用于癌症免疫疗法的NKG2D-IG融合蛋白制造技术

本申请涉及用于癌症免疫疗法的NKG2D

【技术实现步骤摘要】
用于癌症免疫疗法的NKG2D
‑
IG融合蛋白
[0001]本申请是申请日为2016年11月11日、申请号为“201680071013.5”、名称为“用于癌症免疫疗法的NKG2D
‑
IG融合蛋白”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]相关申请
[0003]本申请要求2015年11月13日提交的美国临时申请第62/255,016号在35U.S.C.
§
119(e)下的优先权，所述申请的内容以全文引用的方式并入本文中。


[0004]本专利技术一般地涉及用于癌症免疫疗法的NKG2D
‑
IG融合蛋白。

技术介绍

[0005]NKG2D是具有胞外凝集素样结构域的II型跨膜糖蛋白。这一结构域缺乏真C型凝集素中发现的可辨识钙结合位点并且结合蛋白质而非碳水化合物配体。NKG2D是在各种免疫细胞中表达的活化受体。人类NKG2D在CD8+αβT细胞、γδT细胞、NK细胞和NKT细胞上表达。在小鼠系统中，NKG2D也出现在巨噬细胞上。NKG2D的人类配体包括MHC I类链相关分子(MICA和MICB)、UL16
‑
结合蛋白(ULBP1、ULBP2、ULBP3和ULBP4)和RAET
‑
1G；并且NKG2D的小鼠配体包括少量组织相容抗原60(H60)和视黄酸早期可诱导转录本(RAE
‑
1)。NKG2D配体的表达在肠上皮细胞、肿瘤细胞中并且在应激或感染条件下也出现。
[0006]NKG2D以配体结合时传递活化信号的二硫键连接的均二聚体形式存在。信号传递需要与接头蛋白质的关联。NKG2D mRNA的选择性剪接产生具有不同细胞质结构域的同功异型物，其可与DAP12关联以递送真活化信号或与DAP10关联从而产生协同刺激信号。NKG2D已涉及对病毒感染的免疫监视和免疫反应。另外，已在增殖细胞和许多类型的癌症中检测到较高含量的NKG2D配体。
[0007]某些NKG2D
‑
Fc嵌合体和其用途先前已公开于例如出版的PCT申请WO/2010/080124中，所述申请的全部内容以引用的方式并入本文中。

