结合LAG-3的抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合LAG

【技术实现步骤摘要】
结合LAG
‑
3的抗体及其用途


[0001]本专利技术涉及抗体药物领域。具体而言，本专利技术涉及特异性结合LAG
‑
3的新型抗体和抗体片段以及含有所述抗体或抗体片段的组合物。此外，本专利技术涉及编码所述抗体的核酸及包含所述核酸的宿主细胞，以及制备所述抗体的方法。本专利技术还涉及这些结合LAG
‑
3的抗体的治疗和诊断用途。

技术介绍

[0002]免疫细胞在免疫反应的多个阶段受到充当“安全刹(security brakes)”的多种抑制性免疫检查点(immune checkpoint)分子调控。这些调控在防止由于对入侵的病原体的不恰当免疫反应引起的机体组织破坏上是重要的。但是，癌细胞却利用了这类抑制性免疫检查点分子来逃避免疫细胞特异性破坏肿瘤的免疫反应。
[0003]现有技术中，通过使用针对细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA
‑
4，CD152)、程序性死亡1(PD
‑
1，CD279)和其配体PD
‑
L1(CD274，B7
‑
H1)的单克隆抗体(mAb)来阻断免疫检查点分子，以恢复肿瘤特异性免疫细胞功能的癌症治疗在部分肿瘤患者中显著地改善了患者生存率。但是，由于肿瘤耐药性、缺乏肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和存在抑制性髓样细胞，使得患者对使用的针对所述免疫检查点分子的单克隆抗体的响应频率不甚理想(Awad,R.M等人，Turn Back the TIMe:Targeting Tumor Infiltrating Myeloid Cells to Revert Cancer Progression.Front.Immunol.2018,9,1977)。此外，免疫相关不良事件(immune
‑
related adverse event)的出现也是患者中止使用阻断所述免疫检查点的mAb的原因。为了提高患者的应答率并预防免疫相关不良事件，研究人员也研究了其他在癌细胞逃避抗癌免疫中起作用的抑制性免疫检查点分子，其中淋巴细胞活化基因
‑
3蛋白(lymphocyte activation gene
‑
3protein，LAG
‑
3)正成为具有癌症治疗和评估预后的重要靶标。
[0004]LAG
‑
3也称为CD223,属于免疫球蛋白超家族的成员，由胞外区、跨膜区和胞质区3个部分组成。LAG
‑
3的基因定位于12号染色体(12P13)，与CD4分子在染色体上的定位和结构相似，但两者的氨基酸序列仅有20％的同源性。
[0005]LAG
‑
3主要在T细胞(特别是活化的T细胞)、自然杀伤细胞、B细胞和浆细胞样树突状细胞表面表达。已显示LAG
‑
3是一种抑制性受体，具有维持内环境稳定和参与免疫调节的功能，与肿瘤的发生发展密切相关。LAG
‑
3的主要配体为II类组织相容性复合体(MHC
‑
II)，此外，半乳糖凝集素3(Galectin
‑
3)、肝窦内皮细胞凝集素(LSECtin)和纤维蛋白原样蛋白1(FGL
‑
1)也为其配体。在肿瘤微环境中，LSECtin、半乳糖凝集素3和FGL
‑
1可以与LAG
‑
3相互作用，抑制CD8+T细胞的抗肿瘤活性。
[0006]在癌症中，表达LAG
‑
3的调节性T细胞(Regulatory T cells，Treg)具有增强的抑制抗肿瘤活性，而表达LAG
‑
3的细胞毒CD8+T细胞具有降低的增殖速率和效应细胞因子产生(Scurr M.等人,Highly prevalent colorectal cancer
‑
infiltrating LAP
+
Foxp3
‑
T cells exhibit more potent immunosuppressive activity than Foxp3
+
regulatory T cells,Mucosal Immunol.2014,7(2):428
‑
439)。LAG
‑
3在许多浸润肿瘤的Treg细胞中表达
水平升高，这些细胞在黑素瘤、结直肠癌患者的外周血和肿瘤组织中也有表达，抗原呈递细胞(APC)上表达的MHC
‑
II与Treg细胞上LAG
‑
3之间的相互作用可以产生免疫抑制性细胞因子，从而抑制CD8+TILs活性。
[0007]由于肿瘤中LAG
‑
3表达水平和LAG
‑
3+细胞浸润与肿瘤进展、预后不良相关(Maruhashi T,Sugiura D,Okazaki I等人，Journal for ImmunoTherapy of Cancer 2020；8：e001014)，本领域仍然需要开发调节LAG
‑
3活性以活化免疫系统的新的抗LAG
‑
3抗体，特别是人源化抗体，以例如用于癌症免疫疗法和治疗其他疾病如感染性疾病。
[0008]专利技术概述
[0009]本专利技术人通过研究，开发了一组新型的具有高亲和力结合LAG
‑
3并通过阻断LAG
‑
3活性来活化免疫系统的的抗LAG
‑
