一种降低新冠病毒受体ACE2表达量的表观遗传载体制造技术

本发明专利技术公开了一种可用于指示新冠病毒受体ACE2表达量的载体、细胞株及其制备方法与应用，通过表观遗传基因编辑载体CRISPRoff

【技术实现步骤摘要】
一种降低新冠病毒受体ACE2表达量的表观遗传载体


[0001]本专利技术属于基因工程和基因遗传修饰领域，具体涉及一种可用于降低新冠病毒受体ACE2 表达量的表观遗传修饰载体，本专利技术还包括相应的制备方法、应用、细胞株和试剂盒。

技术介绍

[0002]2019年底，由一种冠状病毒新毒株(2019
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nCoV，即2019新型冠状病毒)引起的疫情迅速蔓延到全国和全世界。截止到2020年8月中旬，新型冠状病毒感染的肺炎(Novel coronavirus pneumonia，NCP)在世界范围内已造成接近2000万例感染，并造成接近80万例死亡，给全世界社会、经济、政治、生活都造成了严重影响。
[0003]有研究表明：冠状病毒是通过S蛋白与宿主的受体结合，从而感染宿主细胞。冠状病毒 S蛋白的多样性高、机制复杂，β属冠状病毒的S蛋白大小以及在细胞表面与其结合的受体都各不相同。2003年给我国造成重大损失的SARS病毒也属于冠状病毒类。经研究证实， SARS
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Cov是通过细胞膜表面ACE2受体进入细胞。而我国本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降低新冠病毒受体ACE2表达量的表观遗传修饰载体，其特征在于，将表观遗传基因编辑载体CRISPRoff
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v2.1中的蓝色荧光蛋白TagBFP替换为绿色荧光蛋白EGFP的编码序列，并加上抗性基因编码序列；同时，该表观遗传修饰载体中含有能切割ACE2启动子基因组的sgRNA。2.根据权利要求1所述的表观遗传修饰载体，其特征在于，所述的抗性基因是嘌呤霉素抗性基因puroR。3.根据权利要求1所述的表观遗传修饰载体，其特征在于，所述的sgRNA的序列选自以下序列中一个或者多个：sg1：5`
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ATGACTACTCTCCACTCCAC
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3`，sg2：5`
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TGCCCAAGTAGAGAGTTTCT
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3`，sg3：5`
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AGTTTTGAATAGGTAAGTGA
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3`，sg4：5`
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GGCAAAGTCATGTATTTGGA
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3`；将上述一个或者多个sgRNA串联成成对的形式插入CRISPRoff
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v2.1中并将TagBFP替换为EGFP后得到的表观遗传基因编辑载体。4.一种用于降低新冠病毒受体ACE2表达量的表观遗传修饰载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将表观遗传基因编辑载体CRISPRoff
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v2.1中的蓝色荧光蛋白TagBFP替换为绿色荧光蛋白EGFP的编码序列；在表观遗传基因编辑载体CRISPRoff
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v2.1中加入抗性基因；将能够切割ACE2启动子基因组的sgRNA加入表观遗传基因编辑载体CRISPRoff
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v2.1中；所述的sgRNA的序列选自以下序列中一个或者多个：sg1：5`
‑
ATGACTACTCTCCACTCCAC
‑
3`，sg2：5`
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TGCCCAAGTAGAGAGTTTCT

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋明贵，刘彩云，屈飞，
申请(专利权)人：湖南丰晖生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：