一种牡蛎多糖的提取方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种牡蛎多糖的提取方法，本发明专利技术还公开了一种牡蛎多糖的提取方法获得的牡蛎多糖及其在抑菌剂和抗氧化剂中的应用。本发明专利技术OPS的OPS

【技术实现步骤摘要】
一种牡蛎多糖的提取方法及其应用


[0001]本专利技术涉及一种牡蛎多糖的提取方法及其应用，属于多糖


技术介绍

[0002]在我国，牡蛎资源十分丰富，且在水产养殖产业中，牡蛎养殖产业十分发达。牡蛎在我国广泛分布于南海，东海，黄海及渤海等海域。牡蛎中的基本营养素包括蛋白质、脂肪、糖原(碳水化合物)、水和灰分。鲜牡蛎软体部中水分的质量分数为70.91％
‑
88.24％，与其他水产品相近，蛋白质为6.14％～11.29％，为牛奶的2～3倍。人体必需的氨基酸、亚麻酸和亚油酸等多不饱和脂肪酸在牡蛎中含量丰富，钙、铁、锌、硒的含量高于禽畜肉类。
[0003]牡蛎是一种富含蛋白质、必需氨基酸、必须脂肪酸、糖原和微量元素的功能性药食同源食品。牡蛎多糖作为牡蛎提取物中的重要活性成分，拥有调节免疫力、抗肿瘤、降血糖和抑菌等生物活性。
[0004]多糖具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抑菌、降血糖、免疫调节等方面的活性。目前对于牡蛎多糖活性的研究都聚焦在抗肿瘤、保护肝损伤、降血糖活性上，而牡蛎多糖的抑菌能力以及流变学特性、乳化特性这些加工适用性上不明确。本专利技术对提取和层析的牡蛎多糖进行结构表征，以及对体外抗氧化活性和抑菌活性、流变特性和乳化特性进行研究。本研究结果一方面可以为牡蛎多糖开发新型的抗氧化剂和抑菌剂奠定基础，另一方面对牡蛎多糖在食品、化工等行业的运用具有指导意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种牡蛎多糖的提取方法，该法采用热水浸提法对牡蛎提取出多糖OPS，使用DEAE
‑
纤维素对OPS纯化，最终获得了牡蛎多糖中的中性多糖OPS
‑
1(84.58
±
1.98)％为主要组分，且OPS
‑
1的纯度显著高于OPS。
[0006]同时，本专利技术提供一种牡蛎多糖，该牡蛎多糖的平均分子量为954.32kDa，粒度为101.80
±
1.20nm电位为15.87
±
0.66mV；OPS
‑
1中的总糖含量大于84％；OPS
‑
1中所含各单糖的百分比值为葡萄糖:甘露糖:核糖:鼠李糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:岩藻糖
[0007]＝97.412:0.237:0.079:0.025:0.070:0.267:0.780:0.037。
[0008]同时，本专利技术提供一种牡蛎多糖的应用。
[0009]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0010]一种牡蛎多糖的提取方法，包括以下步骤：
[0011]取新鲜牡蛎肉适量，经粉碎后形成匀浆，加入去离子水，去离子水的加入量相当于新鲜牡蛎肉重量的10～15倍，并将pH调节至10～10.5，在55～60℃下水浴3～4h进行提取，过滤后进行离心；弃去离心产生的沉淀后，将上层清液通过减压进行浓缩，获得浓缩液，浓缩液的重量相当于新鲜牡蛎肉的0.5～1倍量，加入相当于浓缩液3～4倍体积的无水乙醇，醇沉至少24h；离心20～30min，取沉淀，用95％乙醇、无水乙醇、丙酮分别进行至少两次洗涤；再在沉淀中加入10～15倍体积水溶解，调pH至5～5.5，获得溶解液，加入相当于溶解液
体积的0.2～0.3％的菠萝蛋白酶，50～55℃酶解3～5h，再调pH至8.5～9，再加入相当于溶解液体积的1％的碱性蛋白酶，50～55℃酶解4～5h，获得酶解液；将酶解液于85～90℃水浴10～15min，灭活菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶；再在酶解液中加入sevag液，sevag液中四氯化碳和正丁醇的体积比为4:1，sevag液的加入体积相当于酶解液的1/3～1/4倍量，震荡15～20min，离心弃去沉淀，重复多次至不再产生白色絮状沉淀，于35～37℃烘箱烘干，即得牡蛎粗多糖OPS；
[0012]称取适量DEAE
‑
纤维素干粉，预处理后装入层析柱并进行柱平衡，制备上样液，上样至DEAE
‑
纤维素层析柱，依次以0、0.05、0.1、0.3mol/L NaCl溶液进行洗脱2.5～3个柱体积；通过自动接样器以流速为1～1.2mL/min，每10～13min一管，对馏分进行收集；将所收集的馏分采用苯酚
‑
硫酸法进行监测，合并490nm时吸光度大于1.5的管，透析至少24h后，冷冻干燥，获得OPS
‑
1样品粉末。
[0013]DEAE
