circ-CREBBP在鉴定或调控猪精液品质中的应用制造技术

本发明专利技术提供了circ

【技术实现步骤摘要】
circ
‑
CREBBP在鉴定或调控猪精液品质中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及circ
‑
CREBBP在鉴定或调控猪精液品质中的应用。

技术介绍

[0002]优良种公猪是养猪业中发展最重要的因素之一，公猪精液质量的优劣直接影响了猪场的经济效益。在世界许多养猪国家，人工授精已经是商品母猪繁殖的主要形式。利用人工授精技术不但可以加速群体的遗传改良，将优良基因扩展到更多的养殖场中，而且可以大幅提高劳动效率，降低养殖成本。而选择具有优良精液品质的种公猪则是实施人工授精的前提和保证。传统的方法很难对精液质量做到快速准确的选择，但通过分子标记对其进行标记辅助选择(Marker assisted selection，MAS)，可以有效的加快育种进程，选留优势个体，淘汰劣势公猪，提高公猪精液品质性状。此外，猪与人类遗传同源性非常高，其基因组与人的基因组高度相似，其染色体组成和器官大小也较为一致，且人和猪同线性区域的保守性是人与小鼠的3倍。猪作为现代医药研究的理想模式动物已广泛应用于人类疾病的研究。因此，精液品质差的公猪可以作为研究人类男性繁殖疾病的动物模型。
[0003]哺乳动物精浆胞外囊泡(seminal plasma extracellular vesicles，SPEVs)的直径为 50
‑
500nm，主要由附睾和前列腺产生，其特征是胆固醇和鞘磷脂含量高，蛋白质组成复杂。胞外囊泡包含大量分子，包括核酸(DNA和RNA)、蛋白质和脂质。自SPEVs 首次被发现以来，越来越多的证据表明，SPEVs在精子功能中发挥着重要作用。SPEVs 可以促进精子活力，参与到顶体反应，帮助精子在正确的时间点获能。研究发现SPEVs 可以保护精子免于雌性生殖道的免疫反应，这对于精子成功穿过透明带并与卵子结合非常重要。研究表明SPEVs中的一些小的非编码RNA可以与雌性生殖道的靶细胞结合从而影响相关基因表达。关于SPEVs内容物的研究目前最广泛的包括蛋白质和非编码RNA，大多数研究集中在“比较组学”方面，目的是挖掘SPEVs中某些物质作为某些疾病如一般不育症、梗阻型和非梗阻型无精子症、弱精子症、前列腺癌等疾病的生物标记，使疾病的诊断更加快速且无创。
[0004]环状RNA(circular RNA，circRNA)属于非编码RNA，是通过特殊的选择性反向剪接方式产生的，即外显子的3
′
端通过3
′
，5
′‑
磷酸二酯键与其自身的5
′
端或上游外显子连接，形成具有反向剪接连接位点的封闭环。区别于大多数线性RNA，circRNA 没有5
’
～3
’
的极性或一个腺苷尾巴，所以不能被核酸外切酶降解，因此比线性RNA 更稳定。研究表明，circRNA不仅结构稳定，而且具有种类丰富、序列保守、在细胞和组织中特异性表达等特点，具备很多潜在功能，在调控基因表达和各种生物学功能方面发挥着重要作用。近年来，许多研究利用circRNA测序技术，发现人、小鼠、猪睾丸中存在丰富的circRNA表达谱，其来源基因参与精子发生、有性生殖、生殖细胞发育及减数分裂细胞周期等过程，提示circRNA在精子发生过程中也可能起着重要作用。有研究团队对比杜洛克和大白公猪睾丸中circRNA表达谱，发现表达丰度显著不同。2017年，有学者对30和180日龄
‘
沙子岭猪
’
的睾丸组织进行了circRNA测序，在未成熟和成熟睾丸中共鉴定出了14108个circRNA，未成熟和成熟睾丸中特
异性表达的circRNA有2819和8069个，其中差异表达circRNA有12274个，经分析发现这些差异表达circRNA的来源基因主要富集在与睾丸发育、精子形成的信号通路上。研究显示circRNA大量存在于人的各类精细胞中，显示了circRNA在精子分化中差异化的潜在调控作用。国外学者曾报道circNAPEPLDiso1和circNAPEPLDiso2在人和鼠的精子中均表达，并且在受精前和受精后的表达水平发生显著变化。这些研究提示， circRNA可以作为预测雄性生育能力的生物标记。
[0005]目前关于猪SPEVs中circRNA的研究尚未见报道，关于circRNA如何调控成熟精子活力以及是否可以作为精液品质的标志物需要深入研究。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种用于鉴定或调控猪精液品质的circ
‑
CREBBP标记物，以及基于circ
‑
CREBBP进行猪精液品质鉴定或调控的方法。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术首先提供了circ
‑
CREBBP或circ
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CREBBP作为标记物的新用途。
[0008]本专利技术提供了circ
‑
CREBBP或circ
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CREBBP作为标记物在如下A1)
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A8)任一种中的应用：
[0009]A1)鉴定或辅助鉴定猪的精液品质；
[0010]A2)筛选或辅助筛选高精液品质的猪或低精液品质的猪；
