一种用于siRNA快速筛选的双荧光素酶报告系统的构建及其应用技术方案

本发明专利技术属于生物医学范畴中的基因治疗领域，特别是一种用于快速筛选出高效的siRNA的应用。萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双报告基因则通过共转染的“对照”作为内参为试验提供一基准线，从而可以在最大程度上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，使得数据结果更为可信。双萤光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶，两者没有种源同源性并对应不同的反应底物，故而没有交叉干扰。得益于超强的光信号和超高的信噪比，本系统被广泛用于siRNA靶基因验证。本发明专利技术通过荧光素酶偶联靶基因序列共转录，涵盖了双质粒和单质粒的双荧光素酶载体，通过与siRNA共转染，实现快速、大规模批量化筛查siRNA的效率。siRNA的效率。siRNA的效率。

【技术实现步骤摘要】
一种用于siRNA快速筛选的双荧光素酶报告系统的构建及其应用


[0001]本专利技术属于生物医学范畴中的基因治疗领域，特别是一种用于快速筛选出高效的siRNA的应用。

技术介绍

[0002]小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）长度为21
‑
22 nt，是RNAi （RNA interference）中的活性因子，能导向同源mRNA并将其降解。在哺乳动物中，siRNA有望成为一种强大的工具，不仅可以用于功能基因组学所必需的大规模基因沉默，而且可以用于治疗目的，包括抗病毒治疗。
[0003]siRNA介导的RNAi包括两个不同的siRNA序列依赖步骤：RNA诱导沉默复合体（RNA
‑
induced silencing complex，RISC）的形成和靶mRNA的识别。长双链RNA（double strands RNA，dsRNA）和复杂的发夹前体被核糖核酸酶家族Ⅲ（RNase
ꢀⅢ
）的核糖核酸内切酶（Dicer）分解为siRNA 双链片段，随后双链si本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表达双荧光素酶的双载体系统，其特征在于，所述双载体系统包括两个独立的荧光素酶核酸序列：第一段核酸序列：包括一个表达海肾荧光素酶表达盒作为内参；第二段核酸序列：包括一个表达萤火虫荧光素酶融合CDS + 3
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UTR序列表达盒作；一个和表达萤火虫荧光素酶融合5
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UTR + CDS序列表达盒。2.一种表达双荧光素酶的单载体系统，其特征在于，所述单一载体包括两个独立的荧光素酶表达盒：第一段核酸序列：包括一个表达萤火虫荧光素酶表达盒作为内参；第二段核酸序列：包括一个表达海肾荧光素酶融合CDS + 3
...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖浦豪，张睿，
申请(专利权)人：上海鼎新基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：