细胞因子与相应细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】ID NO.6具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列一致性的氨基酸序列。18.根据权利要求13至17中任一项所述的融合蛋白，其中该细胞因子包含位于该第一细胞因子片段(Cy1)与该第二细胞因子片段(Cy2)之间的接头。19.根据权利要求18所述的融合蛋白，其中该融合蛋白包含Cy1片段，该片段包含N端处的XTEN和C端处的XTEN。20.根据权利要求18所述的融合蛋白，其中该融合蛋白包含Cy2片段，该片段包含N端处的XTEN和C端处的XTEN。21.根据权利要求18所述的融合蛋白，其中该细胞因子为包含与SEQ ID NO.7具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列一致性的氨基酸序列的IL
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12变体。22.根据权利要求1至21中任一项所述的融合蛋白，其中该XTEN序列由多个非重叠序列模体组成，其中所述序列模体选自表2a至表2b的序列模体。23.根据权利要求1至22中任一项所述的融合蛋白，其中该XTEN具有40至3000个氨基酸，或100至3000个氨基酸。24.根据权利要求1至23中任一项所述的融合蛋白，其中该XTEN与表2a至表2b中所述的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％或100％序列一致性。25.根据权利要求1至24中任一项所述的融合蛋白，其中当连接至该融合蛋白中的该XTEN时，该细胞因子与相应细胞因子受体的结合活性的特征在于半最大有效浓度(EC
50
)比当未与该XTEN连接时在体外结合分析中测定的表征该细胞因...

【专利技术属性】
技术研发人员：V，
申请(专利权)人：阿穆尼克斯制药公司，
类型：发明
国别省市：