一种检测孕激素受体的单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种用于检测孕激素受体的单克隆抗体及其制备方法和应用，属于免疫检测技术领域。本发明专利技术的用于检测孕激素的单克隆抗体利用SEQ ID NO:2所示的免疫原重组蛋白片段免疫实验兔得到，其重链可变区的CDR

【技术实现步骤摘要】
一种检测孕激素受体的单克隆抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于免疫检测
，具体地，涉及一种检测孕激素受体的单克隆抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]乳腺癌在恶性肿瘤中的比例为23％，属于常见的恶性肿瘤。乳腺癌的诊断、治疗及预后与乳腺癌的组织病理学分期与雌激素受体α(Estrogen receptor
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α，ER
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α)和孕激素受体(Progesterone receptor，PR)的表达及表达程度有很大相关性，已知PR可以被ER
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α诱导，并在ER
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α蛋白的调控中发挥重要作用，因此，PR常作为ER
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α功能的一项指标。ER
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α和PR的表达情况与患者的内分泌治疗效果相关。目前，ER
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α、PR检测广泛应用于乳腺癌患者的预后判断与指导用药，因此，对ER
‑
α和PR的准确检测，是乳腺癌患者接受恰当治疗的重要依据。
[0003]我国相关乳腺癌诊治指南已将ER
‑
α、PR的免疫组织化学检测列为乳腺癌患者的常规检测项目，并用于指导患者的内分泌治疗。ER
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α和PR抗体试剂及检测试剂盒是利用免疫组织化学法，对病理组织切片中雌激素受体或孕激素受体进行检测的试剂。此类试剂为特异性单克隆或多克隆抗体，或抗体与显色系统、对照试剂、质控片(如有)及其它辅助试剂一同包装成试剂盒形式的检测试剂，用于乳腺癌患者的预后判断、指导用药及对其它肿瘤的鉴别诊断。
[0004]然而，由于抗体试剂的特异性和亲和力不足，目前ER
‑
α、PR检测在不同临床检测机构之间、不同检测试剂之间存在测定结果差异，甚至检测结果中存在一定比例的假阳性和假阴性结果。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题中的至少一个，本专利技术采取的技术方案如下：
[0006]本专利技术第一方面提供一种用于检测孕激素受体(PR)的单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：
[0007]S1，获得孕激素受体的免疫原重组蛋白片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
[0008]S2，将所述免疫原重组蛋白片段与免疫佐剂混合后注射实验兔进行免疫；
[0009]S3，取实验兔抗凝血分离外周血单核细胞，使用生物素标记并筛选外周血单核细胞中的B细胞，获取表达抗孕激素受体的B细胞遗传信息进行扩增重组，载入载体后转染载体细胞，载体细胞培养分泌的抗体经过纯化后获得所述单克隆抗体。
[0010]在本专利技术的一些实施方案中，步骤S2中，将所述免疫原重组蛋白片段利用PBS缓冲液稀释至0.5～2mg/mL。
[0011]在本专利技术的一些实施方案中，步骤S2中，所述免疫佐剂为弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂。
[0012]在本专利技术的一些实施方案中，步骤S2中，共免疫4次。进一步地，首次免疫使用弗氏
完全佐剂，后续免疫使用弗氏不完全佐剂，如此能够获得更好的免疫效果。
[0013]在本专利技术的一些实施方案中，步骤S3中，所述筛选外周血单核细胞中的B细胞是指筛选血清滴度满足要求的B细胞。
[0014]本专利技术的第二方面提供利用本专利技术第一方面任一所述的制备方法得到的用于检测孕激素受体的单克隆抗体。
[0015]在本专利技术的一些实施方案中，所述用于检测孕激素受体的单克隆抗体的重链可变区的CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3序列和轻链可变区的CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3序列分别如SEQ ID NO:13～18所示。
