胶乳增强免疫比浊法检测丙戊酸的试剂R1、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于胶乳增强免疫比浊法检测丙戊酸的试剂R1、试剂盒及其应用。所述试剂R1中包括蛋白结合丙戊酸的解离剂，所述解离剂包括1)乙酰水杨酸、或者2)西咪替丁和红霉素。本发明专利技术试剂盒能更准确检测出血浆或血清中游离状态的总丙戊酸药物含量，且与商业试剂盒相比于HPLC

【技术实现步骤摘要】
胶乳增强免疫比浊法检测丙戊酸的试剂R1、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及丙戊酸检测
，尤其涉及胶乳增强免疫比浊法检测丙戊酸的试剂R1、含有所述试剂R1的试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]丙戊酸，是一种不含氮的广谱抗癫痫药，为原发性大发作和失神小发作的首选药，丙戊酸为短链脂肪酸，是唯一既不含芳香环又不含氮元素的抗癫痫药物，患者对丙戊酸治疗的疗效取决于癫痫的类型、病情的严重程度和个体的药动学差异。本药除用于抗癫痫外，还可用于治疗热性惊厥、运动障碍、舞蹈症、卟啉症、精神分裂症、带状疱疹引发的疼痛、肾上腺功能紊乱，以及预防酒精戒断综合征。有研究表明丙戊酸剂量与血药浓度相关性较差，但其疗效和不良反应与血药浓度有较大相关性，浓度过低将引起疗效不足，浓度过高易发生毒性反应。这个结果支持了定期监测丙戊酸血药浓度的必要性。丙戊酸是一个起效慢的药物，可能在达到合适药浓度以后6个月才能有效的控制癫痫发作，监测血液中的丙戊酸药物能使临床医师及时了解患者对药量的个体差异，并对不同患者的药物施用量进行个体之间差异的调整，能有效提高治疗效果，对于临床合理用药具有重要意义。
[0003]目前应用于丙戊酸血药浓度测定的免疫法主要有色谱分析法(高效液相色谱法HPLC；气相色谱法GC；液质联用分析法)、均相酶免疫法(HEIA)、化学发光免疫法(CLIA)、荧光偏振免疫法(FPIA)等测定丙戊酸血药浓度。
[0004]目前丙戊酸由于不具有芳香环或共轭双键结构，在紫外光下无吸收，一般的HPLC法不能直接经紫外检测器监测，测定前需衍生化处理，较为繁琐，限制了HPLC在临床大样本中的使用。液相色谱
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质谱法(LC
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MS/MS)虽灵敏度高、特异性强、分析速度快及高通量等优点，但仪器昂贵，国内普及率较低。用色谱分析法进行样本分析，有样本前处理，最终检测到的样本中药物含量包含游离态和蛋白结合态，是样本中总药物含量。
[0005]对于现有的免疫分析方法，化学发光和均相酶免疫法与色谱法相比，分析速度快，自动化程度很高，但试剂盒昂贵，需要使用专门配套的仪器设备，不能准确地检测到样本中能游离的丙戊酸。均相酶免疫法样本还需稀释后测定，使检测不能快速准确地得出结论。而且对于生化分析和免疫分析技术(均相酶免疫法(HEIA)、化学发光免疫法(CLIA)、荧光偏振免疫法(FPIA)等)测定的是样本中游离态的丙戊酸药物含量，也不够准确。同样的，市场上商业化检测丙戊酸的胶乳增强免疫比浊试剂盒，只能检测到样本中游离部分的丙戊酸药物浓度，准确性欠佳，且试剂盒昂贵，并需要使用专门配套的仪器设备，不利于推广使用。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中存在的不足之处，提供一种能更准确检测出血浆或血清中游离状态的总丙戊酸药物含量，操作简单，准确度更高，快速地应用于常规自动生化仪的检测丙戊酸血药浓度的胶乳增强免疫比浊法检测丙戊酸的试剂R1、含有所述试剂R1的试剂盒及其应用。
[0007]由于丙戊酸药物经过给药部位进入大循环后，一部分以游离状态通过与受体结合或到达患处来发挥药效或毒性；一部分与血浆蛋白结合暂时不发挥药效或毒性；游离状态的药物、与血浆蛋白结合的药物、被代谢的药物与排泄之间有着一种动态平衡、且与个人体质不同而不同。因此现有大部分免疫检测方法测得的丙戊酸是单时间点样本中游离态的丙戊酸浓度，并不能反映动态点的游离态的丙戊酸浓度，导致不能正确判断血液中能产生疗效或毒性的所有可成游离态的丙戊酸浓度而影响临床用药。由此，本专利技术人尝试用一种抗结合蛋白干扰能力强，能使处于与血浆蛋白结合状态下的丙戊酸药物解离下来的试剂/方法，以便准确检测出血浆或血清中游离状态的总丙戊酸药物含量。
[0008]为了解决上述缺陷，本专利技术第一方面提供一种用于胶乳增强免疫比浊法检测丙戊酸的试剂R1，其包括蛋白结合丙戊酸的解离剂，所述解离剂包括1)乙酰水杨酸、或者2)西咪替丁和红霉素。
[0009]优选地，所述检测的样品来自血液例如血浆或血清。
[0010]当解离剂为乙酰水杨酸时，在所述试剂R1中的含量：所述乙酰水杨酸优选为1
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5mg/mL，更优选为1
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2mg/mL，进一步更优选为2mg/mL。
[0011]当解离剂为西咪替丁和红霉素时，在所述试剂R1中的含量：所述西咪替丁优选为0.1
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1mg/mL，所述红霉素优选为0.1
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0.5mg/mL；更优选地，所述西咪替丁为0.2
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0.4mg/mL，所述红霉素为0.1
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0.2mg/mL；进一步更优选地，所述西咪替丁为0.35mg/mL，所述红霉素为0.2mg/mL。
[0012]本专利技术试剂R1中还可以包括现有胶乳增强免疫比浊检测试剂盒、特别是检测丙戊酸的胶乳增强免疫比浊法试剂R1中常规使用的物质，例如：
[0013](1)稳定剂，用于稳定检测体系特别是保护蛋白、维持蛋白结构，所述稳定剂的浓度通常为1