3抗体(例如，人源化抗体分子)，从而满足了上述需求。本专利技术的特异性结合LAG
‑
3的抗体或抗原结合片段具有以下一个或多个特性：
[0010](a)以高亲和力结合LAG
‑
3，例如人LAG
‑
3和食蟹猴LAG
‑
3，例如，所述抗LAG
‑
3抗体或其抗原结合片段与LAG
‑
3之间结合的K
D
是约10
‑7M至约10
‑
12
M，优选地，约10
‑8M至约10
‑
12
M，如通过ForteBio动力学结合测定法所测量；
[0011](b)特异性地阻断LAG
‑
3与FGL
‑
1的结合；
[0012](c)特异性地阻断LAG
‑
3与细胞表面MHC II类分子(例如，人HLA)的结合；
[0013](d)使T细胞保持活化状态；
[0014](e)具有体内抗肿瘤功效。
[0015]因此，在第一方面，本专利技术提供了特异性结合LAG
‑
3的分离的抗体或抗原结合片段，其包含
[0016](a)SEQ ID NO:1所示的重链可变区氨基酸序列中的3个CDR和SEQ ID NO:2所示的轻链可变区氨基酸序列中的3个CDR；或者与所述6个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.特异性结合LAG
‑
3的抗体或抗原结合片段，其包含(a)SEQ ID NO:1所示的重链可变区氨基酸序列中的3个CDR和SEQ ID NO:2所示的轻链可变区氨基酸序列中的3个CDR；或者与所述6个CDR区具有单个CDR或者多个CDR不超过每个CDR区2个或1个氨基酸变化的变体；(b)SEQ ID NO:3所示的重链可变区氨基酸序列中的3个CDR和SEQ ID NO:4所示的轻链可变区氨基酸序列中的3个CDR；或者与所述6个CDR区具有单个CDR或者多个CDR不超过每个CDR区2个或1个氨基酸变化的变体；(c)SEQ ID NO:5所示的重链可变区氨基酸序列中的3个CDR和SEQ ID NO:6所示的轻链可变区氨基酸序列中的3个CDR；或者与所述6个CDR区具有单个CDR或者多个CDR不超过每个CDR区2个或1个氨基酸变化的变体；(d)SEQ ID NO:7所示的重链可变区氨基酸序列中的3个CDR和SEQ ID NO:8所示的轻链可变区氨基酸序列中的3个CDR；或者与所述6个CDR区具有单个CDR或者多个CDR不超过每个CDR区2个或1个氨基酸变化的变体；(e)SEQ ID NO:9所示的重链可变区氨基酸序列中的3个CDR和SEQ ID NO:10所示的轻链可变区氨基酸序列中的3个CDR；或者与所述6个CDR区具有单个CDR或者多个CDR不超过每个CDR区2个或1个氨基酸变化的变体；(f)SEQ ID NO:11所示的重链可变区氨基酸序列中的3个CDR和SEQ ID NO:12所示的轻链可变区氨基酸序列中的3个CDR；或者与所述6个CDR区具有单个CDR或者多个CDR不超过每个CDR区2个或1个氨基酸变化的变体；其中所述氨基酸变化是氨基酸的添加、缺失或取代。2.特异性结合LAG
‑
3的抗体或抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：(a)所述重链可变区包含SYGIS(SEQ ID NO:31)所示的HCDR1、或所述HCDR1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；EIYPRSDNTYYNGKFKG(SEQ ID NO:32)所示的HCDR2、或所述HCDR2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和RAFYYYGSNYYAMDY(SEQ ID NO:33)所示的HCDR3、或所述HCDR3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；所述轻链可变区包含RSSQSIVHSNGDTYLE(SEQ ID NO:34)所示的LCDR1、或所述LCDR1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；KVSNRFS(SEQ ID NO:35)所示的LCDR2、或所述LCDR2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和FQGSHVPWT(SEQ ID NO:36)所示的LCDR3、或所述LCDR3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；(b)所述重链可变区包含NYAMS(SEQ ID NO:37)所示的HCDR1、或所述HCDR1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；TITYGTTYTFYSDNVKG(SEQ ID NO:38)所示的HCDR2、或所述HCDR2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和GEYGSSFAY(SEQ ID NO:39)所示的HCDR3、或所述HCDR3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；所述轻链可变区包含KASQNVRTAVA(SEQ ID NO:40)所示的LCDR1、或所述LCDR1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；LASNRHT(SEQ ID NO:41)所示的LCDR2、或所述LCDR2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和LQHWNYPLT(SEQ ID NO:42)所示的LCDR3、或所述LCDR3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；
