青稞嫩叶碱提多糖的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种青稞嫩叶碱提多糖的制备方法及其应用；本发明专利技术所述的青稞嫩叶碱提多糖的制备方法可以得到高纯度的碱提多糖，碱提多糖的提取率可达4.58％，纯度可达98.29％。本发明专利技术研究发现所述的青稞嫩叶碱提多糖作为抗癌药物活性成分，可以显著抑制乳腺癌细胞和结直肠癌细胞增殖。尤其能够特异性地抑制结乳腺癌细胞4T1的增殖，且不影响人正常乳腺上皮细胞MCF

【技术实现步骤摘要】
青稞嫩叶碱提多糖的制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于抗癌活性成分
，涉及一种青稞嫩叶碱提多糖的制备方法及其应用；具体涉及一种青稞嫩叶碱提多糖的制备方法及其在制备抗癌药物中的应用；尤其涉及一种从青稞嫩叶中提取和纯化的碱提多糖活性成分及其在抑制结直肠癌细胞和乳腺癌细胞增殖中的应用。

技术介绍

[0002]青稞是禾本科、大麦属的大麦变种之一，是一种一年生草本植物，能够抵抗严寒、缺氧、干燥、强光照射、土地贫瘠等严酷环境，是高原地带的主要粮食作物，为藏族人民提供每日饮食当中最主要的碳水化合物。特殊的环境使青稞获得了较强的抗逆性，产生了丰富的次生代谢产物。青稞嫩叶一般是指高度为15～20cm的新鲜青稞嫩茎叶，俗称青稞苗。青稞嫩叶具有突出的医疗保健功效，部分医学史书中对其药用价值做了记载。青稞也因其营养组成全面且独特、食疗价值高而越来越受到民众青睐。有学者指出，青稞中的β
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葡聚糖含量普遍高于世界其它地区种植的大麦品种。因此β
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葡聚糖也被认为是青稞中与人体健康和长寿关系最为密切的营养物质。近些年来作物中阿拉伯木聚糖的生理功效也越来越多地见诸报道并被肯定。
[0003]青稞的营养成分比小麦、水稻、玉米较高，是食用、药用、酿造、饲用兼具的作物，具有高蛋白、高纤维、高维生素、低糖、低脂肪等特点。青稞作为西藏等地区的主要粮食，被制成糍粑食用，但其口感较差，难以提高其附加值。青稞具有一定的药用价值。据《本草拾遗》记载，青稞具有下气中宽、除湿发汗、状精益力、止泻等作用。青稞的药用价值与其特殊的生长环境密切相关。青稞膳食纤维中的主要成分为β
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葡聚糖和阿拉伯木聚糖。近些年来，许多报道中提及多种植物中含有阿拉伯木聚糖，且其具有调节免疫、降血脂、降血糖、抗氧化等功能。目前国内外对青稞嫩叶中的多糖研究较少，非碱提青稞嫩叶多糖的研究更少。
[0004]阿拉伯木聚糖(Arabinoxylans，AX)是一种非淀粉源的杂多糖，主要由木糖和阿拉伯糖构成，广泛存在于自然界特别是谷类作物中。根据其碱提特点，阿拉伯木聚糖又分为碱提和水不溶性两类。相比较而言，碱提阿拉伯木聚糖结构相对简单，含量也比较低，水不溶性阿拉伯木聚糖结构相对复杂，分子内及分子间交联程度较高。体内和体外实验表明，阿拉伯木聚糖具有增加排便量、降血糖、降胆固醇、抗氧化、调节免疫甚至抗肿瘤等功效，其应用价值高、应用前景广泛。对阿拉伯木聚糖的研究主要聚焦在小麦、大麦、玉米等谷类作物，其提取方法也主要分为水法、碱法、酶法以及这些方法的联用。国内外对青稞中阿拉伯木聚糖的研究相对较少。