技术实现思路

[0008]在本公开内容中，提供用于癌症疗法的新颖组合物和方法。本专利技术至少部分地基于以下出人意料的发现：包含两个NKG2D片段和Fc片段的嵌合分子(例如二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体)能够结合一或多种NKG2D配体，相比于包含单个NKG2D片段和Fc片段的嵌合分子(例如单体NKG2D
‑
Fc嵌合体)，所述嵌合分子用提高的功效诱导肿瘤细胞死亡。在一些实施例中，相比于单体NKG2D
‑
Fc嵌合体，此文件所描述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体以增加的亲合力结合到NKG2D配体。在一些实施例中，亲合力增加2倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
[0009]因此，在一些方面中，本公开提供包含以下的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体：NKG2D1‑
NKG2D2‑
Fc，其中NKG2D1和NKG2D2各自包含NKG2D或其片段并可结合NKG2D配体；并且Fc包含免疫球蛋白的片段可结晶区(Fc)。在一些方面，本公开提供组合物，其包含如本文所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体和药学上可接受的载剂。
[0010]在一些实施例中，二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体进一步包含药物部分。在一些实施例中，药物部分连接到嵌合体的氨基端或羧基端。在一些实施例中，药物部分连接到嵌合体的羧基端。
[0011]在一些实施例中，二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体进一步包含至少一种连接分子，其中至少一种连接分子并非NKG2D1、NKG2D2、Fc或药物部分的连续部分并且共价连接：NKG2D1的氨基酸与NKG2D2的氨基酸；NKG2D2的氨基酸与Fc的氨基酸；或Fc的氨基酸与药物部分。
[0012]在一些实施例中，至少一种连接分子是肽连接子。在一些实施例中，肽连接子的长度在约2到约25个氨基酸范围内。在一些实施例中，至少一种连接分子是甘氨酸
‑
丝氨酸连接子。在一些实施例中，甘氨酸
‑
丝氨酸连接子由式(GS)
n
表示，其中n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。在一些实施例中，甘氨酸
‑
丝氨酸连接子由式(GGGGS)
n
(SEQ ID NO:2)表示，其中n为1、2、3、4或5。
[0013]在一些实施例中，嵌合体包含三种连接分子X1、X2和X3，其中X1共价连接NKG2D1的氨基酸与NKGD2的氨基酸；X2共价连接NKG2D2的氨基酸与Fc的氨基酸；并且X3共价连接Fc的氨基酸与药物部分。在一些实施例中，X1是(GS)3(SEQ ID NO:4)并且X2、X3和X4各自是(GGGGS)4(SEQ ID NO:3)。
[0014]在一些实施例中，NKG2D片段包含NKG2D的胞外片段。在一些实施例中，NKG2D胞外片段由SEQ ID NO:1表示。
[0015]在一些实施例中，Fc包含人类免疫球蛋白(IgG)的片段可结晶区(Fc)。在一些实施例中，人类免疫球蛋白是IgG1。
[0016]在一些方面中，本公开提供用于治疗癌症的方法，包含以可有效治疗癌症的量向患有NKG2D配体表达癌症的个体施用如此文件所描述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体。
[0017]在一些实施例中，NKG2D配体表达癌症是黑素瘤、肺癌、浆细胞癌、白血病、淋巴瘤、卵巢癌、结肠癌、胰脏癌或前列腺癌。在一些情况下，这些癌症中的一种或多种可存在于个体中。
[0018]在一些实施例中，方法进一步包含用其它抗癌疗法治疗个体。在一些实施例中，其它抗癌疗法选自由以下组成的群组：手术、放射疗法、化疗、基因疗法、DNA疗法、病毒疗法、RNA疗法、辅助疗法和免疫疗法。
[0019]在一些实施例中，其它癌症疗法是损伤DNA的化疗。
[0020]在一些实施例中，NKG2D配体是MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULBP5或ULBP6。
[0021]本专利技术的限制中的每一个可以包涵本专利技术的各种实施例。因此，预期涉及任何一种要素或要素的组合的本专利技术的限制中的每一个可以包含在本专利技术的每一方面中。本专利技术在其应用中不限于以下描述中阐述或图式中说明的组件的建造和布置的细节。本专利技术能够具有其它实施例并且以各种方式实践或进行。此外，本文所用的措词和术语是出于描述的目的并且不应被视为是限制性的。本文“包括”、“包含”或“具有”、“含有”、“涉及”以及其变体的使用意指涵盖在其后所列举的项目和其等效物以及额外项目。
附图说明
[0022]图1展示具有(右)和无(左)药物部分的二聚NKG2D
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其包含：NKG2D1‑
NKG2D2‑
Fc，其中NKG2D1和NKG2D2各自包含NKG2D或其片段并且能够结合NKG2D配体；并且Fc包含免疫球蛋白的片段可结晶区Fc。2.根据权利要求1所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其进一步包含药物部分。3.根据权利要求2所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其中所述药物部分连接到所述嵌合体的氨基端或羧基端。4.根据权利要求2所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其中所述药物部分连接到所述嵌合体的所述羧基端。5.根据权利要求1到4中任一权利要求所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其进一步包含至少一种连接分子，其中所述至少一种连接分子并非所述NKG2D1、NKG2D2、Fc或药物部分的连续部分并且共价连接：(a)NKG2D1的氨基酸与NKG2D2的氨基酸；(b)NKG2D2的氨基酸与Fc的氨基酸；或(c)Fc的氨基酸与所述药物部分。6.根据权利要求5所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其中所述嵌合体包含三种连接分子X1、X2和X3，其中X1共价连接NKG2D1的氨基酸与NKGD2的氨基酸；X2共价连接NKG2D2的氨基酸与Fc的氨基酸；并且X3共价连接Fc的氨基酸与所述药物部分。7.根据权利要求5所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其中所述至少一种连接分子是肽连接子。8.根据权利要求7所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其中所述肽连接子的长度在约2到约25个氨基酸范围内。9.根据权利要求5所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其中所述至少一种连接分子是甘氨酸
‑
丝氨酸连接子。10.根据权利要求9所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其中所述甘氨酸
‑
丝氨酸连接子由式(GS)
n
表示，其中n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。11.根据权利要求9所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其中所述甘氨酸
‑
丝氨酸连接子由式(GGGGS)
n
(SEQ ID NO:2)表示，其中n为1、2、3、4或5。12.根据权利要求6所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其中X1是(GS)3并且X2、X3和X4各自是(GGGGS)4(SEQ ID NO:3)。13.根据权利要求1到12中任一权利要求所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其中所述NKG2D片段包含NKG2D的胞外片段。14.根据权利要求13所述的二聚NKG2D
‑
Fc嵌合体，其中所述NKG2D胞外片段由SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员：G，
申请(专利权)人：达纳法伯癌症研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：