用于IHC检测的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于免疫组织化学检测的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液、试剂盒及其应用，属于免疫检测技术领域。其中，所述脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液包含Tris Base、EDTA、壬基酚聚氧乙烯醚、防腐剂、蛋白酶K和聚乙二醇2000。利用本发明专利技术的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液进行石蜡切片处理，能够显著缩短免疫组织化学检测的时间，使得抗原染色更加高效。利用本发明专利技术进行免疫组织化学检测，过程中不使用二甲苯和酒精等有机溶剂，更加环保，并且，染色强度更明显，更易于观察，有利用临床辅助诊断。助诊断。助诊断。

【技术实现步骤摘要】
用于IHC检测的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液及其应用


[0001]本专利技术属于免疫检测
，具体地，涉及一种用于IHC的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液及其应用。

技术介绍

[0002]免疫治疗已在多种肿瘤的治疗中显示出有效性和安全性，并被广泛应用，已成为恶性肿瘤治疗一个新的里程碑。然而，并不是所有患者都能从免疫治疗中获益，因此需要借助特定的生物标记物来筛选适宜人群，其中PD
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L1表达是目前应用最广的免疫治疗生物标志物。一系列临床研究结果证明肿瘤细胞和/或肿瘤相关免疫细胞的PD
‑
L1表达水平与免疫治疗疗效及患者预后密切相关。
[0003]目前，PD
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L1的检测主要通过免疫组织化学(IHC)的方法进行，其基本原理为石蜡切片经过常规的脱蜡水化后用抗原修复液进行抗原修复，以充分暴露组织在福尔马林固定过程中被遮蔽的抗原表位，然后通过特异性PD
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L1抗体与组织中的抗原结合形成抗原
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抗体复合物，再通过酶标二抗与第一抗体反应形成抗原
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一抗
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二抗复合物。后通过二抗中标记的酶对底物进行催化在细胞原位产生不可溶的沉淀从而起到示踪抗原的目的。其检测基本步骤包括烤片、脱蜡、水化、抗原修复、封闭、染色、显色、复染、脱水、透明和封片处理。PD
‑
L1石蜡切片的抗原修复好坏将直接影响PD
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L1的阳性率和判读结果。其中脱蜡、水化和抗原修复在整个PD
‑
L1的免疫组织化学检测过程中起到了极其重要的作用。
[0004]然而，烤片、脱蜡、水化和抗原修复等前序切片处理过程大概就要花费近1.5个小时的时间，使得整个PD
‑
L1的免疫组织化学检测的时间很长，从而影响了PD
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L1的检测效率。另外，常规的石蜡切片脱蜡需要使用有机溶剂二甲苯，对环境和操作者有一定的危害性。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题中的至少一个，本专利技术采用的技术方案如下：
[0006]本专利技术第一方面提供一种用于免疫组织化学检测的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液，所述脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液包含Tris Base、EDTA、壬基酚聚氧乙烯醚、防腐剂、蛋白酶K和聚乙二醇2000。
[0007]在本专利技术的一些实施方案中，所述防腐剂为ProClin
TM
950。
[0008]在本专利技术的一些实施方案中，所述脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液的pH值为9.0。
[0009]在本专利技术的一些实施方案中，所述脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液包含摩尔浓度为5～20mM的Tris Base、摩尔浓度为0.5～1.5mM的EDTA、质量分数为0.25％～2％的壬基酚聚氧乙烯醚、体积分数为0.3％～0.4％的防腐剂、质量体积比为80～120μg/mL的蛋白酶K，以及体积分数为3％～6％的聚乙二醇2000。
[0010]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液包含摩尔浓度为10mM的Tris Base、摩尔浓度为1mM的EDTA、质量分数为0.25％～2％的壬基酚聚氧
乙烯醚、体积分数为0.35％的ProClin
TM
950、质量体积比为100μg/mL的蛋白酶K，以及体积分数为5％的聚乙二醇2000，pH值为9.0。
[0011]本专利技术第二方面提供本专利技术第一方面所述的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液的制备方法，包括以下步骤：
