一种提高蛋白质或多肽贮藏稳定性的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体地涉及一种提高蛋白质或多肽贮藏稳定性的方法。本发明专利技术公开了一种提高蛋白质或多肽贮藏稳定性的方法，包含下列步骤：S1.配制蛋白质或多肽制剂，其含有抗氧化剂；S2.蛋白质或多肽制剂分装于真空包装袋中，置于真空包装机抽真空，封口密闭。本发明专利技术所述方法简单易用、低成本且成功率高，可以长期保存易氧化失活蛋白，经过本方法处理的蛋白质，特别是易氧化失活的的蛋白质，其活力稳定性可以提高5

【技术实现步骤摘要】
一种提高蛋白质或多肽贮藏稳定性的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体地涉及一种提高蛋白质或多肽贮藏稳定性的方法。

技术介绍

[0002]蛋白质在纯化和贮藏中会经历不同程度的降解或失活，氧化是蛋白质的主要降解或失活的途径之一。蛋白氧化是指蛋白质在自由基及其相关氧化物的作用下，引起氨基酸残基的破坏、肽键的水解、和由此的因蛋白质三级结构改变和蛋白质聚集导致的蛋白质不稳定性(Davies，J.Biol.Chem.262：9895
‑
901(1987))。氨基酸按敏感性的顺序，特别易于发生氧化的为半胱氨酸(Cys)、蛋氨酸(Met)、色氨酸(Trp)、组氨酸(His)和酪氨酸(Tyr)残基的侧链，这些氨基酸残基侧链基团易被氧化，其中Cys中的巯基是反应性最强的官能基团，因为该巯基提供了易与自由基反应的氢。
[0003]蛋白质氧化的原因可以经许多不同的互相关联的途径发生，并可以由多种触发条件(包括升高的温度、氧水平、氢离子水平(pH)、金属离子、过氧化物和光)催化。一般地，导致蛋白质氧化降解的一个重要因素是暴露于氧气、活性氧(reactive oxygen)和金属。
[0004]本领域中，抗氧化剂被广泛用于防止肽和蛋白质氧化，延长其贮藏时长。如Yu
‑
Chang John Wang and Musetta A.Hansen，
″
Parenteral Formulations of Proteins and Peptides：Stability and Stabilizers
″
，Journal of Parenteral Science and Technology，42：S14，1988。Neema等人(J Pharm Sci Tech 51：166
‑
71(1997))汇编了用于所有注射产品的抗氧化剂集合，其中列出了亚硫酸氢盐、抗坏血酸盐、丁羟苯甲醚、半胱氨酸等等。然而，这些抗氧化剂都除氧不彻底，且在除氧过程中的副产物有时会对蛋白造成损坏，如葡萄糖氧化酶的催化产物是双氧水，氧化能力更强，更容易氧化蛋白质，造成蛋白质聚集，活性丢失等等；不同的蛋白需要选择不同的抗氧化剂，不具有通用性。
[0005]同时，在本领域蛋白质贮藏过程，为了减少蛋白质聚集，通常在液体或冻干制剂中使用非离子去污剂(即表面活性剂)，如，聚山梨酯20和80，用于防止表面吸附并用作防止蛋白质聚集(Kerwin,J.Pharm.Sci.97(8)：2924
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2936(2008))。但这些试剂也可能因为包含活性氧而增强氧化，如通常使用的表面活性剂例如聚山梨醇酯80含有微量的过氧化物污染，在低浓度金属存在下其可导致该表面活性剂的进一步氧化从而产生更大量的活性氧(氧自由基)(Ha等人，J Pharm Sci 91：2252
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2264(2002)；Harmon等人，JPharm Sci 95：2014
‑
2028(2006))。在液体或冻干制剂中，蛋白质的氧化也被证实可以由聚山梨醇酯或其他制剂赋形剂例如聚乙二醇(PEG)中的过氧化物和微量金属例如铁或铜触发。此外，蛋白质制品通常被包装进由低密度聚乙烯(LDPE)或聚丙烯制成的塑料容器中以方便储存和应用。然而，这类塑料容器可容易地渗透氧气，其导致蛋白质中氧化敏感性残基的快速氧化，如蛋氨酸氧化为蛋氨酸亚砜(Manning等人，Pharmaceutical Research，Vol.6，No.11，(1989))。
[0006]因此，需要一种工艺简单、成本低廉的方法，减少蛋白质或多肽氧化，延长其贮藏期限。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种提高蛋白质或多肽贮藏稳定性的方法，减少蛋白质或多肽氧化，延长其贮藏期限。
[0008]本专利技术公开了一种提高蛋白质或多肽贮藏稳定性的方法，包含下列步骤：
[0009]S1.配制蛋白质或多肽制剂，其含有抗氧化剂；
[0010]S2.蛋白质或多肽制剂分装于真空包装袋中，置于真空包装机抽真空，封口密闭。
