用于治疗癌症的、包含含有IL-2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白与自然杀手细胞的药物组合物制造技术

本文提供有一种抗癌剂，其包含作为活性成分的含有IL

Pharmaceutical composition for treating cancer, including fusion protein containing IL-2 protein and CD80 protein and natural killer cells

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗癌症的、包含含有IL
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2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白与自然杀手细胞的药物组合物


[0001]本专利技术涉及一种用于治疗癌症的药物组合物，其包含作为活性成分的含有CD80蛋白及IL
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2变体的融合蛋白与NK细胞。

技术介绍

[0002]IL
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2，亦称作T细胞生长因子(TCGF)，是一种球状糖蛋白，其在淋巴细胞的生成、存活及动态平衡中发挥核心的作用。IL
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2蛋白具有15.5kDa至16kDa的大小且由133个氨基酸构成。IL
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2通过与具有三个不同次单元法人IL
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2受体结合，介导各种免疫作用。此外，IL
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2主要是由活化的T细胞合成，特别是由CD4+辅助型T细胞。IL
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2会刺激T细胞的增殖与分化，及诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的产生及外周血淋巴细胞分化成细胞毒性细胞与淋巴激素活化杀手细胞(LAK细胞)。
[0003]同时，CD80，亦称作B7
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1，是膜连型蛋白B7家族的成员，其通过与其配体结合，透过递送共刺激反应及共抑制反应的方式进行免疫调节。CD80是一种表达在T细胞、B细胞、树状细胞及单核球表面上的透膜蛋白。CD80已知会与CD28、CTLA4(CD152)及PD
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L1结合。CD80、CD86、CTLA4及CD28涉及共刺激
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共抑制系统。例如，其等会调节T细胞的活性且涉及其增殖、分化及存活。
[0004]此外，已知自然杀手细胞(然后称NK细胞)会通过移除癌细胞而表现出抗癌活性(Loris Zamai et.al.,J.Immunol.,178:4011
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4016,2007)。NK细胞活性的调节是通过各种活化性及抑制性受体传讯的平衡。已知NK细胞还能透过表达在表面上的各种免疫受体来辨别癌细胞以达到抗癌活性。由于正常细胞中存在主要组织兼容性复合体(MHC)第I类，所以正常细胞不会被NK细胞的抑制性受体辨识，从而不会遭受攻击，但癌细胞或一些受感染的细胞因MHC第I类减少或具有NK细胞活化受体的配体而会被NK细胞清除。除了癌细胞外，NK细胞还可消除癌干细胞，因此成为不仅可抑制癌的发展、增殖及转移，且可降低完全康复后癌症复发的备受关注的治疗剂来源。

