一种针对CHOZN细胞高效率转染的方法技术

本发明专利技术提供一种针对CHOZN细胞高效率转染的方法，属于质粒转染技术领域，该方法包括如下步骤：步骤一、筛选转染试剂；步骤二、筛选转染程序，选出转染效率较高的几个转染程序；步骤三、确认高转染效率的重复性，选出最优转染程序。本发明专利技术打破了LONZA电转仪与LONZA细胞的绑定，通过使用MECK的CHOZN细胞和LONZA电转仪电转程序和电转试剂进行优化，筛选出一个转染效率高、细胞毒性小、可重复的转染条件，作为质粒转染CHOZN细胞的常用条件，另可选出次优条件作为备选。件作为备选。件作为备选。

【技术实现步骤摘要】
一种针对CHOZN细胞高效率转染的方法


[0001]本专利技术涉及质粒转染
，具体涉及一种针对CHOZN细胞高效率转染的方法。

技术介绍

[0002]转染是将外源性基因导入细胞内的一种技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可以分为物理介导、化学介导和生物介导三大途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于物理方法将基因导入细胞的方法；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法如较为原始的原生质体转染及各种病毒介导的转染技术。
[0003]理想的细胞转染方法，应具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术是目前转染效率最高的方法，但病毒转染方法对细胞类型有很强的选择性，且对实验室环境安全防护要求较高，在一般实验室中普及较少。
[0004]然而无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，如细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态、转染方法及操作细节。
[0005]LONZA 4D
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Nucleofector细胞核转染系统，即原德国Amaxa 4D
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Nucleofector核转系统，结合电穿孔技术和细胞特异性转染液，通过系统内置优化的转染程序，将外源基因高效导入目标细胞的细胞质中，并可直接入核，整合到细胞染色体中。LONZA 4D
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Nucleofector细胞核转染系统开发了不同宿主细胞推荐的转染试剂与转染程序代码，但目前LONZA并未对转染程序进行公开，只有购买LONZA的细胞，LONZA才会提供转染程序代码。
[0006]目前在工业界及实验室研究中，CHO系列细胞被广泛用作为外源基因的宿主细胞。带有筛选基因的常用CHO表达体系有：CHO dhfr
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和CHO GS
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。由于CHO GS
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系统转染筛选过程简单速度快且易获得高表达工程细胞株，目前选择此系统的用户越来越多。常用的CHO GS
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系统有LONZA的CHOK1SV GS
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KO和MERCK的CHOZN细胞。
[0007]因此，需要提供一种针对CHOZN细胞高效率转染的方法，以解决上述现有存在的问题。

