一种能预防和抑制血栓的黑木耳超微粉多糖制备方法技术

本发明专利技术公开了一种能预防和抑制血栓的黑木耳超微粉多糖制备方法，主要涉及生物技术领域。包括以下步骤：S1.对原料进行超微粉碎处理；S2.进行酶解；S3.对多糖进行提取；S4.加入硫酸铵，搅拌至硫酸铵溶解，静置盐析过夜；S5.离心，取上层清液；S6.重复S4和S5操作，分级盐析去除黑木耳超微粉多糖溶液中的蛋白；S7.脱色并醇沉；S8.透析去离子水中去除小分子杂质；S9.真空浓缩后冷冻干燥；S10.得到黑木耳超微粉多糖干燥制品。本发明专利技术的有益效果在于：优化了黑木耳超微粉多糖提取工艺，多糖得率更高，提高黑木耳的利用率，食用更安全可靠，且通过实验数据能清楚、全面的证明该制备方法所得多糖的效果与阿司匹林相近，预防和抑制血栓的效果较好。果较好。果较好。

【技术实现步骤摘要】
一种能预防和抑制血栓的黑木耳超微粉多糖制备方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体是一种能预防和抑制血栓的黑木耳超微粉多糖制备方法。

技术介绍

[0002]黑木耳中含有30％
‑
35％的活性多糖，具有降血脂、抗血凝、防治血栓、抗肿瘤、提高免疫力等功能。黑木耳多糖常见提取方法有热水浸提法、酸碱提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法、酶辅助提取法、超微粉碎辅助提取法、强电场提取法等。其中传统酶法辅助主要采用纤维素酶和果胶酶复合酶。提取得到的多糖为酸性杂多糖和β
‑
葡聚糖，其单糖由木糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和葡糖醛酸组成。
[0003]传统提取方法的黑木耳多糖得率不等，以15％
‑
20％居多，使得黑木耳中还有大量的多糖没有提取出来，黑木耳的消耗量大大增加，造成了一定的浪费，也提高了提取成本，且传统提取方法还需对多糖进行脱脂处理，传统脱脂方法多采用石油醚为萃取剂，即使后期脱除也存在不安全因素。
[0004]且现有技术中多为动物实验证明黑木耳多糖能延长实验动物的凝血酶原时间(PT)、凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(FIB)，从而证明抗血凝效果较好，具有预防和抑制血栓形成功能，但缺乏与市售保健食品或药品预防和抑制血栓的效果对比，缺少一定的说服力。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种能预防和抑制血栓的黑木耳超微粉多糖制备方法，它采用碱酶结合法优化了黑木耳超微粉多糖提取工艺，使得多糖得率更高，提高黑木耳的生物利用率，去除了传统方法中采用石油醚脱脂的步骤，食用更安全可靠，且实验数据能清楚、全面的证明该制备方法所得多糖的效果与阿司匹林相近，从而更具有说服力，预防和抑制血栓的效果较好。
[0006]本专利技术为实现上述目的，通过以下技术方案实现：
[0007]一种能预防和抑制血栓的黑木耳超微粉多糖制备方法，包括以下步骤：
[0008]S1.取黑木耳原料，清理表面杂质，迅速冲洗后干燥，并进行粗粉碎和超微粉碎，然后将黑木耳超微粉置于干燥箱中干燥至恒重后置于真空袋中保存；
[0009]S2.取步骤S1中的所述黑木耳超微粉加蒸馏水混合分散，并向黑木耳超微粉溶水溶液中加入蜗牛酶进行酶解，使细胞壁温和破裂；
[0010]S3.利用响应曲面法优化碱提取条件，对步骤S2溶液中的黑木耳超微粉多糖进行提取，得到黑木耳超微粉多糖提取液；
[0011]S4.取步骤S3中的黑木耳超微粉多糖提取液加入烧杯中，在冰浴的条件下缓慢加入硫酸铵，搅拌溶液直至硫酸铵溶解，静置过夜；
[0012]S5.对经过步骤S4处理的溶液进行离心，取上层清液；
[0013]S6.重复步骤S4和S5的操作，使溶液中硫酸铵浓度分别达到40％、60％、80％，分级盐析除去黑木耳超微粉多糖溶液中的蛋白；
[0014]S7.对步骤S6中去除蛋白后的多糖溶液脱色并醇沉过夜、离心；
[0015]S8.将经过步骤S7处理后的溶液装入透析袋里，并放入去离子水中透析去除小分子杂质；
[0016]S9.对经过步骤S8处理的溶液进行真空浓缩后冷冻干燥；
[0017]S10.得到黑木耳超微粉多糖干燥制品。
[0018]进一步的，所述步骤S2在酶解时，蜗牛酶的用量为每g黑木耳超微粉加入13mg，酶解时间2.5h，酶解温度为55℃，pH为6.8。
[0019]进一步的，所述步骤S3中的最佳提取条件为：提取时间3.6h、提取温度96℃、pH值为12。
