一种透明质酸-茶皂素及其制备方法和抗肿瘤作用技术

本发明专利技术公开了一种透明质酸

【技术实现步骤摘要】
一种透明质酸
‑
茶皂素及其制备方法和抗肿瘤作用


[0001]本专利技术涉及医药领域，特别是涉及一种透明质酸
‑
茶皂素及其制备方法和抗肿瘤作用。

技术介绍

[0002]油茶树是我国南方特有的经济树种,在赣南地区种植面积广、资源多。茶皂素(tea saponin，TS)广泛存在于山茶科植物的根、茎、叶、花、果，籽之中，其作为油茶树中的天然绿色提取物，具有杀菌、抗氧化、抗肿瘤和抗炎症等多种生物活性。近年研究发现，TS能够通过阻滞细胞周期中的S期，抑制肿瘤血管生成等方式，诱导肿瘤细胞产生自噬、凋亡，具有一定的抗肿瘤能力。但是，过量的茶皂素会通过破坏细胞膜的通透性，导致细胞质外渗，最终引发人红细胞溶血。而且当药物临床前期研究中如果剂量超过50μM，则认为无体内抗肿瘤作用。因此，如何提高TS的抗肿瘤药学，减少使用量，是其在抗肿瘤研究中亟需解决的问题。
[0003]CD44是哺乳动物细胞表面普遍存在的跨膜糖蛋白，在多种实体瘤细胞表面过量表达，在正常细胞不表达或微量表达。透明质酸(hyaluronic acid，HA)是细胞外基质的主要成分，主要通过与CD44受体特异性结合，实现靶向性抗肿瘤作用。经HA修饰后的药物具有体内滞留时间延长、疗效增强、不良反应降低等特点。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一个目的是提供一种抗肿瘤效果好的透明质酸
‑
茶皂素。
[0005]本专利技术的透明质酸
‑
茶皂素或其药用盐，其结构如式1所示：
[0006][0007]本专利技术的第二个目的是提供一种透明质酸
‑
茶皂素的合成方法，其合成路线如下所示：
[0008][0009]其是将透明质酸和茶皂素在N
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑
N
′‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)的存在下，通过酯化反应合成透明质酸
‑
茶皂素。
[0010]本专利技术的第三个目的是提供透明质酸
‑
茶皂素或其药用盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0011]本专利技术的第四个目的是提供一种抗肿瘤药物，其含有透明质酸
‑
茶皂素或其药用盐作为活性成分。
[0012]优选，所述的抗肿瘤药物是抗人肝癌、人结直肠癌、人肺癌或人前列腺癌的药物。
[0013]本专利技术基于赣南地区特色产业油茶提取物茶皂素TS，首次将TS通过化学合成的方法接枝HA，合成了HA
‑
TS。利用HA的生物特性，提高了TS的靶向性和生物利用度，提高其抗肿瘤效果，对基于TS的抗肿瘤药物研发具有重大的理论和现实意义，并具有良好的油茶产业开发应用价值。
附图说明
[0014]图1是透明质酸
‑
茶皂素的结构式；
[0015]图2是透明质酸
‑
茶皂素的合成路线；
[0016]图3是HA的核磁共振氢谱图；
[0017]图4是TS的核磁共振氢谱图；
[0018]图5是HA
‑
TS的核磁共振氢谱图；
[0019]图6是HA
‑
TS对人肝癌HepG
‑
2细胞增殖活性的影响；
[0020]图7是HA
‑
TS对人结直肠癌HCT
‑
116细胞增殖活性的影响；
[0021]图8是HA
‑
TS对人肺癌A549细胞增殖活性的影响；
[0022]图9是HA
‑
TS对人前列腺癌C4
‑
2细胞增殖活性的影响；
[0023]图10是HA
‑
TS对人前列腺癌LNCaP细胞增殖活性的影响；
[0024]图11是HA
‑
TS对人前列腺癌PC
‑
3细胞增殖活性的影响。
具体实施方式
[0025]以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。
[0026]实施例1：
[0027]1、本专利技术的透明质酸
‑
茶皂素的制备与鉴定
[0028]1.1HA
‑
TS的合成：在N
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑
N
′‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)的存在下，通过酯化反应合成HA
‑
TS(图1、2)。首先称取500mg 1.32mmol的HA(透明质酸)置于圆底烧瓶中，用6ml蒸馏水溶解；后将304mg 1.584mmol的EDC用1ml蒸馏水溶解，并将溶解的EDC
逐滴加入HA中。冰浴搅拌1h后，再将2.78g 1.98mmol的TS(茶皂素)完全溶解于4ml H2O并加入上述反应体系中，常温搅拌24h，将所得溶液转移至透析袋中(截留分子量3500)透析8h，冷冻干燥即得。
[0029]1.2HA
‑
TS的鉴定：利用核磁共振氢谱对合成的HA
‑
TS进行鉴定，确定分子结构(图3
‑
5)。
[0030]由此确定合成的HA
‑
TS的结构式如下所示：
[0031][0032]2、本专利技术的透明质酸
‑
茶皂素的抗肿瘤作用
[0033]选取表达HA受体的细胞株：人肝癌HepG
‑
2细胞、人结直肠癌HCT
‑
116细胞、人肺癌A549细胞、人前列腺癌C4
‑
2、LNCaP和PC
‑
3细胞，对上述细胞进行体外培养。利用Cell Counting Kit
‑
8(CCK
‑
8)法，研究HA
‑
TS对多种肿瘤细胞的作用。
[0034]实验方案：将上述细胞以1
×
104个/孔的数量种于96孔板，加DMEM培养液，置于含5％CO2的37℃培养箱培养，待细胞贴壁后，每孔加入DMEM培养液倍比稀释的100μL不同浓度的HA
‑
TS，对照组加入等体积的DMEM培养液，每组不少于3复孔。HA
‑
TS处理24h或48h后，每孔加入10μL CCK
‑
8溶液，继续孵育30min后，多功能酶标仪检测450nm处的吸光值。通过与对照组相比，计算肿瘤细胞增殖情况。利用Graphpad8.3.4软件处理数据，绘制柱状图，并采用非线性拟合法计算半数抑制率(half maximal inhibitory concentration，IC50)值及95％的可信区间(95％confidence interval，95％CI)。
[0035]结果显示，HA
‑
TS对体外培养的人肝癌HepG
‑
2细胞、人结直肠癌HCT
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.透明质酸
‑
茶皂素或其药用盐，其结构如式1所示：2.一种权利要求1所述的透明质酸
‑
茶皂素的合成方法，其特征在于，将透明质酸和茶皂素在N
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑
N
′‑
乙基碳二亚胺盐酸盐的存在下，通过酯化反应合成透明质酸
‑
茶皂素。3.权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟毅，田原僮，段少峰，杨英杰，杨靖，黄雯瑾，丁纪鹏，
申请(专利权)人：赣南医学院，
类型：发明
国别省市：