一种猫杯状病毒疫苗抗原含量评估方法技术

本发明专利技术公开了一种猫杯状病毒疫苗抗原含量评估方法，用细胞培养的猫杯状病毒对猫进行攻毒采抗体猫血清，通过抗原竞争法检测猫杯状病毒疫苗抗原含量，具体是待检抗原与酶标抗原竞争与固相抗体的结合，样品中抗原含量越多，结合在固相抗体上的酶标抗原越少，显色越浅；本发明专利技术检测成本低，操作简单，反应时间短。反应时间短。

【技术实现步骤摘要】
一种猫杯状病毒疫苗抗原含量评估方法


[0001]本专利技术涉及疫苗检测
，特别是一种猫杯状病毒疫苗抗原含量评估方法。

技术介绍

[0002]猫杯状病毒(FCV)最初被描述于1957年(Fastier，1957)。猫杯状病毒和猫科动物疱疹病毒是猫上呼吸道病毒病的两种主要来源。FCV病毒影响多种动物，FCV携带感染率为15
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25％，抗FCV血清阳性率为70
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100％(Coutts，1994；Ellis，1981；Harbour，1991；Reubel，1992)。最初阶段的体温过高之后，这些呼吸疾病通常伴随上颚、舌、唇和/或鼻的口腔溃疡、鼻炎、慢性口炎、结膜炎以及可能伴随食欲不振和虚弱无力。FCV病毒还可导致肺炎、肠炎、关节痛(也被称为跛足综合征(lameness syndrome))。
[0003]目前市面上有多种疫苗但没有直观有效的疫苗抗原含量评估方法。如NIH法是采用小鼠体内注射疫苗后，再用CVS攻击毒攻毒，经过与标准抗原比较后计算疫苗效价。NIH法检测需要大量小鼠，且每个实验周期约一个月时间，导致狂犬疫苗检测周期延长。且实验过程中由于活体参与，对小鼠状态和表现需要密切观察，导致检测成本高，疫苗效价计算繁琐。
[0004]因此，亟需一种能直观有效地反映猫杯状病毒疫苗抗原含量的评估方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是要解决现有技术中存在的不足，提供一种猫杯状病毒疫苗抗原含量评估方法。
[0006]为达到上述目的，本专利技术是按照以下技术方案实施的：
[0007]一种猫杯状病毒疫苗抗原含量评估方法，包括以下步骤：
[0008]S1、用细胞培养的猫杯状病毒对猫进行攻毒采抗体猫血清，将抗体猫血清用包被液包被并以0.2μg/mL为终浓度稀释，每孔50μL包被到96孔板内，37℃静置2小时；
[0009]S2、洗涤；
[0010]S3、用脱脂奶粉进行封闭，37℃静置2小时；用破碎细胞培养液封闭非特异抗体；
[0011]S4、洗涤；
[0012]S5、加入待测抗原，37℃静置2小时；
[0013]S6、洗涤；
[0014]S7、加入酶标抗原，37℃静置2小时；
[0015]S8、洗涤；
[0016]S9、加入TMB过氧化物酶底物显色液，每孔50μL，37℃避光显色15min，显色后每孔加入终止液50μL，使用酶标仪在波长450nm计算各孔吸光度OD值；根据OD值之间差异评价不同疫苗间抗体含量差异，OD值越低抗原含量越高。
[0017]进一步地，所述洗涤是将孔内包被液弃去、甩干，加入Wash Buffer，每孔100μL，间隔6min洗涤一遍，洗涤三次；置于脱色摇床。
[0018]与现有技术相比，本专利技术通过抗原竞争法检测猫杯状病毒疫苗抗原含量，具体是待检抗原与酶标抗原竞争与固相抗体的结合，样品中抗原含量越多，结合在固相抗体上的酶标抗原越少，显色越浅。
[0019]综述，本专利技术检测成本低，操作简单，反应时间短。
具体实施方式
[0020]为使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步的详细说明。此处所描述的具体实施例仅用于解释本专利技术，并不用于限定专利技术。
[0021]对猫杯状病毒，猫孢疹病毒，及空白细胞培养液进行检测。
[0022]S1、对3
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5月的小猫注射猫杯状病毒，观察发病症状，确认发病后抽取阳性血清。稀释100倍测血清中蛋白含量；将抗体猫血清用包被液包被并以0.2μg/mL为终浓度稀释，每孔50μL包被到96孔板内，37℃静置2小时；
[0023]S2、洗涤：将孔内包被液弃去、甩干，加入Wash Buffer，每孔100μL，间隔6min洗涤一遍，洗涤三次；置于脱色摇床；
[0024]S3、用脱脂奶粉进行封闭，37℃静置2小时；
[0025]S4、洗涤：将孔内包被液弃去、甩干，加入Wash Buffer，每孔100μL，间隔6min洗涤一遍，洗涤三次；置于脱色摇床；
[0026]S5、加破碎细胞培养液，37℃静置2小时；
[0027]S6、洗涤：将孔内包被液弃去、甩干，加入Wash Buffer，每孔100μL，间隔6min洗涤一遍，洗涤三次；置于脱色摇床；
[0028]S7、加入未灭活的猫杯状病毒和猫孢疹病毒及空白细胞培养液，37℃静置2小时；
[0029]S8、洗涤：将孔内包被液弃去、甩干，加入Wash Buffer，每孔100μL，间隔6min洗涤一遍，洗涤三次；置于脱色摇床；
[0030]S9、加入酶标的猫杯状病毒，37℃静置2小时；
[0031]S10、洗涤：将孔内包被液弃去、甩干，加入Wash Buffer，每孔100μL，间隔6min洗涤一遍，洗涤三次；置于脱色摇床；
[0032]S11、加入TMB过氧化物酶底物显色液，每孔50μL，37℃避光显色15min，显色后每孔加入终止液50μL，使用酶标仪在波长450nm计算各孔吸光度OD值；根据OD值之间差异评价不同疫苗间抗体含量差异，OD值越低抗原含量越高。
[0033]经检测，各样品OD值如表1所示。
[0034]表1
[0035]样品OD值猫杯状病毒0.2猫孢疹病毒0.9空白细胞培养液0.8
[0036]由表1可知，本专利技术的猫杯状病毒疫苗抗原含量评估方法可用于猫杯状病毒抗原检测。
[0037]本专利技术的技术方案不限于上述具体实施例的限制，凡是根据本专利技术的技术方案做出的技术变形，均落入本专利技术的保护范围之内。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猫杯状病毒疫苗抗原含量评估方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、用细胞培养的猫杯状病毒对猫进行攻毒采抗体猫血清，将抗体猫血清用包被液包被并以0.2μg/mL为终浓度稀释，每孔50μL包被到96孔板内，37℃静置2小时；S2、洗涤；S3、用脱脂奶粉进行封闭，37℃静置2小时；用破碎细胞培养液封闭非特异抗体；S4、洗涤；S5、加入待测抗原，37℃静置2小时；S6、洗涤；S7、加入酶标抗原，37℃静置2小时；S8、洗涤；S...

【专利技术属性】
技术研发人员：姬洪卫，宋松林，廉维，李晓蕊，王国辉，边少国，孟相秋，李爽，贾小营，吴晶，张馨元，周洋，江松寰，包俊威，蒋焯，陈彦男，
申请(专利权)人：吉林正业生物制品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：