一种生物法制备睾酮的精制方法技术

本发明专利技术公开了一种生物法制备的睾酮粗品的精制方法，其包括以下步骤：(1)将干燥的睾酮粗品与醇混匀，升温至60℃以上，使所述睾酮粗品完全溶解并出现絮状变性蛋白沉淀；(2)加入包含活性炭的助滤剂以吸附所述絮状变性蛋白沉淀；过滤收集滤液，滤饼用甲醇淋洗；(3)滴加纯水，混匀后升温至60℃以上，浓缩并回收85wt％的醇溶液；搅拌降温至8℃以下析晶出大量固体，过滤收集滤饼；依次用乙醇和纯水淋洗，滤饼干燥后得睾酮精品。本发明专利技术的精制方法对生物法制备的睾酮粗品中K杂及A杂精制效果明显，成品睾酮中K杂含量＜0.15％，A杂含量＜0.05％，符合最新EP10.1标准；成品收率能够达到93％及以上。到93％及以上。

【技术实现步骤摘要】
一种生物法制备睾酮的精制方法


[0001]本专利技术涉及甾体药物制备
，具体涉及一种用于生物法制备睾酮的精制方法。

技术介绍

[0002]睾酮(如下式III所示)是一种激素类药物，属于甾体化合物，临床上作为性激素药物治疗原发性和继发性男性性腺功能减退，维持男性第二特征、性功能等。传统合成睾酮的方法是将双烯醇酮醋酸酯肟化、贝式反应、水解等步骤得到雄烯二酮，再以雄烯二酮为原料，经过两步反应得到睾酮粗品，由于从雄烯二酮合成睾酮需要先将3
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酮基进行保护，再进行17
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酮基还原，该方法步骤较多且粗品中杂质较多，精制成本较高。
[0003]随着生物催化以及酶催化技术的发展，细胞转化以及酶催化法制备睾酮逐渐替代了化学合成的方法，利用细胞转化或者酶催化的方法，以雄烯二酮为底物，选择性还原17
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酮基成β
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羟基，一步转化雄烯二酮到睾酮(路线a)，简化了生产工艺以及节省了生产成本。
[0004][0005]但是在该反应中，原料中的K杂前体物质(式IV)也会被转化成K杂(式I)，I杂前体物质(式V)也会被转化成I杂(式VI)。由于K杂(式I)结构与睾酮(式III)极度相似，导致生物法制备的睾酮(式III)中K杂(式I)和A杂(式II)较难除去，需要采用大量乙酸乙酯和正己烷析晶进行精制，工艺复杂且溶剂难以回收，成本较高。
[0006][0007]且该方法精制获得的睾酮不符合EP10.1的标准：K杂＜0.15％，A杂＜0.1％，其他单杂＜0.1％。

