一种生物标志物GSDME的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种生物标志物GSDME的应用。包括生物标志物GSDME蛋白在用于制备诊断骨关节炎OA亚型的试剂盒上的用途，试剂盒中放置有用于检测生物标志物GSDME蛋白的表达水平的检测试剂和检测用具，试剂盒还用于对骨关节炎OA亚型进行预后评估。本发明专利技术基于具有较高的特异性、通用性和可靠性的GSDME蛋白作为生物标志物，并且制备了可以更加简单方便地检测GSDME蛋白的试剂盒，使用简便，易于推广及普及。及。及。

【技术实现步骤摘要】
一种生物标志物GSDME的应用


[0001]本专利技术涉及了一种生物标志物GSDME的应用，具体涉及一种生物标志物 GSDME在用于制备骨关节炎亚型诊断试剂盒上的应用。

技术介绍

[0002]骨关节炎(Osteoarthritis，OA)作为老年人常见的关节退行性疾病，会影响滑膜和软骨从而导致关节破坏和临床一系列症状。目前认为骨关节炎的病理过程包括软骨的进行性丢失和破坏、软骨下骨硬化、骨赘形成、不同程度的滑膜炎症、韧带和半月板退变等，临床表现为关节疼痛、短暂的晨僵、活动障碍，发展至终末期时不得不进行关节置换。这也使得膝关节骨关节炎成为中老年人致残的主要原因之一。目前，由于对骨关节炎的病理机制还不太明确，导致有关骨关节炎早期的诊断、治疗方法依然没有取得突破性的进展。当前所常用的骨关节炎的诊断方式可大致分为两类，一类是X线、超声及MRI等借助影像进行诊断，另一类是通过骨关节炎相关生物标志物进行诊断。当前，可用于诊断骨关节炎的生物标志物有II型胶原C
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端肽、基质金属蛋白酶、肿瘤坏死因子
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α (TNF
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α)以及白细胞介素
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1(IL
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1)等。但由于大多数生物标志物会随着多种病理生理驱动，也受到药物干预的影响，造成测量不准确，且部分无法有效预测标志关节炎的严重程度及进展，亟需新的可靠的生物标志物用以实现可靠的骨关节炎诊断。
[0003]此外，当前对骨关节炎中生物标志物的检测，常通过qPCR、组织切片免疫组化等方式进行，检测过程步骤多、耗时长多，且需要在具有专业条件的实验室中开展，因而在一些未配备实验室条件的基层医院中无法实现，故亟需一种方便可靠的骨关节炎诊断方式。
[0004]细胞凋亡和自噬是骨关节炎发病的两大机制，而细胞焦亡(Pyroptosis)是区别于它们的一种细胞程序性炎症死亡，表现为细胞不断胀大直至细胞膜破裂，导致细胞内容物释放并引起强烈的炎症反应。最近研究人员在细胞焦亡领域取得新突破，揭示gasdermin家族中GSDME(gasdermin E)介导细胞焦亡的机制，该蛋白主要受caspase3或caspase8激活，能诱导非炎症性细胞凋亡向细胞焦亡转变。目前已有GSDME在骨关节炎中的相关研究，揭示了骨关节炎与GSDME 表达水平的相关性。因而GSDME作为骨关节炎诊断生物标志物具有极大潜力。