技术实现思路

[0008]有鉴于此，本专利技术提供一种针对CHOZN细胞高效率转染的方法，打破LONZA电转仪与LONZA细胞的绑定，通过使用MECK的CHOZN细胞和LONZA电转仪电转程序和电转试剂进行优化，筛选出高效率转染的条件。
[0009]为达到上述技术效果，本专利技术提供一种针对CHOZN细胞高效率转染的方法，采用如下技术方案：
[0010]一种针对CHOZN细胞高效率转染的方法，包括如下步骤：
[0011]步骤一、筛选转染试剂
[0012]选用对应宿主细胞CHO
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K1和CHO
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S系统推荐的转染试剂盒，转染后的培养容器中
加入适量培养基并置于CO2培养箱中预培养，培养24h，取出细胞悬液检测细胞活率与转染效率，根据检测结果，选出适用的转染试剂盒；
[0013]步骤二、筛选转染程序
[0014]选用步骤一选出的适用的转染试剂盒，制备转染样品，设置一个有样品、无转染程序的空白对照，选择系统推荐优化程序，开始转染，培养24h后，取样检测活率与转染效率，根据检测结果，选出转染效率较高的几个转染程序；
[0015]步骤三、确认高转染效率的重复性，选出最优转染程序
[0016]选用步骤一选出的适用的转染试剂盒，制备转染样品，设置一个有样品、无转染程序的空白对照，手动输入步骤二选出的转染效率较高的几个转染程序，开始转染，培养24h后，取样检测活率与转染效率，根据检测结果，选出转染效率重复性很高且转染效率最高的程序为最优转染程序。
[0017]进一步的，步骤一中，对应宿主细胞CHO
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K1和CHO
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S系统推荐的转染试剂盒，即SF Cell Line 4D
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Nucleofector
TM
X Kit、SG Cell Line 4D
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Nucleofector
TM
X Kit。
[0018]进一步的，所述转染试剂盒中包括一次性电转杯或一次性16孔电转板条、Nucleofector Solution(转染试剂)、Supplement(补充试剂)、pmaxGFP Vector(绿色荧光蛋白表达质粒)。
[0019]进一步的，步骤一的具体操作如下：按照说明书中的比例将Nucleofector Solution和Supplement混匀，制备成转染试剂并平衡至室温；离心处理后的细胞，弃去全部上清液后，使用配置好的转染试剂重悬；加入pmaxGFP Vector后，转移至电转杯中开启转染程序；转染后的溶液转移至T25方瓶中，放入CO2培养箱静置培养；培养24h，取出细胞悬液检测细胞活率与转染效率；根据检测结果，选出适用的转染试剂盒。
[0020]进一步的，步骤二中，所述优化程序包括CA
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137、CM
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138、CM
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137、CM
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150、DN
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100、DS
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138、DS
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137、DS
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130、DS
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150、DS
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120、EH
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100、EO
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100、EN
‑
138、EN
‑
150和EW
‑
113。
[0021]进一步的，步骤二和步骤三中，两次转染效率差异较大，说明转染效率不稳定，则对应的转染程序舍去。
[0022]进一步的，步骤三中，转染效率重复性很高且转染效率排第二的转染程序为备选程序。
[0023]本专利技术的上述技术方案至少包括以下有益效果：本专利技术打破了LONZA电转仪与LONZA细胞的绑定，通过使用MECK的CHOZN细胞和LONZA电转仪电转程序和电转试剂进行优化，筛选出一个转染效率高、细胞毒性小、可重复的转染条件，作为质粒转染CHOZN细胞的常用条件，另可选出次优条件作为备选。
附图说明
[0024]图1为本专利技术方法流程图。
具体实施方式
[0025]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例的附图1，对本专利技术实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于所描述的本专利技术的实施例，本领域普通技术
人员所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]一种针对CHOZ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种针对CHOZN细胞高效率转染的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、筛选转染试剂选用对应宿主细胞CHO
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K1和CHO
‑
S系统推荐的转染试剂盒，转染后的培养容器中加入适量培养基并置于CO2培养箱中预培养，培养24h，取出细胞悬液检测细胞活率与转染效率，根据检测结果，选出适用的转染试剂盒；步骤二、筛选转染程序选用步骤一选出的适用的转染试剂盒，制备转染样品，设置一个有样品、无转染程序的空白对照，选择系统推荐优化程序，开始转染，培养24h后，取样检测活率与转染效率，根据检测结果，选出转染效率较高的几个转染程序；步骤三、确认高转染效率的重复性，选出最优转染程序选用步骤一选出的适用的转染试剂盒，制备转染样品，设置一个有样品、无转染程序的空白对照，手动输入步骤二选出的转染效率较高的几个转染程序，开始转染，培养24h后，取样检测活率与转染效率，根据检测结果，选出转染效率重复性很高且转染效率最高的程序为最优转染程序。2.根据权利要求1所述的针对CHOZN细胞高效率转染的方法，其特征在于，步骤一中，对应宿主细胞CHO
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K1和CHO
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S系统推荐的转染试剂盒，即SF CellLine 4D
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Nucleofector
TM
X Kit、SG Cell Line 4D
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Nucleofector
TM
X Kit。3.根据权利要求1或2所述的针对CHOZN细胞高效率转染的方法，其特征在于，所述转染试剂盒中包括一次性电转杯或一次性16孔电转板条、Nucleofector Solution(转染试剂)、Supplement(补充试剂)、pmax...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡海涛，郭勇，王锦，
申请(专利权)人：郑州创迈生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：