技术实现思路

[0008]为解决现有技术中生物法制备的睾酮精制产物不符合EP10.1的标准的技术问题，本专利技术提供了一种用生物法制备睾酮的精制方法。所述精制方法特别是对睾酮中难以精制的K杂以及A杂具有较好的精制效果，成品睾酮中K杂含量＜0.15％，A杂含量＜0.05％，符合睾酮最新EP10.1标准：K杂＜0.15％，A杂＜0.1％。且所用工艺精制工艺较为简单，易于溶剂回收，降低了成本，在优选的技术方案中最后成品收率能够达到96％及以上。
[0009]为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为：
[0010](1)将干燥的睾酮粗品与醇混匀，升温至60℃以上，使所述睾酮粗品完全溶解并出现絮状变性蛋白沉淀；
[0011](2)加入包含活性炭的助滤剂，吸附(1)的溶液中的絮状变性蛋白沉淀；过滤收集滤液，滤饼上少量残留的睾酮用甲醇淋洗；
[0012](3)向上述溶液中滴加纯水，混匀后升温至60℃以上，浓缩并回收85wt％的醇溶液；搅拌降温至8℃以下析晶出大量固体，过滤收集滤饼；依次用乙醇和纯水淋洗，将滤饼干燥后得睾酮精品。
[0013]在一些具体的实施例中，所述醇包括甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇或正丁醇或由它们组成的混合溶剂。
[0014]在一些具体的实施例中，所述包含活性炭的助滤剂中还包括石棉、石墨粉、锯屑、
酸性白土、珍珠岩、泥浆、淀粉、硅藻土、造纸、氧化镁、石膏、纤维素和氢氧化铝中的一种或多种。
[0015]在一些具体的实施例中，所述精制方法的条件选自以下组：
[0016]i)步骤(1)中，所述醇为甲醇或乙醇；
[0017]ii)步骤(2)中，所述包含活性炭的助滤剂为活性炭和硅藻土，或活性炭和纤维素。
[0018]在一些具体的实施例中，步骤(1)中，所述睾酮粗品由细胞转化方法或酶催化方法制得。
[0019]在一些具体的实施例中，步骤(1)中，所述睾酮粗品通过过滤收集。
[0020]在一些具体的实施例中，步骤(1)中，所述升温的同时进行搅拌和回流的处理。
[0021]在一些具体的实施例中，所述过滤为抽滤。例如步骤(1)、(2)和(3)中的过滤均采用抽滤进行。
[0022]在一些具体的实施例中，所述干燥为真空干燥。例如步骤(1)和(3)中均采用真空干燥的方法。
[0023]在一些具体的实施例中，步骤(1)中，所述醇与睾酮粗品的体积质量比为：(4～12):1，优选采用(5～8):1。
[0024]在一些具体的实施例中，步骤(1)中，当所述醇为甲醇时，升温至70℃以上。
[0025]在一些具体的实施例中，步骤(2)中，所述吸附在搅拌下进行。
[0026]在一些具体的实施例中，步骤(2)中，包含活性炭的助滤剂与睾酮粗品的用量比为(4～5):15。
[0027]在一些具体的实施例中，步骤(2)中，所述硅藻土和活性炭的用量比为1:1，或，所述纤维素和活性炭的用量比为3:5。
[0028]在一些具体的实施例中，步骤(2)中，所述甲醇与睾酮粗品的体积质量比为：(1～3):3，优选为2:3。
[0029]在一些具体的实施例中，步骤(3)中，纯水与睾酮粗品的体积质量比为(5～10):6，优选为5:6。
[0030]在一些具体的实施例中，步骤(3)中，纯水的加入速度为2～10ml/min；例如为5ml/min。
[0031]在一些具体的实施例中，步骤(3)中，用于淋洗的纯水与睾酮的体积质量比为(5～10):1；优选为(6～7):1。
[0032]在一些具体的实施例中，步骤(3)中，所述混匀在搅拌下进行。
[0033]在一些具体的实施例中，步骤(3)中，所述浓缩为减压浓缩。
[0034]在一些具体的实施例中，步骤(3)中，所述降温在搅拌下进行。
[0035]在一些具体的实施例中，步骤(3)中，所述乙醇为冷冻的乙醇；例如5～8℃的乙醇。
[0036]在一些具体的实施例中，步骤(3)中，所述乙醇与睾酮的体积质量比为(0.5～2):3；优选为1:3。
[0037]在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。本专利技术所用试剂和原料均市售可得。
[0038]本专利技术的积极进步效果在于：本专利技术的精制方法对生物法制备的睾酮粗品中K杂及A杂精制效果明显，成品睾酮中K杂含量＜0.15％，A杂含量＜0.05％，精制成品符合最新
513.4021.446475690.957A杂0.857％
[0056]表2细胞转化睾酮精品HPLC
[0057][0058][0059]实施例2酶催化方法得到的睾酮粗品的精制
[0060]第一步：将含有30g睾酮粗品的酶催化转化液300mL过滤，收集睾酮粗品，将睾酮粗品进行真空干燥后，加入240mL甲醇，搅拌下升温至70℃回流1h，直至物料完全溶解并出现絮状变性蛋白沉淀。
[0061]第二步：向上述溶液中添加5g硅藻土和5g活性炭，维持恒温状态搅拌使不溶物被助滤剂吸附，过滤收率滤液，滤饼上少量残留的睾酮用20mL甲醇淋洗。
[0062]第三步：向上述溶液中以5ml/min的速率滴加纯净水25mL，搅拌均匀后升温至60℃，减压浓缩出85wt％的甲醇溶液并回收，搅拌降温至8℃以下析晶出大量固体，抽滤收集滤饼，用10ml冷冻乙本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物法制备的睾酮粗品的精制方法，其特征在于，其包括以下步骤：(1)将干燥的睾酮粗品与醇混匀，升温至60℃以上，使所述睾酮粗品完全溶解并出现絮状变性蛋白沉淀；(2)加入包含活性炭的助滤剂以吸附所述絮状变性蛋白沉淀；过滤收集滤液，滤饼上少量残留的睾酮用甲醇淋洗；(3)滴加纯水，混匀后升温至60℃以上，浓缩并回收85wt％的醇溶液；搅拌降温至8℃以下析晶出大量固体，过滤收集滤饼；依次用乙醇和纯水淋洗，滤饼干燥后得睾酮精品。2.如权利要求1所述的精制方法，其特征在于，所述精制方法的条件选自以下组：i)步骤(1)中，所述醇为甲醇或乙醇；ii)步骤(2)中，所述包含活性炭的助滤剂为活性炭和硅藻土，或活性炭和纤维素。3.如权利要求1所述的精制方法，其特征在于，步骤(1)中，所述精制方法的条件选自以下的一种或多种：i)所述睾酮粗品由细胞转化方法或酶催化方法制得；ii)所述睾酮粗品通过过滤收集；iii)所述升温的同时进行搅拌和回流的处理。4.如权利要求3所述的精制方法，其特征在于，所述精制方法的条件选自以下的一种或多种：i)步骤(1)～(3)中，所述过滤为抽滤；ii)步骤(1)和(3)中，所述干燥为真空干燥。5.如权利要求1所述的精制方法，其特征在于，步骤(1)中，所述精制方法的条件选自以下组：i)所述醇与睾酮粗品的体积质量比为：(4～12):1，优选采用(5～...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘明欣，何鑫，陈海林，刘林，杨艳青，
申请(专利权)人：黄冈人福药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：