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10％，所述稳定剂优选氯化物和/或双糖；其中所述氯化物可以选自氯化钠、氯化钾和氯化镁中的一种或多种，更优选为氯化钠或氯化钾，进一步更优选为氯化钠；所述双糖优选自蔗糖、麦芽糖和海藻糖中的一种或多种，更优选为蔗糖；
[0014](2)缓冲剂，用于配置试剂R1的缓冲体系，所述缓冲剂的浓度通常为0.2
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1％，所述缓冲剂优选自MES、Tris、MOPS和HEPES中的一种或多种，更优选为MES，进一步更优选为MES一水合物；
[0015](3)表面活性剂，所述表面活性剂的浓度通常为0.01
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0.1％，所述表面活性剂优选为非离子表面活性剂：例如聚氧乙烯型非离子表面活性剂、多元醇型非离子表面活性剂或烷基醇酰胺型非离子表面活性剂，更优选为多元醇型非离子表面活性剂，进一步更优选为吐温例如吐温20；
[0016](4)金属离子螯合剂，所述金属离子螯合剂的浓度通常为0.1
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1％，所述金属离子螯合剂优选为EDTA或其钾盐，所述其钾盐更优选为EDTA
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2K或EDTA
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3K，进一步更优选为EDTA
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2K；和/或，
[0017](5)促凝剂，所述促凝剂的浓度为1
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5％，所述促凝剂例如多糖或聚乙烯吡咯烷酮，优选地，所述多糖为葡聚糖，更优选分子量450,000
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650,000的葡聚糖；
[0018]进一步地，试剂R1中还可以包括：
[0019](6)丙戊酸抗原(作为检测抗原)，浓度通常为130
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150ng/mL；
[0020](7)防腐剂，所述防腐剂的浓度通常为0.01
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0.1％，所述防腐剂优选自硫酸庆大霉
素、叠氮钠、2
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羟基吡啶
‑
N
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氧化物、氯乙酰胺本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于胶乳增强免疫比浊法检测丙戊酸的试剂R1，其特征在于，其包括蛋白结合丙戊酸的解离剂，所述解离剂包括1)乙酰水杨酸、或者2)西咪替丁和红霉素；优选地，所述检测的样品来自血液例如血浆或血清。2.如权利要求1所述的试剂R1，其特征在于，在所述试剂R1中的含量：所述乙酰水杨酸为1
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2.2mg/mL，所述西咪替丁为0.1
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0.5mg/mL，所述红霉素为0.05
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0.3mg/mL；优选地，所述乙酰水杨酸为1
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2mg/mL，所述西咪替丁为0.2
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0.4mg/mL，所述红霉素为0.1
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0.2mg/mL；更优选地，所述乙酰水杨酸为2mg/mL，所述西咪替丁为0.35mg/mL，所述红霉素为0.2mg/mL。3.如权利要求1或2所述的试剂R1，其特征在于，其还包括：(1)稳定剂，所述稳定剂的浓度为1
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10％，所述稳定剂优选为氯化物和/或双糖，所述氯化物例如选自氯化钠、氯化钾和氯化镁中的一种或多种，更优选为氯化钠或氯化钾，进一步更优选为氯化钠；所述双糖例如选自蔗糖、麦芽糖和海藻糖中的一种或多种，优选为蔗糖；(2)缓冲剂，所述缓冲剂的浓度为0.2
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1％，所述缓冲剂优选自MES、Tris、MOPS和HEPES中的一种或多种，更优选为MES，进一步更优选为MES一水合物；(3)表面活性剂，所述表面活性剂的浓度为0.01
‑
0.1％，所述表面活性剂优选为非离子表面活性剂：例如聚氧乙烯型非离子表面活性剂、多元醇型非离子表面活性剂或烷基醇酰胺型非离子表面活性剂，更优选为多元醇型非离子表面活性剂，进一步更优选为吐温例如吐温20；(4)金属离子螯合剂，所述金属离子螯合剂的浓度为0.1
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1％，所述金属离子螯合剂优选为EDTA或其钾盐，所述其钾盐更优选为EDTA
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2K或EDTA
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3K，进一步更优选为EDTA
‑
2K；和/或，(5)促凝剂，所述促凝剂的浓度为1
‑
5％，所述促凝剂例如多糖或聚乙烯吡咯烷酮，优选地，所述多糖为葡聚糖，更优选分子量450,000