[0011]在一优选实施例中，步骤S1中所述蛋白质或多肽制剂还含有氧气指示剂，或同步配制不含蛋白质或多肽成分的制剂，其含有氧气指示剂，作为对照；本专利技术技术方案中，氧气指示剂作为抗氧化剂加入量的指标度和抽真空的时候氧气去除干净、包装的时候无氧气进入、保存的时候无氧气渗入的标识。
[0012]在一优选实施例中，所述氧气指示剂为刃天青，其终浓度为0.0005％
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0.001％(质量体积比)。
[0013]在一优选实施例中，所述制剂为液体。
[0014]在一优选实施例中，所述抗氧化剂为亚硫酸氢盐、抗坏血酸盐、丁羟苯甲醚、半胱氨酸、5
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羟基
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色氨酸、5
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羟基吲哚、7
‑
羟基吲哚、血清素、TCEP(Tris(2
‑
carboxyethyl)phosphine)或DTT，优选为DTT，其含量为1
‑
10mM。
[0015]在一优选实施例中，所述真空包装袋为铝箔真空袋，其中优选为20丝以上铝箔真空袋，铝箔真空袋空气绝缘性好，长期保存没有氧气渗入，同时，可以使蛋白溶液避光保存，避免了光氧化。
[0016]在一优选实施例中，所述真空包装机为DZ
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400双封口内抽真空封口机，去除氧气对于保护蛋白，提高蛋白的稳定性是生物制品研究工作者的共识，大型药企也有专门的设备和厂房来进行此类操作。但是对于一般的企业和实验室来说，不具备这样设备和条件。
[0017]本专利技术所述方法简单易用、低成本且成功率高，可以长期保存易氧化失活蛋白。经过本方法处理的蛋白质，特别是易氧化失活的的蛋白质，如半胱氨酸蛋白酶，次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶等类似蛋白质，其活力稳定性可以提高5
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100倍，适合技术能力较低的实验室或者小企业批量保存自己的蛋白质产品，而不是花费大量的精力来针对性的进行研究，从而节省相关方面的成本，提高效率。
附图说明
[0018]图1 3种体系加入刃天青指示剂后颜色。
[0019]图2真空包装后3种体系颜色变化。
[0020]图3透明尼龙真空包装37℃放置两天后不同体系颜色。
[0021]图4 4℃保存下IMPDH II的储存稳定性。
[0022]图5 37℃加速实验IMPDH II的储存稳定性。
具体实施方式
[0023]术语“蛋白质”、“多肽”和“肽”在本文中可互换使用，指任何长度的氨基酸聚合物。蛋白质可以是线性的或分支的，它可以包含经过修饰的氨基酸，而且它可以被非氨基酸中断。这些术语还涵盖天然地或通过干预进行修饰的氨基酸聚合物；例如二硫键形成、糖基
化、脂化、乙酰化、磷酸化、或任何其它操作或修饰，诸如与标记成分缀合。定义内还包括例如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高蛋白质或多肽贮藏稳定性的方法，其特征在于，包含下列步骤：S1.配制蛋白质或多肽制剂，其含有抗氧化剂；S2.蛋白质或多肽制剂分装于真空包装袋中，置于真空包装机抽真空，封口密闭。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中所述蛋白质或多肽制剂还含有氧气指示剂，或同步配制不含蛋白质或多肽成分的制剂，其含有氧气指示剂，作为对照。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述氧气指示剂为刃天青，其终浓度为质量体积比0.0005％
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0.001％。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述蛋白质为IMPDH II蛋白。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制剂为液体。6.如权利要求5所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨少青，逄淑召，周超强，
申请(专利权)人：上海云泽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：