一种真菌病毒VpFV1、一种弱毒性菌株及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种从梨树腐烂病菌(Valsa pyri)中分离的新病毒，命名为Valsa pyri fusarivirus 1(VpFV1)，其核苷酸序列如SEQ ID 1，具有抑制宿主致病力的作用。采用对峙培养及RNA介导原生质体转染的方法，VpFV1均能克服菌丝不亲和性及不依赖菌丝可在细胞外存在，证实其传染不同种类腐烂病菌，引起宿主腐烂病菌株弱毒特性。通过将含有病毒VpFV1的弱毒性YN

【技术实现步骤摘要】
一种真菌病毒VpFV1、一种弱毒性菌株及其应用


[0001]本专利技术属于植物病害生物防治
，涉及一种真菌病毒VpFV1、一种弱毒性菌株及其应用。

技术介绍

[0002]梨是一种世界性水果，在我国的种植面积和产量均位于世界首位。随着梨树栽培面积的扩大、配套管理技术不当、自然灾害连续发生等原因，使梨树面临严重的病虫害威胁。其中，梨树腐烂病的发生尤为严重，在我国梨主产区均有发生，尤以新疆、西北、华北、东北等地发生严重。其主要危害梨树的主枝和侧枝，且发病率高、难以控制，严重时还会造成大量死树或毁园(程栎菁，2012；周玉霞2013)。
[0003]研究发现一些真菌病毒的存在会使致病性真菌降低对植物的危害程度，如在板栗疫病中发现的真菌病毒可以使板栗疫病的致病力降低,在北美和欧洲板栗疫病的防治中起到了关键作用(Biraghi 1953,MacDonald and Fulbright 1991,Choi and Nuss 1992)；在白纹羽病菌中发现的病毒Rosellinia necatrix megabirnavirus 1(RnMBV1)能减慢病菌生长速度，降低病菌对宿主的影响,具有潜在的生防能力(Kondo et al 2013)；在梨轮纹病菌中发现的产黄青霉病毒Botryosphaeria dothidea Chrysovirus 1(BdCV1)引起梨轮纹菌的生长速率减慢、致病力减弱，具有弱毒特性(Wang et al 2014)。有研究发现从分离于河南郑州的一株气生菌丝稀少、致病力丧失的梨轮纹病和干腐病菌株YZN115中发现了一种新的dsRNA病毒BdRV1/YZN115通过分生孢子和菌丝进行接触传播，得到的传毒衍生菌株表现出生长异常及致病力丧失的特性(翟立峰，2016)。近年来，越来越多的真菌病毒被报道能够影响宿主的致病力，这些弱毒相关真菌病毒的发现为果树真菌病害的生物防治提供了新的思路(Xie and Jiang 2014,Kotta
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Loizou，2021)。因此，植物病原真菌弱毒病毒应用成为生物防治领域一种新型资源，弱病毒侵染真菌的强毒力菌株以后，若菌株之间能克服菌丝不亲和性融合进行水平传播，很快便能形成一个弱毒力真菌群体，能够有效地在田间持久定植，并且可以继续传播，从而可持续性防治。
[0004]目前，梨腐烂病的防治主要依靠化学药剂的使用，长期使用化学药剂不仅会使梨果实的品质降低，同时还会给环境带来很大的影响(曹克强，2009)。所以急需一种既可以有效防治梨腐烂病，又不会对食用者和环境带来不良影响的生物防治措施。据报道仅有一例苹果腐烂病菌在自然侵染状态下携带真菌病毒Valsa ceratosperma hypovirus 1(VcHV1)的报道，对菌株致病力没有影响(Yaegashi et al 2012)，目前，梨腐烂病菌自然侵染状态下未有真菌病毒感染及其影响菌株致病力的报道。
[0005]弱毒病毒的利用，可以减少施用化学农药，降低种植成本，避免植物病原真菌抗药性的产生，有利于维持生态平衡。发现和挖掘梨腐烂病菌中携带的真菌病毒种类，明确所携带真菌病毒的生物学特性以及其对宿主菌株致病性的影响，筛选出携带真菌病毒的弱致病力菌株，为有效用于田间绿色防治梨腐烂病菌提供重要的候选材料。该项工作对利用真菌病毒对梨腐烂病菌进行生物防治起到关键作用，在未报道任何相关研究的基础上开展该项
工作具有开创性和重大意义。

