一种犬源猫细小病毒分离株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种犬源猫细小病毒分离株，属于生物技术和病毒学技术领域，所述分离株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉，保藏编号为CCTCC NO:V202237，保藏日期为2022年5月11日，分类命名为犬源猫细小病毒S/CD/2021。本发明专利技术还涉及该犬源猫细小病毒分离株的应用。本发明专利技术犬源猫细小病毒能够跨宿主传播引起犬的全身感染，制备成灭活疫苗后能产生较高水平的中和抗体，具备疫苗的基本潜质，能够保护犬类免受猫细小病毒的攻击。能够保护犬类免受猫细小病毒的攻击。能够保护犬类免受猫细小病毒的攻击。

【技术实现步骤摘要】
一种犬源猫细小病毒分离株及其应用


[0001]本专利技术涉及生物技术和病毒学领域，具体涉及一种犬源猫细小病毒分离株及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，随着人们生活水平的不断提高，宠物已成为人们生活中不可或缺的部分，迅速膨胀的宠物行业给社会发展带来活力的同时也存在诸多亟待解决的问题，例如，犬瘟热、犬细小病毒病、犬冠状病毒病等传染病在世界范围内广泛流行，迅速蔓延，对养犬业造成巨大危害。其中，犬细小病毒病尤为严重，致死率高达50％～90％，严重危害了养犬业的发展。
[0003]犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)属于细小病毒科、细小病毒属，是一种无囊膜、二十面体结构、由32个壳粒组成衣壳的单股负链DNA病毒，犬细小病毒感染会引起以呕吐、腹泻、白细胞减少和出血性肠炎为特征的具有高度接触性的急性烈性传染病，犬细小病毒(CPV)病自发现以来一直是危害犬类健康的最严重的传染病之一。
[0004]CPV与猫细小病毒(FPV)的基因组同源性达到98％以上，仅有几个氨基酸位点的区别，因此被认为来源于FPV或由某些中间媒介从FPV进化而来，CPV粒子表面由60个VP1和VP2交替的基序构成，VP2占90％，而VP1只占10％，因此VP2是构成衣壳蛋白的主要成分，VP2表面几个氨基酸位点的不同使得CPV、FPV具有各自特定的宿主范围、抗原型以及血凝特性。CPV在温度4～25℃，pH6.0～7.2的条件下能凝集猫、猪、恒河猴、马和仓鼠的红细胞,不能凝集牛、兔、山羊、豚鼠、大鼠、小鼠、地鼠、鹅、鸡和人的O型红细胞。FPV的宿主范围包括家养和野生猫科动物(亚目felimia)和一些野生犬科动物(亚目caniformia)，例如浣熊和狐狸，但不包括家犬。虽然FPV在实验接种后可以在犬的淋巴组织(胸腺和骨髓)中复制，但它不能结合犬转铁蛋白受体(tfr)，结合转铁蛋白受体是感染的关键，因此FPV不会进一步感染犬；相反，CPV感染猫却是很常见。
[0005]但近年来，已经有多个报道从犬粪便中检测出猫细小病毒，包括中国、越南、巴基斯坦、泰国等；但仅越南(Hoang M,Wu C N,Lin C F,et al.Genetic characterization of feline panleukopenia virus from dogs in Vietnam reveals a unique Thr101 mutation in VP2[J].PeerJ,2020,8(160):e9752.)、中国(Chen B,Zhang X,Zhu J,et al.Molecular Epidemiological Survey of Canine Parvovirus Circulating in China from 2014to 2019.2021.)分析了VP2蛋白特征，且均未分离得到毒株，因此，该犬源猫细小病毒的生物学特性及对犬的致病性尚不明确。
[0006]CPV感染后，发病快并且死亡率较高，目前用于CPV的防控措施主要是疫苗免疫，CPV到目前为止只有一个抗原型，即CPV
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2，市场上可供选择的商品化CPV疫苗也较多，包括进口及国产疫苗，但均属于弱毒疫苗。但是，CPV存在抗原漂移，其后出现了在宿主范围、血凝性和抗原性上都发生了变化的不同亚型CPV
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2a、CPV
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2b、CPV
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2c(a)和CPV
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2c(b)，随着病毒的不断变异，给此病的治疗以及预防带来了新的挑战。对于现有的疫苗能否保护新出现
的犬源猫细小病毒尚不清楚。
[0007]因此，迫切需要分离新出现的犬源猫细小病毒，研制疫苗来预防该病的发生，减少该病毒对犬的伤害。