技术实现思路

[0005]因此，研究开发安全且有效的IL
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2的结果，本专利技术人发现共给药在一分子中含有IL
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2蛋白和CD80蛋白的新穎的融合蛋白二聚体与自然杀手细胞的组合，表现出优异的抗癌作用，并完成本专利技术。
[0006]为达成上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供一种抗癌剂，其包含作为活性成分的含有IL
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2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白二聚体与自然杀手细胞。
[0007]本专利技术的效果
[0008]已确认含有IL
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2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白二聚体不仅可活化免疫细胞，且当与自然杀手细胞结合给药时，可表现出协同作用。因此，此组合疗法可用于治疗癌症。
附图说明
[0009]图1是本专利技术中所使用的融合蛋白二聚体的实施方案的示意图。
[0010]图2显示确认所获得的融合蛋白二聚体(GI
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101)的SDS
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PAGE影像。
[0011]图3显示所获得的融合蛋白二聚体(GI
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101)的粒径筛析色谱法(SEC)的分析。
[0012]图4显示确认所获得的Fc
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IL2v2融合蛋白的SDS
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PAGE影像。
[0013]图5显示所获得的Fc
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IL2v2融合蛋白的粒径筛析色谱法(SEC)的分析。
[0014]图6显示确认所获得的hCD80
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Fc融合蛋白的SDS
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PAGE影像。
[0015]图7显示所获得的hCD80
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Fc融合蛋白的粒径筛析色谱法(SEC)的分析。
[0016]图8显示在无自然杀手细胞的情况下单独培养K562细胞株(E/T比＝0/1)时，以GI
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101或CD80
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Fc+Fc
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IL2v2处理的癌细胞存活力结果。在此情况下，E表示作为效应细胞的NK细胞，T表示作为标靶细胞的K562癌细胞株。
[0017]图9显示在无自然杀手细胞的情况下单独培养MDA
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MB
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231细胞株(E/T比＝0/1)时，以GI
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101或CD80
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Fc+Fc
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IL2v2处理的癌细胞存活力结果。在此情况下中，E表示作为效应细胞的NK细胞，T表示作为标靶细胞的MDA
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MB
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231癌细胞株。
[0018]图10显示在无自然杀手细胞的情况下单独培养HCT
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116细胞株(E/T比＝0/1)时，以GI
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101或CD80
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Fc+Fc
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IL2v2处理的癌细胞存活力结果。在此情况下，E表示作为效应细胞的NK细胞，T表示作为标靶细胞的HCT
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116癌细胞株。
[0019]图11显示在无自然杀手细胞的情况下单独培养A549细胞株(E/T比＝0/1)时，以GI
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101或CD80
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Fc+Fc
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IL2v2处理的癌细胞存活力结果。在此情况下，E表示作为效应细胞的NK细胞，T表示作为标靶细胞的A549癌细胞株。
[0020]图12显示在共培养K562细胞株(标靶细胞)与自然杀手细胞(效应细胞)，E/T比＝1/3时，以GI
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101或CD80
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Fc+Fc
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IL2v2的组合材料处理的癌细胞存活力结果。
[0021]在此，Y轴＝0表示在起始接种时癌细胞的存活力讯号(红色讯号)范围设为0。Y轴>0是接种后发现癌细胞存活力讯号范围增加的情况，表示细胞增殖率快于细胞死亡率(细胞增殖率>细胞死亡率)。即，可视为癌细胞数增加。然而，一般认为增加的值越低，则越能抑制癌细胞的增殖。同时，假如测得的存活癌细胞面积小于起始接种时测得的存活癌细胞面积，则表示为负值，其表示细胞增殖率低于细胞死亡率(细胞增殖率<细胞死亡率)。即，与在起始接种时测得的面积相比，面积减少表示为负值。因此，提示负值越大可能不仅与癌细胞增殖的抑制有关，而且与癌细胞死亡有关。
[0022]图13显示在共培养K562细胞株与自然杀手细胞(E/T比＝1/1)时，以GI
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101或CD80
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Fc+F本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于治疗癌症的药物组合物，其包含作为活性成分的含有IL
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2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白及自然杀手(NK)细胞。2.如权利要求1的用于治疗癌症的组合物，其中所述IL
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2蛋白及该CD80蛋白透过一接头附接。3.如权利要求1的用于治疗癌症的组合物，其中所述IL
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2蛋白具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。4.如权利要求1的用于治疗癌症的组合物，其中所述IL
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2蛋白是IL
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2变体。5.如权利要求4的用于治疗癌症的组合物，其中所述IL
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2变体是通过SEQ ID NO:10的氨基酸序列中第38个、第42个、第45个、第61个及第72个氨基酸中的至少一个取代而获得。6.如权利要求4的用于治疗癌症的组合物，其中所述IL
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2变体是通过至少一个选自于由下列所构成的群组的取代而获得：SEQ ID NO:10的氨基酸序列中的R38A、F42A、Y45A、E61R及L72G。7.如权利要求4的用于治疗癌症的组合物，其中所述IL
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2变体含有任一个选自于下列SEQ ID NO:10的氨基酸序列中的取代组合(a)至(d)：(a)R38A/F42A(b)R38A/F42A/Y45A(c)R38A/F42A/E61R(d)R38A/F42A/L72G。8.如权利要求4的用于治疗癌症的组合物，其中所述IL
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2变体具有SEQ ID NO:6、22、23或24的氨基酸序列。9.如权利要求1的用于治疗癌症的组合物，其中该CD80蛋白具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列。10.如权利要求1的用于治疗癌症的组合物，其中该CD80蛋白是CD80片段。11.如权利要求10的用于治疗癌症的组合物，其中该CD80片段由SEQ ID NO:11中第35个至第242个氨基酸构成。12.如权利要求2的用于治疗癌症的组合物，其中该接头是白蛋白或免疫球蛋白的Fc结构域。13.如权利要求12的用于治疗癌症的组合物，其中该Fc结构域是野生型Fc结构域或Fc结构域变体。1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张明浩，洪天杓，梁祯允，高荣晙，李俊燮，崔荣周，
申请(专利权)人：吉爱希公司，
类型：发明
国别省市：