[0020]进一步的，所述步骤S9中真空浓缩到含水率低于30％时进行冷冻干燥。
[0021]进一步的，所述黑木耳超微粉的粒度低于100μm，且平均粒径在10
‑
25μm。
[0022]对比现有技术，本专利技术的有益效果在于：
[0023]本专利技术根据黑木耳细胞壁结构和组成成分，选用超微粉碎法结合蜗牛酶酶解法进行细胞壁破壁，随后进行碱提、盐析法脱蛋白、活性白土脱色、透析脱除小分子物质、醇沉等操作，得到纯化多糖，无需采用石油醚脱脂，提取方法安全高效，且多糖得率明显高于传统提取方法，使得同等数量的多糖提取能更加节省黑木耳的消耗，提高材料生物利用率，降低成本；
[0024]本专利技术采用动物实验研究比较了黑木耳超微粉原料、阿司匹林组和不同剂量纯化后超微粉多糖的抗血栓、抗血凝活性，实验指标为凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、血粘度和血流变指标等，证明提取黑木耳超微粉多糖的必要性，以及证明该制备方法所得多糖的效果与阿司匹林相近，是传统制备方法所得多糖达不到的，从而更具有说服力，预防和抑制血栓的效果更好。
附图说明
[0025]附图1是本专利技术的工艺流程图。
具体实施方式
[0026]下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所限定的范围。
[0027]实施例1：一种能预防和抑制血栓的黑木耳超微粉多糖制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
[0028]S1.取黑木耳原料，清理表面杂质，迅速冲洗后干燥，并进行粗粉碎和超微粉碎，超微粉碎后的粒度低于100μm，且平均粒径在10
‑
25μm，然后将黑木耳超微粉置于干燥箱中80
‑
90℃干燥至恒重后，置于真空袋中保存；
[0029]S2.取步骤S1中的所述黑木耳超微粉，按料液比1：100加蒸馏水混合分散，并向黑木耳超微粉溶水溶液中按每g黑木耳超微粉加入13mg用量的蜗牛酶进行酶解，酶解时间
2.5h，酶解温度为55℃，pH为6.8，使细胞壁温和破裂；
[0030]S3.利用响应曲面法优化碱提取条件，对步骤S2溶液中的黑木耳超微粉多糖进行提取，得到黑木耳超微粉多糖提取液；
[0031]S4.取步骤S3中的黑木耳超微粉多糖提取液200ml加入500ml的烧杯中，在冰浴的条件下缓慢加入硫酸铵，搅拌溶液直至硫酸铵溶解，溶液中硫酸铵浓度为20％，静置过夜；
[0032]S5.利用冷冻干燥离心机12000r/min对经过步骤S4处理的溶液进行离心15min，取上层清液；
[0033]S6.重复步骤S4和S5的操作，使溶液中硫酸铵浓度分别达到40％、60％、80％，分级盐析黑木耳超微粉多糖溶液中的蛋白；
[0034]S7.对步骤S6中去除蛋白后的多糖溶液加白土搅拌脱色并醇沉过夜，离心；
[0035]S8.将经过步骤S7处理后的溶液装入分子量为8000
‑
14000的透析袋里，两头扎紧，并放入去离子水中透析去除小分子杂质；
[0036]S9.利用旋转蒸发仪配水循环真空泵对经过步骤S8处理的溶液进行真空浓缩，含水本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能预防和抑制血栓的黑木耳超微粉多糖制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S1.取黑木耳原料，清理表面杂质，迅速冲洗后干燥，并进行粗粉碎和超微粉碎，然后将黑木耳超微粉置于干燥箱中干燥至恒重后置于真空袋中保存；S2.取步骤S1中的所述黑木耳超微粉加蒸馏水混合分散，并向黑木耳超微粉溶水溶液中加入蜗牛酶进行酶解，使细胞壁温和破裂；S3.利用响应曲面法优化碱提取条件，对步骤S2溶液中的黑木耳超微粉多糖进行提取，得到黑木耳超微粉多糖提取液；S4.取步骤S3中的黑木耳超微粉多糖提取液加入烧杯中，在冰浴的条件下缓慢加入硫酸铵，搅拌溶液直至硫酸铵溶解，静置过夜；S5.对经过步骤S4处理的溶液进行离心，取上层清液；S6.重复步骤S4和S5的操作，使溶液中硫酸铵浓度分别达到40％、60％、80％，分级盐析除去黑木耳超微粉多糖溶液中的蛋白；S7.对步骤S6中去除蛋白后的多糖溶液脱色并醇沉过夜、离心；S8.将经过步骤S7处理后的溶液装...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨春瑜，
申请(专利权)人：哈尔滨商业大学，
类型：发明
国别省市：