技术实现思路

[0008]为了解决现有CPV预防中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种犬源猫细小病毒分离株及其应用，本专利技术对犬源猫细小病毒株(即S/CD/2021分离株)进行分离培养、鉴定，并研究其致病性，以该病毒分离株制得的疫苗组合物免疫幼犬后能够产生高水平的抗体。
[0009]本专利技术的技术方案是：
[0010]本专利技术的第一目的在于提供一种犬源猫细小病毒分离株，其微生物保藏号为CCTCC NO:V202237。
[0011]CPV是一种自主复制的细小病毒，其基因组是单股、负链、线形DNA。基因组含有5323个核苷酸，是DNA病毒中最小的。基因组含有两个开放阅读框(ORFs),第一个ORF由基因组左半部分，编码早期转录的调节蛋白一非结构蛋白NSI和NS2；第二个ORF位于基因组的右半部分，编码病毒衣壳蛋白一结构蛋白VP1和VP2，结构蛋白主要负责构成病毒粒子的衣壳，在病毒感染过程中起着非常重要的作用。有研究表明，犬细小病毒表面的VP2蛋白能够与宿主细胞表面的转铁蛋白受体(Transferrin receptor,TfR)进行特异性结合，通过网格蛋白介导的内吞途径使病毒进入细胞；缺失VP2蛋白或VP1蛋白的突变体均丧失了对宿主细胞的感染性。
[0012]本专利技术分离的S/CD/2021毒株的VP2蛋白关键氨基酸位点与传统猫细小病毒完全一致，但NS1蛋白上也有氨基酸位点突变，证明了猫细小病毒出现了一种新的进化方式，是由NS1蛋白进化，不同于现有研究是通过VP2蛋白进化。
[0013]本专利技术的第二目的在于提供一种前述猫细小病毒分离株在制备用于预防和/或治疗犬源猫细小病毒所致疾病产品中的应用；所述致疾病包括犬急性肠胃炎或急性心肌炎。
[0014]进一步地，所述产品为疫苗。
[0015]进一步地，所述疫苗选自灭活疫苗、弱毒疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗、多肽疫苗中的一种或几种。
[0016]本专利技术所用的术语“灭活疫苗”，也称作失活疫苗，指的是用作抗原以产生免疫力的灭活病毒的混悬液。灭活疫苗包括但不限于全病毒疫苗和裂解型疫苗。使用已知方法可以很容易地产生灭活疫苗。例如，通过用甲醛溶液处理病毒可获得全病毒灭活疫苗，裂解型疫苗可在用醚处理后由病毒包膜制备得到。例如用本专利技术所述的犬源猫细小病毒S/CD/2021分离株可以通过灭活的方法制备成灭活疫苗。
[0017]本专利技术第三专利技术目的在于提供一种疫苗组合物，包括有效量的前述犬源猫细小病毒分离株和/或药学上可接受的载体或辅料。
[0018]所述有效量是指在组合物施用的宿主中发挥它们的免疫学作用而不导致过度副作用所必需量。所用的成分和待施用的组合物的精确的量将根据因素如治疗的疾病的类型，待治疗的动物的类型和年龄，施用的方式，以及组合物中的其它成分而变化。
[0019]本专利技术所用的术语“药学上可接受的载体或辅料”，意指一种当被施用时不会在被
施用个体内造成过敏性反应或其它非所需的效用的载体或辅料。依据本专利技术，所述药学上可接受的载体或辅料包括但不限于下列试剂：溶剂、乳化剂、悬浮剂、分解剂、粘合剂、赋形剂、稳定剂、螯合剂、稀释剂、胶凝剂、防腐剂、润滑剂以及类似物。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种犬源猫细小病毒分离株，其特征在于，其微生物保藏号为CCTCC NO:V202237。2.权利要求1所述的猫细小病毒分离株在制备用于预防和/或治疗犬源猫细小病毒所致疾病产品中的应用；所述致疾病包括犬急性肠胃炎或急性心肌炎。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述产品为疫苗。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述疫苗选自灭活疫苗、弱毒疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗、多肽疫苗中的一种或几种。5.一种疫苗组合物，其特征在于，包括有效量的权利要求1所述的犬源猫细小病毒分离株和/或药学上可接受的...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤承，岳华，王佳丽，陈曦，王远微，
申请(专利权)人：西南民族大学，
类型：发明
国别省市：