一种快速鉴定细胞种属的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于基因检测领域，涉及一种能够快速鉴定实验室常用细胞的种属是否为人源、小鼠源、大鼠源的试剂盒，可以用来判断细胞是否出现种属混杂的污染。本发明专利技术提供了鉴定种属的引物组合物、其应用以及一站式试剂盒，试剂盒同时附有3个种属的阴阳性样本，方便比对结果，检测速度快，引物的特异性好。使用该试剂盒可以完整的进行细胞种属鉴定实验，可以在5小时内，拿到种属鉴定结果，及时对实验进行调整。通常不需要额外操作步骤，并且快速得到种属鉴定结果。果。果。

【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定细胞种属的检测试剂盒


[0001]本专利技术属于基因检测领域，涉及一种细胞的种属鉴定试剂盒，具体而言，本专利技术提供了一种快速检测人、小鼠、大鼠细胞的种属鉴定试剂盒。

技术介绍

[0002]据统计，约有30％细胞系被交叉污染或错误辨识，因使用了交叉污染或错误辨识的细胞会导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗失败等。来自荷兰内梅亨大学的Willem Halffman和Serge Horbach发表于2017年10月12日PLoS ONE期刊上题为“The ghosts of HeLa：How cell line misidentification contaminates the scientific literature”的研究，发现3万多篇论文使用了HeLa细胞交叉污染的错误细胞系导致研究结果无效。作为实验对象的细胞系被交叉污染或错误辨识，不仅浪费大量时间、精力和金钱，还可能造成不可挽回的灾难性后果。为此，很多细胞库现在都要对提交来的细胞系进行鉴定，并对细胞系之间的交叉污染进行监测。
[0003]2015新版药典中，规定新建细胞系/株、细胞库(MCB、WCB)和生产终末细胞均应进行鉴别试验，以确认为本细胞，且无其他细胞的交叉污染。
[0004]细胞鉴别试验方法有多重，包括细胞形态、生物化学法(如同工酶试验)、免疫学检测(如同工酶试验)、免疫学检测(如组织相容性抗原、种特异性免疫血清)、细胞遗传学检测(如染色体核型、标记染色体检测)、遗传标志检测(如DNA指纹图谱，包括短串联重复序列(STR)、限制片段长度多态性(RFLP
‑
PCR)和内含子多态性(EPIC
‑
PCR)法等)以及其他方法(如杂交法、PCR法、报告基因法等)。根据《生物制品生产检定用动物细胞基质制备及鉴定规程》，应至少选择上述一种或几种方法对细胞进行种属和细胞株间及专属特性的鉴别。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是提供了一种细胞的种属鉴定试剂盒，能够对细胞进行种属和细胞株间及专属特性的鉴别。
[0006]本专利技术要解决的另一个技术问题是提供上述试剂盒在快速、准确的鉴定细胞种属方面的应用。
[0007]一方面，本专利技术提供了一种种属鉴定的引物组合物，所述的引物组合物选自以下的一种或者几种：
[0008]mouse
‑
F：ATTACAGCCGTACTGCTCCTAT(SEQ ID NO 1),
[0009]mouse
‑
R：CCCAAAGAATCAGAACAGATGC(SEQ ID NO 2),
[0010]rat
‑
F：AGACACTCTGACGACTGTCAACA(SEQ ID NO 3),
[0011]rat
‑
R：CATGGTAGAGAAAATCTGTTCCG(SEQ ID NO 4),
[0012]Human
‑
F：GTGGGCTGAAAAGCTCCCGATTAT(SEQ ID NO 5),
[0013]Human
‑
R：GTGATTCCCATTGGCCTGTTCCTC(SEQ ID NO 6),
[0014]优选地，所述的引物组合物。例如，所述的引物组合物选自以下的一对或者几对：
[0015]第一对：mouse
‑
F：ATTACAGCCGTACTGCTCCTAT和mouse
‑
R：CCCAAAGAATCAGAACAGATGC，
[0016]第一对：rat
‑
F：AGACACTCTGACGACTGTCAACA和rat
‑
R：CATGGTAGAGAAAATCTGTTCCG，
[0017]第一对：human
‑
F：GTGGGCTGAAAAGCTCCCGATTAT和Human
‑
R：GTGATTCCCATTGGCCTGTTCCTC。
[0018]小鼠扩增引物根据小鼠线粒体保守区序列设计，经NCBI Blast验证，只能匹配到小鼠源。
[0019]人源扩增引物根据人11号染色体上的酪氨酸羟化酶(TH)设计，经NCBI Blast验证，只能匹配到人源。
