一种同时制备新科斯糖和1F-低聚果糖的方法及其专用工程菌株技术

本发明专利技术公开了一种同时制备新科斯糖和1F

【技术实现步骤摘要】
一种同时制备新科斯糖和1F
‑
低聚果糖的方法及其专用工程菌株


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种同时制备新科斯糖和1F
‑
低聚果糖的方法及其专用工程菌株。

技术介绍

[0002]低聚果糖(Fructooligosaccharides，简写为FOS)是在水果、蔬菜、大麦、蜂蜜等中少量存在的天然成分。它作为益生元，可选择性地刺激消化道中乳酸杆菌和双歧杆菌等有益菌群的生长及活性，并能抑制病原微生物的生长，促进肠道微生物群良好平衡。低聚果糖多为含蔗果三糖(GF2)、蔗果四糖(GF3)和蔗果五糖(GF4)的混合物，由葡萄糖通过β
‑
(2，1)糖苷键与果糖单元的短链聚合物连接组成。低聚果糖根据单糖残基之间的连接形式，可分为三种主要类型：1F
‑
低聚果糖(普通型)、6G
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低聚果糖(新科斯糖为代表)和6F
‑
低聚果糖(稀有型)。
[0003]工业上生产低聚果糖主要采用微生物酶法，大体可分为蔗糖酶的转糖基作用和菊粉酶的水解作本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时制备新科斯糖和1F
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低聚果糖的方法，步骤是：(1)制备红发夫酵母来源6G
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β
‑
呋喃果糖苷酶Xd
‑
INV基因表达盒：以黑曲霉ATCC 20611的基因组DNA为模板，以FopA
‑
1UF/FopA
‑
1R为引物扩增β
‑
呋喃果糖苷酶FopA编码基因启动子及信号肽基因PfopA
‑
SP；然后将β
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呋喃果糖苷酶FopA编码基因启动子及信号肽基因PfopA
‑
SP、Xd
‑
INV编码基因、终止子基因TtrpC、抗性基因prtA按顺序连接，制得能随机整合进入黑曲霉ATCC 20611基因组中表达Xd
‑
INV蛋白的Xd
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INV表达盒，其中所述Xd
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INV表达盒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述β
‑
呋喃果糖苷酶FopA编码基因启动子及信号肽基因PfopA
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SP的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述Xd
‑
INV编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述的终止子TtrpC基因来源于质粒pAN7
‑
1；所述的抗性基因prtA扩增于质粒T
‑
prtA；所述引物核苷酸序列如下：FopA
‑
1UF：ATTGTGTCATTATAGCTCTTTCT；FopA
‑
1R：TGAGGCTTCTGCTGCTGC；(2)构建共表达异源6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶Xd
‑
INV和β
‑
呋喃果糖苷酶FopA的工程菌株：制备黑曲霉ATCC 20611的原生质体，将红发夫酵母来源6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶Xd
‑
INV基因表达盒转化进入黑曲霉ATCC 20611的原生质体，经筛选、验证，验证正确的菌株命名为共表达异源6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶Xd
‑
INV和β
‑
呋喃果糖苷酶FopA的工程菌株INCF
‑
1；(3)发酵生产6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶Xd
‑
INV和β
‑
呋喃果糖苷酶FopA：将活化后的工程菌株INCF
‑
1以106个/ml的数量接种到发酵培养基中，在温度30
±
3℃、转速180
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220r/min条件下发酵1
‑
7天，即得到含异源6G
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β
‑
呋喃果糖苷酶Xd
‑
INV和β
‑
呋喃果糖苷酶FopA的菌丝体；其中，所述发酵培养基配方是：蔗糖38
±
2g/L，酵母膏3
±
1g/L，NaNO
3 4
±
1g/L，K2HPO
4 0.4
±
0.2g/L，MgSO47H2O 0.5
±
0.1g/L，FeSO
4 0.01
±
0.05g/L，CuSO
4 0.01
±
...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟耀华，万秀芬，张静，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：