[0011]A3)筛选或辅助筛选高品质猪精液或低品质猪精液；
[0012]A4)调控猪的精液品质；
[0013]A5)调控猪的精子活力；
[0014]A6)调控猪的精子细胞内ATP含量；
[0015]A7)调控猪的精子存活率或凋亡率；
[0016]A8)猪育种。
[0017]上述应用中，所述调控猪的精液品质体现为猪精浆胞外囊泡或精子中的 circ
‑
CREBBP表达量越高，该猪产生的精液品质越高；猪精浆胞外囊泡或精子中的 circ
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CREBBP表达量越低，该猪产生的精液品质越低。具体体现为猪精浆胞外囊泡或精子中的circ
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CREBBP表达量越高，该猪产生的精子活力越高、精子快速运动的能力越强、精子细胞内ATP含量越高、精子存活率越高；猪精浆胞外囊泡或精子中的 circ
‑
CREBBP表达量越低，该猪产生的精子活力越低、精子快速运动的能力越弱、精子细胞内ATP含量越低、精子凋亡率越高。
[0018]在本专利技术的一个具体实施例中，所述调控为降低。
[0019]所述猪育种的目的为选育高精液品质的猪。
[0020]为了实现上述目的，本专利技术又提供了检测circ
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CREBBP表达量的物质的新用途。
[0021]本专利技术提供了检测circ
‑
CREBBP表达量的物质在如下B1)
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B6)任一种中的应用：
[0022]B1)鉴定或辅助鉴定猪的精液品质；
[0023]B2)制备鉴定或辅助鉴定猪的精液品质的产品；
[0024]B3)筛选或辅助筛选高精液品质的猪本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.circ
‑
CREBBP或circ
‑
CREBBP作为标记物在如下A1)
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A8)任一种中的应用：A1)鉴定或辅助鉴定猪的精液品质；A2)筛选或辅助筛选高精液品质的猪或低精液品质的猪；A3)筛选或辅助筛选高品质猪精液或低品质猪精液；A4)调控猪的精液品质；A5)调控猪的精子活力；A6)调控猪的精子细胞内ATP含量；A7)调控猪的精子存活率或凋亡率；A8)猪育种。2.检测circ
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CREBBP表达量的物质在如下B1)
‑
B6)任一种中的应用：B1)鉴定或辅助鉴定猪的精液品质；B2)制备鉴定或辅助鉴定猪的精液品质的产品；B3)筛选或辅助筛选高精液品质的猪或低精液品质的猪；B4)制备筛选或辅助筛选高精液品质的猪或低精液品质的猪的产品；B5)筛选或辅助筛选高品质猪精液或低品质猪精液；B6)制备筛选或辅助筛选高品质猪精液或低品质猪精液的产品。3.一种用于鉴定或辅助鉴定猪精液品质的产品，其包括检测circ
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CREBBP表达量的物质。4.根据权利要求2所述的应用或权利要求3所述的产品，其特征在于：所述检测circ
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CREBBP表达量的物质为检测circ
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CREBBP表达量的试剂和/或仪器。5.根据权利要求4所述的应用或产品，其特征在于：所述检测circ
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CREBBP表达量的试剂包括由SEQ ID No.1所示的单链DNA分子和SEQ ID No.2所示的单链DNA分子组成的引物对。6.抑制circ
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CREBBP表达的物质在如下C1)
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C10)任一种中的应用：C1)降低猪的精液品质；C2)制备降低猪的精液品质的产品；C3)降低猪的精子活力；C4)制备降低猪的精子活力的产品；C5)降低猪的精子细胞内ATP含量；C6)制备降低猪的精子细胞内ATP含量的产品；C7)降低猪的精子存活率或提高猪的精子凋亡率；C8)制备降低猪的精子存活率或提高猪的精子凋亡率的产品；C9)培育低精液品质的猪；C10)制备培育低精液品质的猪的产品。7.一种用于调控猪精液品质的产品，其包括调控circ
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CREBBP表达量的物质。8.根据权利要求6所述的应用或权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜力，丁宁，张昱，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：