[0020]本专利技术在研究过程中，也尝试过其他引物，例如将SEQ ID NO 1第15位的G替换成C、同时将SEQ ID NO 2第12位的A替换成T,并不能获得特异性的条带。同样，将SEQ ID NO 3第11位的A替换成T、SEQ ID NO 4第10位的G替换成C、SEQ ID NO5第17位的C替换成G或者SEQ ID NO 6第12位的T替换成A，均不能获得本专利技术特异性好而清晰的条带。
[0021]使用本专利技术的引物组合物，扩增待检测细胞的基因组DNA，可以鉴定待检测细胞的种属来源，或者判断待检测细胞是否存大鼠、小鼠或者人类种属的细胞的种间污染。
[0022]另一方面，本专利技术提供了一种种属鉴定的试剂盒，所述的试剂盒含有上述引物组合物。
[0023]优选地，所述的试剂盒还含有PCR扩增用试剂，例如PCR缓冲液、DNA聚合酶、dNTP、ddH2O或者PCR预混液，也可以含有PCR用离心管、Tips、移液器、迷你混匀器、说明书等。。
[0024]优选地，所述的试剂盒中可以含有树脂。在本专利技术中，使用树脂提取DNA可以快速完成DNA的提取，样品损耗少、污染概率低。例如，本专利技术的一个优选例中使用chelex 100。chelex 100用于本专利技术、提取DNA的主要优点是：快速，耗时约1小时；它很简单，不涉及液体在试管之间的移动，从而减少了意外混合样品的可能性。成本很低；并且避免使用有害化学物质。
[0025]再一方面，本专利技术提供了一种鉴定细胞种属的方法，使用上述引物组合物扩增检测细胞的基因组DNA，根据检测结果鉴定待检测细胞的种属来源。
[0026]优选地，所述的方法包括以下步骤：
[0027]S1,获取检测细胞的基因组DNA，
[0028]S2,使用权利要求1的引物组合物扩增检测细胞的基因组DNA，
[0029]S3,根据检测结果鉴定待检测细胞的种属。
[0030]优选地，获取检测细胞的基因组DNA包括以下步骤：
[0031]S1.1,消化、漂洗并收集细胞，
[0032]S1.2,加入100
‑
300μl、质量体积比为5％Chelex
‑
100，震荡混匀，
[0033]S1.3,加入8
‑
100μl、浓度为20mg/μl蛋白酶K，混匀，45
‑
65℃保温2
‑
5小时，取出后震荡，
[0034]S1.4,90
‑
110℃保温5
‑
10分钟,振荡后8000
‑
15000rpm本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种种属鉴定的引物组合物，其特征在于，所述的引物组合物选自以下的一种或者几种：mouse
‑
F：ATTACAGCCGTACTGCTCCTAT，mouse
‑
R：CCCAAAGAATCAGAACAGATGC，rat
‑
F：AGACACTCTGACGACTGTCAACA，rat
‑
R：CATGGTAGAGAAAATCTGTTCCG，Human
‑
F：GTGGGCTGAAAAGCTCCCGATTAT，Human
‑
R：GTGATTCCCATTGGCCTGTTCCTC。2.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，所述的引物成对使用；所述的引物组合物选自以下的一对或者几对：第一对：mouse
‑
F：ATTACAGCCGTACTGCTCCTAT和mouse
‑
R：CCCAAAGAATCAGAACAGATGC，第一对：rat
‑
F：AGACACTCTGACGACTGTCAACA和rat
‑
R：CATGGTAGAGAAAATCTGTTCCG，第一对：uman
‑
F：GTGGGCTGAAAAGCTCCCGATTAT和Human
‑
R：GTGATTCCCATTGGCCTGTTCCTC。3.权利要求1所述的引物组合物的应用，其特征在于，使用所述的引物组合物扩增待检测细胞的基因组DNA，鉴定待检测细胞的种属来源，或者判断待检测细胞是否存大鼠、小鼠或者人类种属的细胞的种间污染。4.一种种属鉴定的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有权利要求1的引物组合物。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有Chelex
‑
100。6.一种鉴定细胞种属的方法，其特征在于，使用权利要求1的引物组合物扩增检测细胞的基因组DNA，根据检测结果鉴定待检测细胞的种属来源。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄河清涛，蒋明贵，王德鹏，刘彩云，
申请(专利权)人：湖南丰晖生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：