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650,000的葡聚糖；上述百分比为在试剂R1中的质量体积百分比，单位为g/mL。4.如权利要求3所述的试剂R1，其特征在于，其进一步还包括：(6)丙戊酸抗原，浓度优选为130
‑
150ng/mL；(7)防腐剂，所述防腐剂的浓度为0.01
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0.1％，所述防腐剂优选自硫酸庆大霉素、叠氮钠、2
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羟基吡啶
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N
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氧化物、氯乙酰胺、咪唑烷基脲、硫柳汞、2
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甲基
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3(2H)
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异噻唑酮5
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溴
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5硝基
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1,3
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二恶烷和Proclin
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300中的一种或多种，更优选为叠氮钠；和/或(8)封闭剂，所述封闭剂的浓度为0.01
‑
0.1％，所述封闭剂例如BSA或乙醇胺，优选乙醇胺。5.如权利要求4所述的试剂R1，其特征在于，所述氯化钠为1
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5％，所述蔗糖为1
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5％，所述葡聚糖为1
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5％，所述MES一水合物为0.2
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1％，所述吐温20为0.01
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0.1％，所述EDTA
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2K为0.1
‑
1％，所述叠氮钠为0.01
‑
0.1％，所述乙醇胺为0.01
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0.1％以及所述丙戊酸抗原为130
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150ng/mL，所述试剂R1的pH为5
‑
9；优选地，所述试剂R1包括：1
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2mg/mL乙酰水杨酸，1
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3％氯化钠，1
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3％蔗糖，2.5
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3％葡聚糖，0.3
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0.6％MES一水合物，0.02
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0.05％吐温20，0.3
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0.5％EDTA
‑
2K，0.03
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0.05％叠氮钠，0.01
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0.05％乙醇胺以及
140
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145ng/mL丙戊酸抗原，pH为6
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7；或，0.2
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0.4mg/mL西咪替丁，0.1
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0.2mg/mL红霉素，1
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3％氯化钠，1
‑
3％蔗糖，2.5
‑
3％葡聚糖，0.3
‑
0.6％MES一水合物，0.02
‑
0.05％吐温20，0.3
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0.5％EDTA
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【专利技术属性】
技术研发人员：王西，林巍靖，陈国锋，
申请(专利权)人：上海云泽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：