技术实现思路

[0005]本专利技术第一目的在于提供一种全新的从青稞嫩叶中提取和纯化的碱提多糖活性成分。
[0006]本专利技术第二目的在于提供一种所述的青稞嫩叶碱提多糖的制备方法。
[0007]本专利技术第三目的在于提供所述青稞嫩叶碱提多糖活性成分在制备抗癌药物中的应用。
[0008]本专利技术第四目的在于提供一种包含所述的青稞嫩叶碱提多糖活性成分的抗癌药物。
[0009]本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：
[0010]第一方面，本专利技术涉及一种青稞嫩叶碱提多糖活性成分的制备方法，所述方法包括如下步骤：
[0011]S1、将青稞叶真空冷冻干燥、打粉后收集获得青稞嫩叶粉；
[0012]S2、将青稞嫩叶粉进行脱脂、水提、碱提、透析、酶解以及醇沉得到青稞嫩叶碱提粗多糖；
[0013]S3、将青稞嫩叶碱提粗多糖用纤维素柱进行分离纯化处理即得青稞嫩叶碱提多糖活性成分。
[0014]本专利技术研究发现，通过所述的方法、配合所述的洗脱工艺，可以获得所述的全新的青稞嫩叶碱提多糖活性成分。
[0015]作为本专利技术的一个实施方案，所述青稞的品种为青海黄。
[0016]作为本专利技术的一个实施方案，步骤S1中，所述真空冷冻干燥的条件为
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50～
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60℃，4～6小时；
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35～
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40℃，10～15小时；
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10～
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20℃，10～15小时；20～25℃，24～48小时。在一些实施例中，所述真空冷冻干燥的条件为
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50℃，4小时；
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35℃，10小时；
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10℃，10小时；25℃，24小时。
[0017]在一些实施例中，步骤S1，在种植盘中种植青稞种子，待青稞叶长度长到15cm左右时，将青稞叶从根部剪下，清洗、冷藏、真空冷冻干燥、打粉后收集获得的青稞嫩叶粉。
[0018]具体地，在每个种植盘中均匀种满100g左右用清水浸泡隔夜的青海黄青稞种子，之后用少量营养土覆盖青稞种子，充分浇水至营养土湿透，之后每天浇水少量，种植周期为14
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21天。待青稞叶长度长到15cm左右时，将青稞叶从根部剪下，清洗、冷藏、真空冷冻干燥、打粉后过筛收集获得的青稞嫩叶粉。
[0019]作为本专利技术的一个实施方案，步骤S2中，脱脂过程中以石油醚作溶剂进行脱脂，青稞嫩叶粉与石油醚的比例为1g：40～50ml。脱脂条件为：55～65℃浸泡60～90min，65～85℃抽提90～150min，75～95℃回收10～30min。脱脂处理后进行固液分离，获得的脱脂物进行后续的提取。
[0020]作为本专利技术的一个实施方案，步骤S2中，水提过程按青稞嫩叶粉和水1:20～1:30的重量投加水。
[0021]作为本专利技术的一个实施方案，步骤S2中，水提温度为80℃～90℃，提取时间为3～5小时。重复提取3次。
[0022]作为本专利技术的一个实施方案，步骤S2中，水提处理后进行离心3000rpm，10～15min，获得沉淀。
[0023]作为本专利技术的一个实施方案，步骤S2中，按1:20～1:30的重量比向水提处理所得沉淀中添加0.5
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1mol/L的NaOH溶液进行碱提。重复提取三次后，离心获得上清液。碱提条件是60～80℃水浴3～3.5h；优选80℃水浴3～3.5h。
[0024]作为本专利技术的一个实施方案，步骤S2中，用0.5％的盐酸将碱提所得上清液调节至
6.5～6.8，经60～80℃水浴浓缩后透析48～60h；优选经80℃水浴浓缩后透析48h。
[0025]作为本专利技术的一个实施方案，步骤S2中，所述酶解采用耐高温α
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淀粉酶、木瓜蛋白酶、糖化酶依次进行酶解。
[0026]作为本专利技术的一个实施方案，步骤S2中，酶解过程包括：向透析溶液中加入耐高温α
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淀粉酶，80～90℃水浴1～2h；水浴温度调至60～80℃，加入木瓜蛋白酶，水浴1～2h；100℃水浴灭酶10～20min，冷却后加入糖化酶，60～80℃水浴1～2h；100℃水浴灭酶10～20min，冷却后60～90℃水浴2～4h，离心，收集上清液。
[0027]作为本专利技术的一个实施方案，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种青稞嫩叶碱提多糖活性成分的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、将青稞叶真空冷冻干燥、打粉后收集获得青稞嫩叶粉；S2、将青稞嫩叶粉进行脱脂、水提、碱提、透析、酶解以及醇沉得到青稞嫩叶碱提粗多糖；S3、将青稞嫩叶碱提粗多糖用纤维素柱进行分离纯化处理即得青稞嫩叶碱提多糖活性成分。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述真空冷冻干燥的条件为
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50～
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60℃，4～6小时；
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35～
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40℃，10～15小时；
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10～
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20℃，10～15小时；20～25℃，24～48小时。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，脱脂过程中以石油醚作溶剂进行脱脂，青稞嫩叶粉与石油醚的比例为1g：40～50ml；脱脂条件为：55～65℃浸泡60～90min，65～85℃抽提90～150min，75～95℃回收10～30min。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，水提过程按青稞嫩叶粉和水1:20～1:30的重量投加水，水提温度为80℃～90℃，提取时间为3～5小时；按1:20～1:30的重量比向水提处理所得沉淀中添加0.5～1mol/L的NaOH溶液在60～80℃水浴3～3.5h进行碱提；用0.5％的盐酸将碱提所得上清...

【专利技术属性】
技术研发人员：隋中泉，徐义娟，徐浩然，南流，南潇，
申请(专利权)人：上海爱发投资管理有限公司，
类型：发明
国别省市：