‑
纤维素干粉的预处理方法为：将DEAE
‑
纤维素干粉置于去离子水中溶胀至少12h，DEAE
‑
纤维素干粉与去离子水的质量体积比为1:2.5，去除杂质与悬浮颗粒后以湿法装入层析柱中。
[0014]层析柱的径高比为1:25。
[0015]柱平衡的方法为：待装柱完成后用去离子水以1.0～1.5mL/min的流速对层析柱进行2.5～3个柱体积洗脱，以对层析柱进行平衡。
[0016]上样液的制备方法为：将牡蛎粗多糖OPS充分溶解于去离子水中，牡蛎粗多糖OPS的用量为DEAE
‑
纤维素干粉重量的1.5/1000～3/1000，牡蛎粗多糖OPS与用于溶解的去离子水的质量体积比为5:1，单位为mg:mL，在转速为5000～6000r/min的条件下离心10～15min，将不溶性沉淀去除，再将上层清液过0.45μm滤膜，制得上样液。
[0017]OPS
‑
1的平均分子量为954.32kDa，粒度为101.80
±
1.20nm电位为15.87
±
0.66mV；OPS
‑
1中的总糖含量大于84％；OPS
‑
1中所含各单糖的百分比值为葡萄糖:甘露糖:核糖:鼠李糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖:岩藻糖＝97.412:0.237:0.079:0.025:0.070:0.267:0.780:0.037。
[0018]在OPS
‑
1溶液浓度为5.0mg/mL时，OPS
‑
1的ABTS自由基清除率为(63.39
±
0.66)％，亚铁离子螯合率为(70.84
±
0.56)％，羟基自由基清除率为(74.26
±
0.20)％，在OPS
‑
1溶液浓度为0.5mg/mL时DPPH自由基清除率为(78.14
±
0.95)％。
[0019]牡蛎多糖在抑菌剂中的应用。
[0020]牡蛎多糖在抗氧化剂中的应用。
[0021]本专利技术具有以下有益效果：
[0022]1、本专利技术通过热水浸提出牡蛎多糖OPS的浓度为69.21
±
0.97％。使用DEAE
‑
纤维素层析柱对牡蛎多糖进一步纯化，纯化出OPS
‑
1、OPS
‑
2、OPS
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种牡蛎多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：取新鲜牡蛎肉适量，经粉碎后形成匀浆，加入去离子水，去离子水的加入量相当于新鲜牡蛎肉重量的10～15倍，并将pH调节至10～10.5，在55～60℃下水浴3～4h进行提取，过滤后进行离心；弃去离心产生的沉淀后，将上层清液通过减压进行浓缩，获得浓缩液，浓缩液的重量相当于新鲜牡蛎肉的0.5～1倍量，加入相当于浓缩液3～4倍体积的无水乙醇，醇沉至少24h；离心20～30min，取沉淀，用95％乙醇、无水乙醇、丙酮分别进行至少两次洗涤；再在沉淀中加入10～15倍体积水溶解，调pH至5～5.5，获得溶解液，加入相当于溶解液体积的0.2～0.3％的菠萝蛋白酶，50～55℃酶解3～5h，再调pH至8.5～9，再加入相当于溶解液体积的1％的碱性蛋白酶，50～55℃酶解4～5h，获得酶解液；将酶解液于85～90℃水浴10～15min，灭活菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶；再在酶解液中加入sevag液，sevag液中四氯化碳和正丁醇的体积比为4:1，sevag液的加入体积相当于酶解液的1/3～1/4倍量，震荡15～20min，离心弃去沉淀，重复多次至不再产生白色絮状沉淀，于35～37℃烘箱烘干，即得牡蛎粗多糖OPS；称取适量DEAE
‑
纤维素干粉，预处理后装入层析柱并进行柱平衡，制备上样液，上样至DEAE
‑
纤维素层析柱，依次以0、0.05、0.1、0.3mol/L NaCl溶液进行洗脱2.5～3个柱体积；通过自动接样器以流速为1～1.2mL/min，每10～13min一管，对馏分进行收集；将所收集的馏分采用苯酚
‑
硫酸法进行监测，合并490nm时吸光度大于1.5的管，透析至少24h后，冷冻干燥，获得OPS
‑
1样品粉末。2.根据权利要求1所述的一种牡蛎多糖的提取方法，其特征在于，DEAE
‑
纤维素干粉的预处理方法为：将DEAE
‑
纤维素干粉置于去离子水中溶胀至少12h，DEAE
‑
纤维素干粉与去离子水的质量体积比为1:2.5，去除杂质与悬浮颗粒后以湿法装入层析柱中。3.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘飞，侯俊财，刘良伟，李亚楠，刘文颖，谷瑞增，卢知浩，李国明，冯晓文，程青丽，任杰，
申请(专利权)人：中国食品发酵工业研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：