选育高繁殖力对虾群体的分子标记27W1及其应用制造技术

本发明专利技术提供了选育高繁殖力对虾群体的分子标记27W1及其应用。所述分子标记27W1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其中第301位碱基G在凡纳滨对虾高繁殖力群体中的等位基因频率≥98.33%。本发明专利技术还提供了所述的分子标记27W1的引物，包括核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的扩增引物以及核苷酸序列如SEQ ID No.4所示的延伸引物。凡纳滨对虾高繁殖力分子标记27W1可以不受生长阶段的限制，能够用于凡纳滨对虾早期选育，快速选育出繁殖性状优良的亲本群体，促进凡纳滨对虾高繁殖力新品种的选育进程。的选育进程。的选育进程。

【技术实现步骤摘要】
选育高繁殖力对虾群体的分子标记27W1及其应用


[0001]本专利技术属于水产动物分子标记辅助育种领域，具体涉及选育高繁殖力对虾群体的分子标记27W1及其应用。

技术介绍

[0002]凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)又称南美白对虾、太平洋白虾，隶属于节肢动物门(Arthropoda)、甲壳纲(Crustaeea)、十足目(Deeapoda)、对虾科(Penaeidae)、对虾属(Penaeus)，是我国和世界养殖产量最高的对虾种类，也是单一产值最高的水产养殖种类之一。2020年我国养殖产量超过180万吨，产值超过700亿元，约占世界总产量的40％。我国每年种虾需求量超过100万对，苗种需求量超过1.5万亿尾。凡纳滨对虾具有产卵量高，可多次产卵的特性。然而在苗种生产中，雌虾的繁殖能力存在巨大个体差异。在一个生产周期中，部分雌虾从未产卵，而有的雌虾能够多次产卵。培育高繁殖力(产卵和产卵量)新品种，对于提高育苗效率，节省生产成本具有重要意义。繁殖性状属中低遗传力性状，传统的育种方法进展缓慢，借助分子标记辅助育种技术可有效加快选育进程。
[0003]作为第三代分子标记，单核苷酸多态性标记(SNP)具有丰富度高、密度大、稳定性强、共显性等特点，成为目前虾、蟹等经济甲壳动物中应用最广泛的分子标记技术。目前，有关凡纳滨对虾繁殖相关SNP标记的开发较少，并且产业中缺乏可应用于分子标记辅助育种的标记。因此，开发高繁殖力的分子标记对凡纳滨对虾的新品种培育具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了选育高繁殖力对虾群体的分子标记27W1及其应用。分子标记27W1能够用于凡纳滨对虾高繁殖力群体的筛选中，其鉴定效率及准确率高。
[0005]为实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0006]本专利技术提供了选育高繁殖力对虾群体的分子标记27W1，所述分子标记27W1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0007]进一步的，在凡纳滨对虾高繁殖力群体中，所述分子标记27W1的第301位碱基G为候选27W1_SNP位点。
[0008]进一步的，所述碱基G凡纳滨对虾高繁殖力群体中的等位基因频率>98％。
[0009]优选的，所述碱基G凡纳滨对虾高繁殖力群体中的等位基因频率≥98.33％。
[0010]本专利技术还提供了所述的分子标记27W1的引物，所述引物包括核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的扩增引物以及核苷酸序列如SEQ ID No.4所示的延伸引物。
[0011]本专利技术还提供了所述的分子标记27W1或者所述的分子标记27W1的引物在用于筛选具有高繁殖力的凡纳滨对虾群体中的应用。
[0012]进一步的，筛选具有高繁殖力的凡纳滨对虾群体的具体步骤为：提取凡纳滨对虾群体内(家系、品系或地理群体)测试样品的DNA，并将其作为模板，利用所述引物进行飞行质谱分型，若分型结果中分子标记的第301位碱基G的等位基因频率≥98.33％，则选择该凡
纳滨对虾群体作为培育凡纳滨对虾高繁殖力的亲本。
[0013]进一步的，所述凡纳滨对虾家系或群体测试样品的数量在30尾以上。
[0014]进一步的，在飞行质谱分型中，PCR扩增的条件为预变性94℃3min；变性94℃30s，退火56℃25s，延伸72℃30s，共重复40个循环；最后延伸72℃4min；4℃保存。
[0015]进一步的，在飞行质谱分型中，延伸反应的条件为预变性94℃ 30s；变性94℃ 5s，退火52℃ 5s，延伸80℃ 5s，共重复40个循环；最后延伸72℃ 3min；4℃保存。
