一种纯化填料病毒吸附能力评价方法技术

本发明专利技术公开了一种纯化填料病毒吸附能力评价方法，将填料与病毒液混合，使病毒吸附到填料上；清洗填料后加入含有抗病毒抗体的动物血清，使其与填料上的抗原反应；清洗填料后加入抗动物血清酶标二抗，使其与填料上的抗原反应；清洗填料后加入显示液进行显色反应；显色反应结束后，离心处理后取上清液加入96孔板中，使用酶标仪在波长450nm计算各孔吸光度OD，通过OD值评价填料吸附抗原能力。与现有技术相比，本发明专利技术通过将抗原固定在填料上，应用间接ELISA方法检测不同填料固定抗原能力，为病毒纯化提供筛选填料的依据，具有成本低、技术门槛低、反应快速的优点。反应快速的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种纯化填料病毒吸附能力评价方法


[0001]本专利技术涉及领域，特别是一种纯化填料病毒吸附能力评价方法。

技术介绍

[0002]兽用疫苗生产后对半成品进行病毒纯化可有效提高单位体积中病毒含量、降低杂质蛋白、减少疫苗副反应已成为趋势。病毒载体在科学研究中已经成为一种常用的手段，病毒载体需要经历包装、浓缩、纯化等步骤，其中浓缩、纯化步骤较为繁琐与耗时。目前常用的病毒浓缩纯化方式为离子交换柱层析纯化，这就需要用到各种吸附填料，填料的吸附病毒的能力决定了病毒纯化的效果。
[0003]然而，目前对各种吸附类填料还没有有效的评估方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是要解决现有技术中存在的不足，提供一种纯化填料病毒吸附能力评价方法。
[0005]为达到上述目的，本专利技术是按照以下技术方案实施的：
[0006]一种纯化填料病毒吸附能力评价方法，包括以下步骤：
[0007]S1、将填料与病毒液混合，使病毒吸附到填料上；
[0008]S2、清洗填料后加入含有抗病毒抗体的动物血清，使其与填料上的抗原反应；
[0009]S3、清洗填料后加入抗动物血清酶标二抗，使其与填料上的抗原反应；
[0010]S4、清洗填料后加入显示液进行显色反应；
[0011]S5、显色反应结束后，离心处理后取上清液加入96孔板中，使用酶标仪在波长450nm计算各孔吸光度OD，通过OD值评价填料吸附抗原能力。
[0012]进一步地，所述步骤S1具体包括：取1mL填料与10mL病毒液在15mL离心管中混合，37℃、50rpm摇床反应1h，使病毒吸附到填料上。
[0013]进一步地，所述清洗填料的具体步骤为：将含有填料的混合液于37℃、300rpm、1min离心，弃上清液，取0.1M氯化钠10mL加入15mL离心管中，摇床10min，37℃、300rpm、1min离心弃0.1M氯化钠溶液，每次清洗填料重复1
‑
2次。
[0014]进一步地，所述步骤S3具体包括：向15mL离心管中加5mL抗病毒阳性动物血清，37℃、50rpm摇床反应1h。
[0015]进一步地，所述步骤S4具体包括：向15mL离心管中加5mL酶标二抗，37℃、50rpm摇床反应1h。
[0016]进一步地，所述步骤S5具体包括：向15mL离心管中加入5mL TMB底物显示液，37℃避光摇床反应显色15min，显色反应后300rpm、1min离心，取50μL上清液加入96孔板中每孔加入终止液50μL。
[0017]与现有技术相比，本专利技术通过将抗原固定在填料上，应用间接ELISA方法检测不同填料固定抗原能力，为病毒纯化提供筛选填料的依据，具有成本低、技术门槛低、反应快速
的优点。
具体实施方式
[0018]为使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步的详细说明。此处所描述的具体实施例仅用于解释本专利技术，并不用于限定专利技术。
[0019]实施例1
[0020]1.吸附：取1mL强阴离子吸附填料与10mL经2μm滤膜过滤的伪狂犬病毒液在15mL离心管中上下颠倒混合10次，37℃、50rpm摇床反应1h，横放使病毒充分吸附到填料上。
[0021]2.清洗：37℃、300rpm、1min离心弃上清液。取0.1M氯化钠10mL加入15mL离心管中，横放摇床10min，37℃、300rpm、1min离心弃0.1M氯化钠溶液(清洗填料)。
[0022]3.重复步骤2两遍。
[0023]4.加一抗：向15mL离心管中加5mL抗病毒阳性动物血清，37℃、50rpm横放摇床反应1h(加入一抗和填料上的抗原反应)。