[0016]进一步地，所述用于检测孕激素受体的单克隆抗体包括SEQ ID NO:11所示的重链可变区和/或SEQ ID NO:12所示的轻链可变区。
[0017]本专利技术的第三方面提供一种用于检测孕激素受体的单克隆抗体，所述用于检测孕激素受体的单克隆抗体的重链可变区的CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3序列和轻链可变区的CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3序列分别如SEQ ID NO:13～18所示。值得说明的是，虽然本方面提供的单克隆抗体与本专利技术第二方面的一些实施方案相同，但是，本方面的抗体不局限于利用本专利技术第一方面所述的制备方法得到。本领域技术人员可以利用任意生物的或化学的方法得到本方面的单克隆抗体。
[0018]在本专利技术的一些优选实施方案中，所述用于检测孕激素受体的单克隆抗体包括SEQ ID NO:11所示的重链可变区和/或SEQ ID NO:12所示的轻链可变区。
[0019]本专利技术第四方面提供一种用于对乳腺癌进行预测、诊断、提供用药指导或判断预后的试剂盒，其特征在于，包括本专利技术第二方面或本专利技术第三方面任一所述的用于检测孕激素受体的单克隆抗体。
[0020]在本专利技术的一些实施方案中，所述试剂盒还包括PR阳性对照组织和/或PR阴性对照组织。
[0021]进一步地，所述PR阳性对照组织选自包括宫颈组织、子宫内膜组织和已知PR表达阳性的乳腺癌组织的阳性组织的组中的至少一种。其中宫颈组织阳性着色区域为复层上皮基底层细胞和间质细胞；子宫内膜阳性着色区域为腺泡上皮细胞和间质细胞；PR表达阳性的乳腺癌组织阳性着色区域为阳性肿瘤细胞和癌旁正常乳腺导管上皮细胞。
[0022]进一步地，所述PR阴性对照组织选自包括已知PR表达阴性的乳腺癌组织的组中的至少一种。
[0023]在本专利技术的一些实施方案中，所述试剂盒还包括用于检测雌激素受体α(ER
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α)的单克隆抗体。孕激素受体和雌激素受体是与乳腺癌密切相关的两种激素受体，对两者进行检测，能够更加准备地对乳腺癌进行预测、诊断、提供用药指导和/或预后。在这里，所述的用于检测孕激素受体的单克隆抗体没有任何限定，其可以是任意商用的或实验室制备的能够与孕激素受体特异性结合的单克隆抗体。
[0024]在本专利技术中，进一步根据ER检测结果提供用药指导，具体地，PR阳性(ER+/PR+及ER－/PR+)患者优先使用他莫昔芬，而PR阴性(ER+/PR
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)患者常对他莫昔芬产生耐药，可优先推荐芳香酶类药物进行治疗。
[0025]在本专利技术的一些实施方案中，所述用于检测雌激素受体α的单克隆抗体利用以下步骤制备得到：
[0026]S1'，获得雌激素受体α的免疫原多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
[0027]S2'，将所述免疫原多肽与血蓝蛋白交联，与免疫佐剂混合后注射实验兔进行免疫；
[0028]S3'，取实验兔抗凝血分离外周血单核细胞，使用生物素标记并筛选外周血单核细胞中的B细胞，获取表达抗雌激素受体α抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测孕激素受体的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，获得孕激素受体的免疫原重组蛋白片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；S2，将所述免疫原重组蛋白片段与免疫佐剂混合后注射实验兔进行免疫；S3，取实验兔抗凝血分离外周血单核细胞，使用生物素标记并筛选外周血单核细胞中的B细胞，获取表达抗孕激素受体抗体的B细胞遗传信息进行扩增重组，载入载体后转染载体细胞，载体细胞培养分泌的抗体经过纯化后获得所述用于检测孕激素受体的单克隆抗体。2.利用权利要求1所述的制备方法得到的用于检测孕激素受体的单克隆抗体。3.根据权利要求2所述的用于检测孕激素受体的单克隆抗体，其特征在于，所述用于检测孕激素受体的单克隆抗体的重链可变区的CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3序列和轻链可变区的CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3序列分别如SEQ ID NO:13～18所示。4.一种用于检测孕激素受体的单克隆抗体，其特征在于，所述用于检测孕激素受体的单克隆抗体的重链可变区的CDR
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H1、C...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡旻，章月凯，陶娜娜，
申请(专利权)人：图凌杭州生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：