[0016]本专利技术还提供了所述的分子标记27W1在凡纳滨对虾遗传多样性分析、种质鉴定和遗传图谱构建中的应用。
[0017]本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：
[0018]1、本专利技术提供的凡纳滨对虾高繁殖力分子标记27W1可以不受生长阶段的限制，能够用于凡纳滨对虾早期选育，快速选育出繁殖性状优良的亲本群体，促进凡纳滨对虾高繁殖力新品种的选育进程。
[0019]2、利用本专利技术提供的分子标记27W1检测凡纳滨对虾繁殖性状，方法准确可靠、操作简单，能够有效、快速的筛选出高繁殖力群体，辅助早期育种，增加优良品质的凡纳滨对虾亲虾的使用效率，提高苗种产量，促进凡纳滨对虾的健康繁育，对凡纳滨对虾的健康养殖与发展具有重要的意义，具有广阔的应用前景。
附图说明
[0020]图1为本专利技术中在验证群体中进行飞行质谱分型验证结果。
具体实施方式
[0021]以下结合具体实施例对本专利技术的技术方案作进一步详细说明。
[0022]本专利技术所用凡纳滨对虾均来自中国水产科学研究院黄海水产研究所合作基地邦普种业科技有限公司。将来自57个家系的10月龄健康雌性种虾进行单侧眼柄切除以促进卵巢同步成熟，8～10尾/家系，共604尾，体重50
±
5g。切眼柄后的雌虾放入6个16m3大池，密度6～7尾/m2。雄性亲虾来自相同家系，8～9尾/家系，共500尾，体重45
±
5g。雄虾以家系为单位放入3m3水泥池，密度2～3尾/m2。亲虾每天投喂3餐沙蚕和2餐鱿鱼进行营养强化，每日投喂总量达亲虾总体重的20％，每天分5次投喂，保证沙蚕24小时可见。强化期间保持水温28～29℃，盐度30～31
‰
，pH 7.8～8.2，持续供氧，日换水量80％。强化20天后，挑选卵巢发育饱满，颜色橘红的雌虾放入雄虾池进行自然交尾，交配时避免近亲交配。记录30天内所有雌虾的产卵次数及每次产卵量。建立雌虾繁殖力选择指数，计算公式如下：
[0023]y
i
＝0.5*(a
elfi
‑
μ
elf
)*σ
elf
‑1+0.5*(a
aeni
‑
μ
aen
)*σ
aen
‑1ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(1)
[0024]式中，y
i
是第i尾雌虾的繁殖力指数；a
elfi
和a
aeni
分别是第i尾雌虾的产卵频次和产卵量；μ
elf
和μ
aen
是全部雌虾产卵频次和产卵量的平均值；σ
elf
和σ
aen
是全部雌虾的产卵频次和产卵量的标准误差。
[0025]选择指数最高的30尾雌虾认为是高繁殖力组，选择指数最低的30尾雌虾(从未发现性腺成熟)认为是低繁殖力组。选择高繁殖力和低繁殖力雌虾各30尾组建繁殖力差异群体。解剖取肌肉组织于冻存管中，液氮保存。
[0026]实施例1
[0027]一、雌虾繁殖力相关候选分子标记筛选
[0028]1、测序数据过滤和比对
[0029]采用CTAB法进行凡纳滨对虾本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.选育高繁殖力对虾群体的分子标记27W1，其特征在于，所述分子标记27W1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。2.根据权利要求1所述的分子标记27W1，其特征在于，在凡纳滨对虾高繁殖力群体中，所述分子标记27W1的第301位碱基G为候选27W1_SNP位点。3.根据权利要求2所述的分子标记27W1，其特征在于，所述碱基G凡纳滨对虾高繁殖力群体中的等位基因频率>98%。4.权利要求1所述的分子标记27W1的引物，其特征在于，所述引物包括核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的扩增引物以及核苷酸序列如SEQ ID No.4所示的延伸引物。5.权利要求1所述的分子标记27W1或者权利要求4所述的分子标记27W1的引物在用于筛选具有高繁殖力的凡纳滨对虾群体中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，筛选具有高繁殖力的凡纳滨对虾群体的具体步骤为：提取凡纳滨对虾群体内测试样品的DNA，并将其作为模板，利用所述引物进行飞行质谱分型，若分型结果中分子标记的第3...

【专利技术属性】
技术研发人员：隋娟，栾生，孔杰，代平，孟宪红，罗坤，曹家旺，谭建，陈宝龙，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：