(c)所述重链可变区包含DYAVS(SEQ ID NO:43)所示的HCDR1、或所述HCDR1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；VVWGDGSTNYHSALIS(SEQ ID NO:44)所示的HCDR2、或所述HCDR2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和GGGGMDY(SEQ ID NO:45)所示的HCDR3、或所述HCDR3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；所述轻链可变区包含RASSSVSYMH(SEQ ID NO:46)所示的LCDR1、或所述LCDR1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；ATSNLAS(SEQ ID NO:47)所示的LCDR2、或所述LCDR2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和QHYNTNPPTWT(SEQ ID NO:48)所示的LCDR3、或所述LCDR3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；(d)所述重链可变区包含DDYMH(SEQ ID NO:49)所示的HCDR1、或所述HCDR1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；RIDPEDVETKYDPKFQG(SEQ ID NO:50)所示的HCDR2、或所述HCDR2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和SFYSNYVNYFDQ(SEQ ID NO:51)所示的HCDR3、或所述HCDR3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；所述轻链可变区包含KASENVGTYVS(SEQ ID NO:52)所示的LCDR1、或所述LCDR1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；GASNRYT(SEQ ID NO:53)所示的LCDR2、或所述LCDR2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和GQSYSYPYT(SEQ ID NO:54)所示的LCDR3、或所述LCDR3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；(e)所述重链可变区包含DDYMH(SEQ ID NO:49)所示的HCDR1、或所述HCDR1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；WIDPENGETEYASKFQG(SEQ ID NO:55)所示的HCDR2、或所述HCDR2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和FDY(SEQ ID NO:56)所示的HCDR3、或所述HCDR3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；所述轻链可变区包含KSSQSLLDSDGKTYLN(SEQ ID NO:57)所示的LCDR1、或所述LCDR1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；LVSKLDF(SEQ ID NO:58)所示的LCDR2、或所述LCDR2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和WQGTHFPQT(SEQ ID NO:59)所示的LCDR3、或所述LCDR3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；或者(f)所述重链可变区包含NYGIS(SEQ ID NO:60)所示的HCDR1、或所述HCDR1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；EIYPRGGNTYYNGKFKG(SEQ ID NO:61)所示的HCDR2、或所述HCDR2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和RAFYYFGSNYYAMDY(SEQ ID NO:62)所示的HCDR3、或所述HCDR3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；所述轻链可变区包含RSSQSIVHSNGDTYLE(SEQ ID NO:34)所示的LCDR1、或所述LCDR1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；KVSNRFS(SEQ ID NO:35)所示的LCDR2、或所述LCDR2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和FQGSHVPWT(SEQ ID NO:36)所示的LCDR3、或所述LCDR3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；其中所述氨基酸变化是氨基酸的添加、缺失或取代。3.根据权利要求2所述的特异性结合LAG
‑
3的抗体或抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中
所述重链可变区包含DDYMH(SEQ ID NO:49)所示的HCDR1；RIX1PEDVETKYDPKFQG(SEQ ID NO:64)所示的HCDR2，任选地，其中X1是D或N；和SFYSNYVNYFDQ(SEQ ID NO:51)所示的HCDR3；所述轻链可变区包含X2ASENVGTYVS(SEQ ID NO:68)所示的LCDR1，任选地，其中X2是K或R；X3ASX4RYT(SEQ ID NO:69)所示的LCDR2，任选地；其中X3是G或A；X4是N或T；和GQSYSYPYT(SEQ ID NO:54)所示的LCDR3。4.根据权利要求3所述的特异性结合LAG
‑
3的抗体或抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含DDYMH(SEQ ID NO:49)所示的HCDR1；RIDPEDVETKYDPKFQG(SEQ ID NO:50)所示的HCDR2；和SFYSNYVNYFDQ(SEQ ID NO:51)所示的HCDR3；所述轻链可变区包含KASENVGTYVS(SEQ ID NO:52)所示的LCDR1，GASNRYT(SEQ ID NO:53)所示的LCDR2，和GQSYSYPYT(SEQ ID NO:54)所示的LCDR3；所述重链可变区包含DDYMH(SEQ ID NO:49)所示的HCDR1；RIDPEDVETKYDPKFQG(SEQ ID NO:50)所示的HCDR2，SFYSNYVNYFDQ(SEQ ID NO:51)所示的HCDR3；所述轻链可变区包含KASENVGTYVS(SEQ ID NO:52)所示的LCDR1，AASNRYT(SEQ ID NO:66)所示的LCDR2，和GQSYSYPYT(SEQ ID NO:54)所示的LCDR3；所述重链可变区包含DDYMH(SEQ ID NO:49)所示的HCDR1；RIDPEDVETKYDPKFQG(SEQ ID NO:50)所示的HCDR2，SFYSNYVNYFDQ(SEQ ID NO:51)所示的HCDR3；所述轻链可变区包含RASENVGTYVS(SEQ ID NO:65)所示的LCDR1，GASNRYT(SEQ ID NO:53)所示的LCDR2，和GQSYSYPYT(SEQ ID NO:54)所示的LCDR3；所述重链可变区包含DDYMH(SEQ ID NO:49)所示的HCDR1；RIDPEDVETKYDPKFQG(SEQ ID NO:50)所示的HCDR2，SFYSNYVNYFDQ(SEQ ID NO:51)所示的HCDR3；所述轻链可变区包含KASENVGTYVS(SEQ ID NO:52)所示的LCDR1，GASTRYT(SEQ ID NO:67)所示的LCDR2，和GQSYSYPYT(SEQ ID NO:54)所示的LCDR3；所述重链可变区包含DDYMH(SEQ ID NO:49)所示的HCDR1；RINPEDVETKYDPKFQG(SEQ ID NO:63)所示的HCDR2，SFYSNYVNYFDQ(SEQ ID NO:51)所示的HCDR3；所述轻链可变区包含KASENVGTYVS(SEQ ID NO:52)所示的LCDR1，GASNRYT(SEQ ID NO:53)所示的LCDR2，和GQSYSYPYT(SEQ ID NO:54)所示的LCDR3；所述重链可变区包含DDYMH(SEQ ID NO:49)所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：王荣娟，焦莎莎，张畅，王双，
申请(专利权)人：迈威上海生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：