用于鉴定中国南瓜制造技术

本发明专利技术“一种用于鉴定中国南瓜

【技术实现步骤摘要】
用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的SSR分子标记E201及其引物、试剂盒与方法


[0001]本专利技术属于生物技术辅助育种领域，特别涉及用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的SSR分子标记E201及其引物、试剂盒与方法。

技术介绍

[0002]中国南瓜(Cucurbita moschataD.)，一年生蔓生草本植物，其作为一种重要的蔬菜作物，在全球范围内广泛栽培种植。由于杂种优势的存在，杂交一代种在抗病、抗逆和果实品质等方面明显优于两亲本。但在中国南瓜杂交制种过程中，授粉期间由于母本雄花摘除不彻底或不及时，导致花粉落到母本雌花柱头上产生自交种子，从而出现假杂种，导致种子遗传纯度下降，给生产造成巨大的经济损失。因此，优良一代杂交种纯度的快速、准确鉴定成为中国南瓜生产中最为迫切解决的问题之一。
[0003]种子纯度鉴定常用的方法主要包括田间形态鉴定、同工酶鉴定和分子标记鉴定等。田间形态鉴定成本较高，周期较长，且鉴定结果还会受到环境因素的影响；同工酶鉴定准确性高，但由于其具有组织和器官特异性，应用常常受到限制。分子标记技术能够从DNA水平上揭示子代和亲本间微小的遗传差异，不受生长季节、环境条件和栽培措施的影响，可以极大的缩短鉴定时间，其中SSR标记具有多态性高，数量多，稳定性好，并且易于检测等优点，被广泛应用于纯度鉴定和分子标记辅助育种等工作中。
[0004]近年来，中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’/>由于其生长势旺，抗病抗逆性强，根系强大等优点，常被用做砧木，用于提高黄瓜、西瓜等葫芦科作物的抗逆性，推广面积日益扩大，种子需求量随之增大。为了防止人工制种过程中出现母本自交形成假杂种这一现象，急需确定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种种子纯度鉴定方法，为中国南瓜的纯度鉴定提供技术支持。

技术实现思路

[0005]基于上述领域的空白，本专利技术旨在提供一种用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种种子纯度的SSR分子标记；提供一种用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种种子纯度的PCR检测试剂盒；将所述的SSR标记应用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种真实性或种子纯度等方面，使得无需等待南瓜单株成长至果实成熟期再观察形态特征，在幼苗期即可提取DNA，根据扩增片段区分真假杂种，有效鉴定杂种纯度。
[0006]本专利技术的上述目的是通过以下技术方案来实现的：
[0007]用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的SSR分子标记E201，其特征在于，检测所述SSR分子标记E201的上游引物E201
‑
F序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物E201
‑
R序列如SEQ ID NO.4所示。
[0008]所述SSR分子标记在中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的母本
‘
823
’
基因组中的特征条带序列如SEQ ID NO.1。
[0009]所述SSR分子标记在中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的父本
‘
824
’
基因组中的特征条
带序列如SEQ ID NO.2；
[0010]优选地，所述SSR分子标记在中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种基因组的特征条带序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
[0011]一种检测用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的SSR分子标记E201的引物，其特征在于，其上游引物E201
‑
F序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物E201
‑
R序列如SEQ ID NO.4所示。
[0012]一种分子鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的引物，其特征在于，包括：一种检测用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的SSR分子标记E201的引物；所述引物的上游引物E201
‑
F序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物E201
‑
R序列如SEQ ID NO.4所示。
[0013]用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的试剂盒，其特征在于，包括：一种检测用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的SSR分子标记E201的引物；所述引物的上游引物E201
‑
F序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物E201
‑
R序列如SEQ ID NO.4所示。
[0014]所述的用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的试剂盒还包括：PCR试剂和/或电泳试剂。
[0015]一种分子鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的方法，其特征在于，采用检测用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的SSR分子标记E201的引物对候选南瓜材料进行PCR。
[0016]所述PCR的体系包括：0.75ng/μl DNA模板，正向和反向引物各5ng/μl，0.5μL/μl 2
×
3G Taq Master Mix for PAGE(Red Dye)；
[0017]优选地，所述PCR体系为：7.5ng DNA模板，正向和反向引物各50ng，5μL 2
×
3G Taq Master Mix for PAGE(Red Dye)，加双蒸水至10μl；
[0018]优选地，所述PCR的程序包括：95℃预变性3分钟；以95℃变性15秒，55℃退火15秒，72℃延伸30秒为1个循环，共35个循环；72℃保温5分钟；
[0019]优选地，所述DNA模板指候选南瓜材料的DNA。
[0020]根据所述PCR的产物的电泳结果或测序结果判别鉴定结果；
[0021]电泳结果显示2条特征条带或测序结果同时测出如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的2条序列的候选南瓜材料为中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种；
[0022]优选地，所述电泳指，将PCR产物用6％非变性聚丙烯酰胺凝胶分离；
[0023]优选地，电泳条件为150V恒功率电泳分离1h30min，电泳后银染显色。
[0024]本专利技术提供了一种所述SSR分子标记E201及其引物对E201
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的SSR分子标记E201，其特征在于，检测所述SSR分子标记E201的上游引物E201
‑
F序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物E201
‑
R序列如SEQ ID NO.4所示。2.根据权利要求1所述的用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的SSR分子标记E201，其特征在于，所述SSR分子标记在中国南瓜
‘
中蔬砧1号
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杂交种的母本
‘
823
’
基因组中的特征条带序列如SEQ ID NO.1。3.根据权利要求1或2所述的用于鉴定中国南瓜
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中蔬砧1号
’
杂交种的SSR分子标记E201，其特征在于，所述SSR分子标记在中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的父本
‘
824
’
基因组中的特征条带序列如SEQ ID NO.2；和/或，所述SSR分子标记在中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种基因组的特征条带序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。4.一种检测用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的SSR分子标记E201的引物，其特征在于，其上游引物E201
‑
F序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物E201
‑
R序列如SEQ ID NO.4所示。5.一种分子鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的引物，其特征在于，包括：一种检测用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’
杂交种的SSR分子标记E201的引物；所述引物的上游引物E201
‑
F序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物E201
‑
R序列如SEQ ID NO.4所示。6.用于鉴定中国南瓜
‘
中蔬砧1号
’<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王长林，薄凯亮，段颖，邱喜岩，
申请(专利权)人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所，
类型：发明
国别省市：