技术实现思路

[0006]针对我国梨树腐烂病菌的防治依赖于化学防治、缺乏有效生物防治措施的现状，本专利技术筛选出了一种含有VpFV1病毒的弱毒性梨腐烂病菌株，含有该病毒的弱毒性菌株能安全有效的将弱毒性病毒传播给不同种类的梨腐烂病菌株，引起受体菌株的弱毒特性。
[0007]本专利技术的目的之一在于提供了上述梨腐烂病弱毒性菌株，命名梨腐烂病(Valsa pyri)YN
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3菌株，后简称“YN
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3菌株”。该YN
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3菌株自采集自中国云南的梨腐烂病枝干病样中分离得到，已于2022年4月8日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 2022393。
[0008]进一步研究发现，YN
‑
3菌株含有两种病毒，均为正义单链RNA病毒，分别是VpFV1和VpPV1，其中VpFV1引起菌株弱毒特性。YN
‑
3菌株在25℃条件下PDA培养基上菌落呈现白色，质地柔韧，结构致密，在生长过程中，菌丝紧贴培养基生长，几乎无气生性，菌落生长较慢且畸形。
[0009]VpFV1属于Fusariviridae科Alphafusarivirus属一个新成员，命名为故命名为Valsa pyri fusarivirus 1，即VpFV1。该病毒3
’
末端有Poly(A)尾，基因组全长6722nt(不含A尾序列长度)，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1，包含3个开放阅读框(ORF)，分别命名为ORF1、ORF2和ORF3，每个ORF之间没有序列重叠。ORF1大小为1543aa，编码RdRp保守域和Hel保守域；ORF2大小为148aa；ORF3大小为443aa，编码SMC保守域，ORF2、ORF3功能未知。
[0010]VpPV1属于Botourmiaviridae科Penoulivirus属一个成员，这是首次在梨腐烂病中报道Penoulivirus的一个新种，故命名为Valsa pyri penoulivirus1，即VpPV1。VpPV1全长2769nt，含有1个ORF，编码RdRp。
[0011]本专利技术还提供YN
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3菌株以外其他上述VpFV1病毒的梨腐烂病(Valsa pyri)真菌宿主。其中，HN
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4、SX
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3和YN
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11均在YN
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3菌株的水平传播或对峙接种后，导致致病力降低。
[0012]因此，本专利技术的目的之二提供了上述病毒VpFV1、YN
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3菌株以及其他VpFV1病毒的梨腐烂病(Valsa pyri)真菌宿主以不同形式在生物防治中的应用，具体包括利用弱毒性YN
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3菌株水平对峙，YN
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3菌株的发酵液培养，以及总RNA转染原生质体的方法将YN
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3菌株携带的真菌病毒传播给其他强致病力腐烂病菌株中，得到携带VpFV1病毒的衍生菌株，从而降低其菌株对离体枝条的致病力；也包括上述YN
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3菌株、其他VpFV1病毒的梨腐烂病(Valsa pyri)真菌宿主、YN
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3菌株的发酵液在制备梨腐烂病(Valsa pyri)真菌防治剂中的应用，还包括该防治剂与植物接触防治梨腐烂病真菌的方法。
附图说明
[0013]图1为YN
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3菌株中dsRNA的1％琼脂糖凝胶电泳结果；
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种真菌病毒，其特征在于：为正义单链RNA病毒，其核苷酸序列如SEQ ID 1。2.一种含有权利要求1所述真菌病毒的弱毒性菌株，其分类命名为梨腐烂病(Valsa pyri)YN
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3菌株，保藏号为CCTCC NO:M 2022393。3.一种梨腐烂病(Valsa pyri)真菌，其特征在于：为权利要求1所述真菌病毒的感染宿主。4.一种发酵液，其特征在于：为权利要求2所述YN
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3菌株的发酵液。5.权利要求2所述的弱毒性菌株或权利要求3所述的梨腐烂病(Valsa pyri)真菌或权利要求4所述的发酵液在抑制梨腐烂病(Valsa pyri)真菌致病力中的应用。6.权利要求2所述的弱...

【专利技术属性】
技术研发人员：王利平，邹琦，高云静，李姗姗，王天好，朱浩东，吕沙妹，何颖，洪霓，王国平，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：