技术实现思路

[0005]为了解决
技术介绍
中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种生物标志物 GSDME在用于制备骨关节炎亚型诊断试剂盒在骨关节炎诊断及预后评估上的用途。为了实现上述目的及其他相关目的，本专利技术在细胞、动物以及人体层面证明了骨关节炎后GSDME蛋白显著增加，因此可通过检测受试个体关节液中的GSDME蛋白的水平，以诊断和预示骨关节炎，为关节炎的诊断提供新的途径。本专利技术第一方面提供GSDME蛋白作为生物标志物用以检测骨关节炎严重程度及预后和/或对骨关节炎严重程度及疾病疗效进行评估的检测试剂盒上的用途。本专利技术第二方面提供一种检测骨关节炎亚型的诊断试剂盒。
[0006]本专利技术采用的技术方案是：
[0007]一、生物标志物GSDME的应用
[0008]所述的生物标志物GSDME蛋白在用于制备诊断骨关节炎OA亚型的试剂盒上的用途。
[0009]所述的生物标志物GSDME蛋白为gasdermin E蛋白。
[0010]所述的试剂盒中放置有用于检测生物标志物GSDME蛋白的表达水平的检测试剂和检测用具，所述的检测试剂包括：人GSDME蛋白标准品、抗GSDME 抗体、兔抗人IgG H&G抗体、显色反应底物溶液以及反应终止溶液；所述的检测用具包括：酶标板。
[0011]所述的人GSDME蛋白标准品具体为重组人GSDME蛋白；
[0012]所述的显色反应底物溶液具体为四甲基联苯胺溶液；
[0013]所述的反应终止溶液具体为2M的硫酸溶液。
[0014]所述的试剂盒还用于对骨关节炎OA亚型进行预后评估。GSDME蛋白的表达水平与骨关节炎OA亚型预后成负相关。
[0015]二、一种诊断主体骨关节炎亚型的方法
[0016]方法包括：获取样品溶液，检测样品溶液中的生物标志物GSDME蛋白的表达水平是否异常升高，若出现异常升高，则表明属于骨关节炎OA亚型的骨关节炎。
[0017]所述的生物标志物GSDME蛋白为gasdermin E蛋白；样品溶液具体为关节液。
[0018]所述的生物标志物GSDME蛋白的表达水平使用酶联免疫吸附ELISA法进行定量检测。
[0019]所述的生物标志物GSDME蛋白来源于体外溶液，例如可以来源于非活体的组织液中。
[0020]本专利技术的有益效果是：
[0021]本专利技术提供了一种生物标志物GSDME在用于制备骨关节炎亚型诊断试剂盒，建立了实用的、灵敏的、特异的关节液GSDME免疫学检测方法。本专利技术的研究表明，GSDME蛋白是一种具有较高特异性、通用性、可靠性，易于推广普及的预测骨关节炎的严重程度及预后评估的生物标志物，可为判断骨关节炎患者预后，制定合理治疗方案提供客观依据；而且，相较于活检获取软骨组织样本来检测GSDME蛋白的表达，关节液样本更容易获取，更便于GSDME蛋白的表达水平的检测，且GSDME蛋白的检测方法更为简便，更易于在临床性或基层医院推广应用；此外，本专利技术建立的GSDME蛋白免疫检测方法提供了一类可靠的骨关节炎生物学诊断依据，为当前基于临床数据的诊断方式提供帮助。
附图说明
[0022]图1为本专利技术收集近百例OA患者与其它患者的关节液的转录组测序 RNA
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seq技术的分析结果，以及基于GSDME蛋白分类的临床数据示意图；
[0023]图2为本专利技术动物实验中对手术组及假手术组的膝关节组织样本中GSDME 蛋白的表达水平的免疫荧光结果示意图；
[0024]图3为本专利技术动物实验中免疫印迹法(Western Blotting，WB)检测手术组的软骨组织GSDME蛋白的表达水平的示意图；
[0025]图4为本专利技术主体实验中酶联免疫吸附ELISA法检测骨关节炎主体和非骨关节炎
主体关节液样本中GSDME蛋白的表达水平的两组随机对比实验结果示意图。
具体实施方式
[0026]下面结合附图及具体实施例对本专利技术作进一步详细说明。
[0027]实施例：
[0028]进行人体实验，取实施例2中收集的一医院近百例骨关节炎OA亚型患者和其它患者的关节液以及若干份非活体动物中的关节液，对于上述所述的骨关节炎OA亚型患者的纳入标准为：年龄≥18岁，同时满足a)根据国际上公认的诊断标准诊断为膝关节骨性关节炎；2)K/L评分为2至3级；3)慢性膝关节源性疼痛；b)无局部或全身感染；c)血液学检测及生化检测无明显的关节腔穿刺禁忌；d)抽取患者关节积液0.5ml，若不能抽到关节积液，则不入组；排除标准为，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.生物标志物GSDME的应用，其特征在于：所述的生物标志物GSDME蛋白在用于制备诊断骨关节炎OA亚型的试剂盒上的用途。2.根据权利要求1所述的一种生物标志物GSDME的应用，其特征在于：所述的生物标志物GSDME蛋白为gasdermin E蛋白。3.根据权利要求1所述的一种生物标志物GSDME的应用，其特征在于：所述的试剂盒中放置有用于检测生物标志物GSDME蛋白的表达水平的检测试剂和检测用具，所述的检测试剂包括：人GSDME蛋白标准品、抗GSDME抗体、兔抗人IgG H&G抗体、显色反应底物溶液以及反应终止溶液；所述的检测用具包括：酶标板。4.根据权利要求1所述的一种生物标志物GSDME的应用，其特征在于：所述的人GSDME蛋白标准品具体为重组人GSDME蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘宗友，欧阳宏伟，戴雪松，沈炜亮，沈皓天，郑强强，徐凯望，黄冠睿，裘凯杰，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第二医院，
类型：发明
国别省市：