一种RNA加帽方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种RNA加帽方法及其应用。本发明专利技术提供了一种类似于共转录加帽的全新RNA加帽方法，所述方法为，构建自复制载体用以表达待加帽的目标RNA，所述自复制载体上含有编码目标RNA的基因序列、T7启动子及位于T7启动子下游的cap1类帽子类似物。这一方法不仅提高了现有帽子类似物GAU的加帽效率，而且帽子类似物结合稳定，不会反向加帽从而提高了加帽RNA的翻译效率，同时无需甲基化修饰等步骤，简化了加帽步骤。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于rna加帽，尤其涉及一种rna加帽方法及其应用。

技术介绍

1、目前，rna加帽的方法主要包括酶法加帽和共转录加帽两种。酶法加帽使用加帽酶进行转录后加帽，最常使用的是牛痘病毒加帽酶(vce)，该反应过程中加帽酶的异源二聚体会导致产量较低，短期内难以放大。酶法加帽由于增加质控项目，导致工序繁杂，虽然酶法加帽的加帽率100％，但成本较高，不利于工业生产。共转录加帽使用帽类似物进行共转录加帽，目前常用的帽类似物有两种：arca(抗-反帽结构类似物)和cap 1帽类似物。共转录加帽为一步法加帽，操作简单，使用cap 1结构帽类似物，加帽率可达95％。但研究发现帽类似物会以相反的方向结合mrna链，反向加帽的mrna不能被核糖体识别，导致翻译效率降低，为了避免反向加帽，mrna疫苗开发过程中一般采用具有甲基化修饰的修饰帽类似物来进行共转录加帽，但这会导致加帽过程变得繁琐。

2、tata box(也称为tata序列)是一种dna序列，通常位于基因启动子区域的位置，它是多种真核生物dna转录的起始点。这个序列中的"ata"部分被rna聚合酶ii本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种RNA加帽方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的RNA加帽方法，其特征在于，所述自复制mRNA载体中含有结构蛋白，结构蛋白序列来源于含正链RNA的病毒。

3.根据权利要求1所述的RNA加帽方法，其特征在于，所述目标RNA加帽完成后的帽子类似物为GAU或GAG。

4.根据权利要求1所述的RNA加帽方法，其特征在于，在步骤S2中，表达加帽目标RNA包括以下步骤：从重组菌中提取质粒DNA，选择测序正确的序列加入RNA体外合成体系中，转录出加帽后的RNA。

5.根据权利要求4所述的RNA加帽方法，其特征在于，RNA体外合...

【技术特征摘要】

1.一种rna加帽方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的rna加帽方法，其特征在于，所述自复制mrna载体中含有结构蛋白，结构蛋白序列来源于含正链rna的病毒。

3.根据权利要求1所述的rna加帽方法，其特征在于，所述目标rna加帽完成后的帽子类似物为gau或gag。

4.根据权利要求1所述的rna加帽方法，其特征在于，在步骤s2中，表达加帽目标rna包括以下步骤：从重组菌中提取质粒dna，选择测序正确的序列加入rna体外合成体系中，转录出加帽后的rna。

5.根据权利要求4所述的rna加帽方法，其特征在于，rna...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊长云，周芮，
申请(专利权)人：宁波君健生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：