一种用于艰难梭菌感染检测的环状DNA模板前体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种用于艰难梭菌检测的环状DNA模板前体及其制备方法及其应用，所述环状DNA模板前体包括采用H1、H2发卡探针和触发链Trigger构成的反应体系进行三维自组装反应；所述三维自组装反应包括Trigger触发H1发夹结构，形成T/H1中间体，H1发夹结构被展开，并与H2结合产生H1/H2结构，H2的DNA模板环化，得到环状DNA模板前体；当艰难杆菌毒素存在时能够使触发链Trigger再次释放，能够连续催化所述H1DNA发卡探针的发夹结构而不被消耗。采用本发明专利技术的技术方案，通过三维自组装‑扩增反应及银增强金纳米实现信号的级联三级放大，从而实现艰难梭菌感染的高灵敏、高特异检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测，具体地，涉及一种用于艰难梭菌检测的环状dna模板前体及其制备方法和应用。

技术介绍

1、艰难梭菌感染(clostridioides difficile infection，cdi)是由艰难梭菌引起的一种医院获得性感染性疾病，其致病菌广泛存在于医院环境中，已成为住院患者腹泻最常见的原因。艰难梭菌感染后，轻者可致腹泻，重者可表现为中毒性肠炎、伪膜性肠炎，甚至死亡。由于艰难梭菌感染具有高发病率、高复发率、高死亡率等特点，是导致患者预后差和死亡最重要的医院感染之一。导致艰难梭菌感染难以控制、新增病患数居高不下的主要原因在于艰难梭菌感染的早期诊断、鉴别诊断时间长、效率低、漏诊率高，制约着临床治疗的及时性和有效性。因此，如何在床旁建立一种灵敏、简便、智能的检测艰难梭菌感染新方法仍然是亟待解决的技术瓶颈。

2、艰难梭菌感染(clostridioides difficile infection，cdi)是导致患者预后差和死亡最重要的医院感染之一。毒素释放是艰难梭菌感染致病的关键，大多数产毒菌株可以产生毒素a(tcda)和毒素b(tcdb本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于艰难梭菌检测的环状DNA模板前体的制备方法，包括采用H1 DNA发卡探针、H2 DNA发卡探针和触发链Trigger构成的反应体系进行三维自组装反应；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述三维自组装反应的循环条件设置的退火程序包括：变性：95℃、2min；退火：65℃、2min，60℃、6min，60℃-20℃、降温速率0.5℃/30秒，80个循环；20℃、30s；4℃、10min。

4.一种用于艰难梭菌检测的环状DNA模板前体，采用如权利要求1-3任一项所述的制备方法制备得...

【技术特征摘要】

1.一种用于艰难梭菌检测的环状dna模板前体的制备方法，包括采用h1 dna发卡探针、h2 dna发卡探针和触发链trigger构成的反应体系进行三维自组装反应；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述三维自组装反应的循环条件设置的退火程序包括：变性：95℃、2min；退火：65℃、2min，60℃、6min，60℃-20℃、降温速率0.5℃/30秒，80个循环；20℃、30s；4℃、10min。

4.一种用于艰难梭菌检测的环状dna模板前体，采用如权利要求1-3任一项所述的制备方法制备得到。

5.如权利要求4所述的环状dna模板前体在检测艰难梭菌感染中的应用；通过利用所述环状dna模板前体为原料进行合成dna水凝胶来判断待测样本是否被艰难梭菌感染；若成功合成得到所述dna水凝胶，则待测样本为阳性；若不能合成得到所述dna水凝胶，则待测样本即为阴性。

6.一种检测艰难梭菌感染的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏安越，徐欢，张可欣，冯东方，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第二医院，
类型：发明
国别省市：