一种无标签野生型BKVVP1蛋白质的制备方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，更具体地涉及一种无标签野生型BKV VP1蛋白质的制备方法。本发明专利技术公开了一种无标签野生型BKV VP1蛋白质的制备方法，能够高效的表达带有6x His和GST标签的BKV VP1蛋白，通过TEV酶剪切能够将多余的标签切除,每升自诱导培养基可收获纯度达90％以上的蛋白10mg以上，能够获得仅对BKV VP1蛋白有结合活力对GST、6x His标签无结合活力的抗体，为后续BKV POCT式抗原抗体检测试剂盒提供关键的原料抗体。供关键的原料抗体。

【技术实现步骤摘要】
一种无标签野生型BKV VP1蛋白质的制备方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体地涉及一种无标签野生型BKV VP1蛋白质的制备方法。

技术介绍

[0002]BK病毒(BK Virus)，又名人多瘤病毒1(Human Polyomavirus 1)，是乙型多瘤病毒的成员，很少引起疾病，但通常与进行过肾移植的患者有关。由于器官移植患者术后长期应用免疫抑制剂，潜伏的BKV被激活，造成BKV尿症(BKV viruria)；随着病程进展，BKV持续复制，导致BKV血症(BKV viremia)；BKV在血液中持续高表达，进一步破坏移植肾组织，导致肾小管萎缩和间质纤维化，即BKV相关性肾病(BK virus nephropathy，BKVN)；BKVN已成为移植肾失去功能的重要原因之一。
[0003]BKV是具有5153个碱基对的环状基因组的无包膜双链DNA病毒。基因组包装在直径约40至50纳米的病毒衣壳中，其形状为二十面体(T＝7对称)。衣壳由称为VP1的72个五聚体衣壳构成，能够自组装成封闭的二十面体；VP1的每个五聚体与另外两个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无标签野生型BKV VP1蛋白质的制备方法，其特征在于，包含下列步骤：S1.克隆或合成获得含野生型BKV VP1序列的重组核酸片段；S2.构建重组载体，将重组载体转化至宿主细胞，得到基因工程菌；S3.发酵培养：所述基因工程菌活化后，进行扩大培养，再采用自诱导培养基进行发酵培养；S4.蛋白纯化；S5.酶切表达标签；S6.分子筛纯化，收集无标签的野生型BKV VP1蛋白；步骤S1中重组核酸片段含有His标签，其位于BKV VP1核酸序列的N端，且含有酶剪切位点的核酸序列，其位于His标签序列和BKV VP1核酸序列中间。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述重组核酸片段含有6x His和GST标签，其位于BKV VP1核酸序列的N端。3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述重组核酸片段含有TEV酶剪切位点的核酸序列，其位于His标签序列和BKV VP1核酸序列中间。4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述表达载体为pET
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21a(+)、pET
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24a(+)、pET
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28a(+)、pET
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30a(+)或pET
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Duet。5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述宿主细胞为BL21(...

【专利技术属性】
技术研发人员：周超强，林巍靖，
申请(专利权)人：上海云泽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：