一种利用黑曲霉表达6G-β-呋喃果糖苷酶生产新科斯糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用黑曲霉表达红发夫酵母6G

A method of using Aspergillus niger to express 6g- \u03b2- Production of neocostose by fructofuranosidase

【技术实现步骤摘要】
一种利用黑曲霉表达6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶生产新科斯糖的方法


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种利用黑曲霉表达红发夫酵母6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶生产新科斯糖的方法。

技术介绍

[0002]低聚果糖具有显著的益生效应，是功能性食品的公认安全(GRAS)成分，在改善肠道微生物群平衡和个体健康方面起着重要作用。低聚果糖根据单糖残基之间的连接形式，可分为三种主要类型。第一类是1F
‑
低聚果糖，由β
‑
(2
→
1)糖苷键将果糖基连接到蔗糖的果糖基末端1
‑
OH位置，如1
‑
kestose(1
‑
蔗果三糖)、nystose(蔗果四糖)和1F
‑
fructofuranosylnystose(1
‑
蔗果五糖)。第二类是6F
‑
低聚果糖，由β
‑
(2
→
>6)糖苷键将果糖基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用黑曲霉表达红发夫酵母6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶生产新科斯糖的方法，步骤是：(1)制备红发夫酵母来源6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶Xd
‑
INV置换型表达盒：以黑曲霉ATCC 20611的基因组DNA为模板，分别以FopA
‑
1UF/FopA
‑
1R、FopA
‑
2DF/FopA
‑
2DR为引物扩增β
‑
呋喃果糖苷酶FopA编码基因fopA的上下游同源臂，其中上游同源臂为带有fopA基因信号肽序列的fopA基因的启动子PfopA
‑
SP；然后将其上游同源臂PfopA
‑
SP、Xd
‑
INV编码基因、fopA
‑
C片段、终止子基因TtrpC、抗性基因prtA、下游同源臂按顺序连接，制得Xd
‑
INV置换型表达盒，其中所述Xd
‑
INV置换型表达盒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述Xd
‑
INV编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述fopA
‑
C片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述的终止子TtrpC基因来源于质粒pAN7
‑
1；所述的抗性基因prtA扩增于质粒T
‑
prtA；所述引物核苷酸序列如下：FopA
‑
1UF：ATTGTGTCATTATAGCTCTTTCT；FopA
‑
1R：TGAGGCTTCTGCTGCTGC；FopA
‑
2DF：AACAAAGATGCAAGAGCGGCCATTGGTAACTCCTCGCTAT；FopA
‑
2DR：CACCCACTTTACTTTTATCTTC；(2)构建表达异源6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶Xd
‑
INV的工程菌株：制备黑曲霉ATCC 20611的原生质体，将红发夫酵母来源6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶Xd
‑
INV基因置换型表达盒转化进入黑曲霉ATCC 20611的原生质体，经筛选、验证，验证正确的菌株命名为表达异源6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶Xd
‑
INV的工程菌株INC1；(3)发酵生产6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶Xd
‑
INV：将活化后的表达异源β
‑
葡萄糖苷酶的工程菌株INC1以106个/ml的数量接种到发酵培养基中，在温度30
±
3℃、转速180
‑
220r/min条件下发酵1
‑
7天，即得到含异源6G
‑
β
‑
呋喃果糖苷酶Xd
‑
INV的菌丝体；其中，所述发酵培养基配方是：蔗糖38
±
2g/L，酵母膏3
±
1g/L，NaNO
3 4
±
1g/L，K2HPO
4 0.4
±
0.2g/L，MgSO47H2O 0.5
±
0.1g/L，FeSO
4 0.01
±
0.05g/L，CuSO
4 0.01<...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟耀华，万秀芬，王璐，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：