[0012]称取或量取Tris Base、EDTA、壬基酚聚氧乙烯醚、防腐剂、蛋白酶K、聚乙二醇2000于洁净的容器内，加入总体积70％～90％的纯化水充分搅拌混匀，再定容至总体积。
[0013]进一步地，在定容至总体积之前，进一步包括调节pH值至9.0的步骤。
[0014]本专利技术第三方面提供一种免疫组织化学检测试剂盒，包括本专利技术第一方面任一所述的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液。
[0015]进一步地，所述试剂盒还包括封闭液、二抗显色系统和/或苏木素。这里的苏木素可以是未经配制的苏木素粉末，也可以是配制好的苏木素染液。
[0016]在本专利技术的一些实施方案中，所述免疫组织化学检测试剂盒用于检测生物样本是否具有PD
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L1表达，所述试剂盒还包括PD
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L1抗体。当然，本专利技术的试剂盒是一种通用试剂盒，可以搭配不同的一抗、二抗适用于不同的抗原检测。
[0017]本专利技术第四方面提供一种免疫组织化学检测方法，包括以下步骤：
[0018]S1，获得石蜡保存的生物样本并切片；
[0019]S2，将获得的切片加入至98～100℃的权利要求1所述的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液中，孵育8～10min，即可完成切片的脱蜡、水化和抗原修复；
[0020]S3，将切片进行封闭、一抗孵育、二抗孵育、显色、苏木素复染。
[0021]在本专利技术的一些实施方案中，在步骤S3之前，进一步包括将所述的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液冷却至室温的步骤。
[0022]在本专利技术的一些实施方案中，所述免疫组织化学检测方法是非诊断和治疗目的的方法。
[0023]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述免疫组织化学检测方法用于辅助诊断。
[0024]本专利技术的有益效果
[0025]相对于现有技术，本专利技术取得了以下有益效果：
[0026]利用本专利技术的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液进行石蜡切片处理，能够显著缩短免疫组织化学检测的时间，使得抗原染色更加高效。
[0027]利用本专利技术的方法进行免疫组织化学检测，过程中不使用二甲苯和酒精等有机溶剂，更加环保。
[0028]利用本专利技术的缓冲液或试剂盒，结合本专利技术的方法进行检测，染色强度更明显，更易于观察，有利用临床辅助诊断。
附图说明
[0029]图1示出了利用本专利技术实施例1配制的不同缓冲液进行处理后染色的结果。A：缓冲液#1处理后的切片染色结果；B：缓冲液#2处理后的切片染色结果；C：缓冲液#3处理后的切片染色结果。
[0030]图2示出了利用本专利技术实施例2配制的不同缓冲液进行处理后染色的结果。A：缓冲液#4处理后的切片染色结果；B：缓冲液#5处理后的切片染色结果；C：缓冲液#6处理后的切
片染色结果；D：缓冲液#7处理后的切片染色结果；E：普通Tris
‑
EDTA抗原修复液处理后的切片染色结果。
具体实施方式
[0031]除非另有说明、从上下文暗示或属于现有技术的惯例，否则本申请中所有的份数和百分比都基于重量，且所用的测试和表征方法都是与本申请的提交日期同步的。在适用的情况下，本申请中涉及的任何专利、专利申请或公开的内容全部结合于此作为参考，且其等价的同族专利也引入作为参考，特别这些文献所披露的关于本领域中的相关术语的定义。如果本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于免疫组织化学检测的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液，其特征在于，所述脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液包含Tris Base、EDTA、壬基酚聚氧乙烯醚、防腐剂、蛋白酶K和聚乙二醇2000。2.根据权利要求1所述的一种用于免疫组织化学检测的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液，其特征在于，所述防腐剂为ProClin
TM
950。3.根据权利要求1所述的一种用于免疫组织化学检测的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液，其特征在于，所述脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液的pH值为9.0。4.根据权利要求1所述的一种用于免疫组织化学检测的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液，其特征在于，所述脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液包含摩尔浓度为5～20mM的Tris Base，摩尔浓度为0.5～1.5mM的EDTA、质量分数为0.25％～2％的壬基酚聚氧乙烯醚、体积分数为0.3％～0.4％的防腐剂、质量体积比为80～120μg/mL的蛋白酶K，体积分数为3％～6％的聚乙二醇2000。5.根据权利要求4所述的一种用于免疫组织化学检测的脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液，其特征在于，所述脱蜡、水化和抗原修复一体缓冲液包含摩尔浓度为10mM的Tris Base，...

【专利技术属性】
技术研发人员：章月凯，陶娜娜，蔡宁，
申请(专利权)人：图凌杭州生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：