[0024]5.清洗：重复步骤2、3。
[0025]6加二抗：向15mL离心管中加5mL酶标二抗37℃、50rpm横放摇床反应1h(加二抗)。
[0026]7.清洗：重复步骤2、3。
[0027]8显色：向15mL离心管中加入5mL TMB底物显示液，37℃避光摇床横放
[0028]反应显色15min。显色反应后300rpm、1min离心，取50μL上清液加入96孔板中每孔加入终止液50μL。使用酶标仪在波长450nm计算各孔吸光度(OD)值。
[0029]实施例2
[0030]1.吸附：取1mL强阴离子吸附填料与10mL 2μm滤膜过滤的伪狂犬病毒细胞培养液半成品在15mL离心管中上下颠倒混合10次，37℃、50rpm摇床反应1h，横放使病毒充分吸附到填料上。
[0031]2.清洗：37℃、300rpm、1min离心弃上清液。取0.1M氯化钠10mL加入15mL离心管中，横放摇床10min，37℃、300rpm、1min离心弃0.1M氯化钠溶液(清洗填料)。
[0032]3.重复步骤2两遍。
[0033]4.加一抗：向15mL离心管中加5mL抗病毒阳性动物血清，37℃、50rpm横放摇床反应1h(加入一抗和填料上的抗原反应)。
[0034]5.清洗：重复步骤2、3。
[0035]6加二抗：向15mL离心管中加5mL酶标二抗37℃、50rpm横放摇床反应1h(加二抗)。
[0036]7.清洗：重复步骤2、3。
[0037]8显色：向15mL离心管中加入5mL TMB底物显示液，37℃避光摇床横放
[0038]反应显色15min。显色反应后300rpm、1min离心，取50μL上清液加入96孔板中每孔加入终止液50μL。使用酶标仪在波长450nm计算各孔吸光度(OD)值。
[0039]实施例3
[0040]1.吸附：取1mL强阳离子吸附填料与10mL经2μm滤膜过滤的伪狂犬病毒液在15mL离心管中上下颠倒混合10次，37℃、50rpm摇床反应1h，横放使病毒充分吸附到填料上。
[0041]2.清洗：37℃、300rpm、1min离心弃上清液。取0.1M氯化钠10mL加入15mL离心管中，横放摇床10min，37℃、300rpm、1min离心弃0.1M氯化钠溶液(清洗填料)。
[0042]3.重复步骤2两遍。
[0043]4.加一抗：向15mL离心管中加5mL抗病毒阳性动物血清，37℃、50rpm横放摇床反应1h(加入一抗和填料上的抗原反应)。
[0044]5.清洗：重复步骤2、3。
[0045]6加二抗：向15mL离心管中加5mL酶标二抗37℃、50rpm横放摇床反应1h(加二抗)。
[0046]7.清洗：重复步骤2、3。
[0047]8显色：向15mL离心管中加入5mL TMB底物显示液，37℃避光摇床横放
[0048]反应显色15min。显色反应后300rpm、1min离心，取50μL上清液加入96孔板中每孔加入终止液50μL。使用酶标仪在波长450nm计算各孔吸光度(OD)值。
[0049]实施例4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纯化填料病毒吸附能力评价方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将填料与病毒液混合，使病毒吸附到填料上；S2、清洗填料后加入含有抗病毒抗体的动物血清，使其与填料上的抗原反应；S3、清洗填料后加入抗动物血清酶标二抗，使其与填料上的抗原反应；S4、清洗填料后加入显示液进行显色反应；S5、显色反应结束后，离心处理后取上清液加入96孔板中，使用酶标仪在波长450nm计算各孔吸光度OD，通过OD值评价填料吸附抗原能力。2.根据权利要求1所述的纯化填料病毒吸附能力评价方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括：取1mL填料与10mL病毒液在15mL离心管中混合，37℃、50rpm摇床反应1h，使病毒吸附到填料上。3.根据权利要求1所述的纯化填料病毒吸附能力评价方法，其特征在于，所述清洗填料的具体步骤为：将含有填料的混合液于37℃、300rpm、1min离心，弃上清液，...

【专利技术属性】
技术研发人员：姬洪卫，王国辉，伊淑帅，贾小营，张馨元，周洋，王飞，吴晶，李爽，赵丽娟，王英齐，邹德甜，
申请(专利权)人：吉林正业生物制品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：