用于培养自然杀手细胞的组合物及使用其来生产自然杀手细胞的方法技术

本发明专利技术涉及用于培养自然杀手细胞的组合物，其包含作为活性成分的含有IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于培养自然杀手细胞的组合物及使用其来生产自然杀手细胞的方法


[0001]本专利技术涉及一种用于培养自然杀手细胞的组合物及使用其来生产自然杀手细胞的方法。

技术介绍

[0002]专利技术背景
[0003]对于癌症的治疗，已经发展出各种的治疗法，如手术、放疗及化疗，但有许多的副作用报告，近年来已发展出使用患者的免疫功能的免疫疗法。特别是，研究使用可进行大规模生产及冷冻的自然杀手细胞的免疫疗法。
[0004]具体地，自然杀手细胞是一种分布在身体的骨髓、脾、周边淋巴结及外周血的淋巴细胞。其等约占外周血淋巴细胞的10％，且在先天性免疫反应中占重要角色(Ann Rev Immunol.,24:257
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286,2006))。此外，自然杀手细胞是CD56及CD16阳性，但CD3阴性。自然杀手细胞通过释放含有穿透细胞膜蛋白质及颗粒酶的细胞质颗粒来杀伤细胞。自然杀手细胞会分泌各种的细胞因子，如IFN
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γ、TNF
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α、GM
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CSF及IL
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10。
[0005]此外，自然杀手细胞的细胞表面上会表达数种受体，且此等受体牵涉细胞黏着、杀伤细胞能力的活化或杀伤细胞能力的抑制。然而，正常受试者体内大部分的自然杀手细胞处于非活化状态。因此需有活化的自然杀手细胞来消除癌症。此外，在癌症患者体内存在的自然杀手细胞方面，自然杀手细胞由于癌细胞的免疫回避机制而有功能缺陷。因此，活化自然杀手细胞，以便使用自然杀手细胞作为治疗剂非常重要。再者，因为体内存在的自然杀手细胞数量有限，因此必要开发出可大量增殖及冷冻从正常受试者或患者而来的血液中的自然杀手细胞的技术。
[0006]IL
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2，亦称作T细胞生长因子(TCGF)，是一种球状糖蛋白，其在淋巴细胞的生成、存活及动态平衡中发挥核心的作用。IL
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2具有15.5kDa至16kDa的蛋白大小且由133个氨基酸构成。IL
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2通过与具有三个不同次单元的IL
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2受体结合，介导各种免疫作用。
[0007]此外，CD80亦称作B7
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1，是膜连型蛋白B7家族的成员，其通过与配体结合涉及免疫调节，因此传递共刺激反应及共抑制反应。CD80是一种表达在T细胞、B细胞、树状细胞及单核球表面上的透膜蛋白。CD80已知会与CD28、CTLA4(CD152)及PD
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L1结合。
[0008]因此，自然杀手细胞对于抗癌治疗的重要性众所周知，但能放大自然杀手细胞以便有效地使用其等的具体方法仍不足。

技术实现思路

[0009]据此，研究大量制备活化的自然杀手细胞的结果，本专利技术人通过使用含有IL
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2蛋白与CD80蛋白的融合蛋白二聚体制备自然杀手细胞。此外，本专利技术人确定因此制得的自然杀手细胞活性增强且表现出优异的抗癌作用，因此完成本专利技术。
[0010]为达到上述目的，根据一个示例性的实施方案，提供一种用于培养自然杀手细胞
的组合物，其包含作为活性成分的含有IL
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2或其变体与CD80或其片段的融合蛋白二聚体。
[0011]根据另一个示例性的实施方案，提供一种用于培养自然杀手细胞的方法，其包含：i)从外周血单核细胞(PBMC)中分离出不会表达CD3的细胞；ii)从以上步骤中分离的不会表达CD3的细胞中，分离出会表达CD56的细胞；及iii)在含有IL
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2或其变体与CD80或其片段的融合蛋白二聚体的存在下，培养该分离的细胞。
[0012]根据又另一个示例性的实施方案，提供一种通过该用于培养自然杀手细胞的方法制得的自然杀手细胞。
[0013]根据再一个示例性的实施方案，提供一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含该自然杀手细胞作为活性成分。
[0014]根据又再另一个示例性的实施方案，提供一种用于培养自然杀手细胞的方法，其包含：i)从PBMCs中分离出不会表达CD3的细胞；及ii)在含有IL
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2或其变体与CD80或其片段的融合蛋白二聚体的存在下，培养该分离的细胞。
[0015]根据另一个示例性的实施方案，提供一种通过该用于培养自然杀手细胞的方法制得的自然杀手细胞。
[0016]根据又另一个示例性的实施方案，提供一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含该自然杀手细胞作为活性成分。
[0017]根据再另一个示例性的实施方案，提供一种用于培养自然杀手细胞的方法，其包含：i)从PBMCs中分离出会表达CD56的细胞；及iii)在含有IL
‑
2或其变体与CD80或其片段的融合蛋白二聚体的存在下，培养该分离的细胞。
[0018]根据又再另一个示例性的实施方案，提供一种通过该用于培养自然杀手细胞的方法制得的自然杀手细胞。
[0019]根据另一个示例性的实施方案，提供一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含该自然杀手细胞作为活性成分。
[0020]根据又另一个示例性的实施方案，提供一种用于促进PBMCs中自然杀手细胞的活化的方法，其包含在含有IL
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2或其变体与CD80或其片段的融合蛋白二聚体的存在下培养PBMCs。
[0021]根据又另一个示例性的实施方案，提供一种通过该用于促进PBMCs中自然杀手细胞的活化的方法制得的PBMCs。
[0022]根据再另一个示例性的实施方案，提供一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含该PBMCs作为活性成分。
[0023]本专利技术的用于培养自然杀手细胞的组合物，其包含作为活性成分的含有IL
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2或其变体与CD80或其片段的融合蛋白，可促进自然杀手细胞的增殖、诱导CD16及NKp46的表达及增加颗粒酶B及穿透细胞膜蛋白质的表达与分泌，因此可用于生产具有优异抗癌免疫功能的自然杀手细胞。
附图说明
[0024]结合下列说明与附图可更详细地了解例示实施例，其中：
[0025]图1A是本专利技术中使用的融合蛋白二聚体的示意图；
[0026]图1B显示确定所获得的融合蛋白二聚体(GI
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101)的SDS
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PAGE影像；
[0027]图1C显示根据吸亮度的融合蛋白二聚体(GI
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101)的含量；
[0028]图1D显示所获得的融合蛋白二聚体(GI
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101)的尺寸排除色谱法(SEC)的分析结果；
[0029]图2A显示确定所获得的hCD80
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Fc融合蛋白二聚体的SDS
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PAGE影像；
[0030]图2B显示所获得的hCD80
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Fc融合蛋白二聚体的尺寸排除色谱法(SEC)的分析结果；
[0031]图3A显示确定所获得的Fc
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IL2v2融合蛋白二聚体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于培养自然杀手细胞的组合物，其包含作为活性成分的含有IL
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2或其变体与CD80或其片段的融合蛋白二聚体。2.如权利要求1的组合物，其中所述IL
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2变体是通过取代SEQ ID NO:10的氨基酸序列中的第38个及第42个氨基酸而获得的。3.如权利要求1的组合物，其中所述IL
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2变体由SEQ ID NO:6的氨基酸序列构成。4.如权利要求1的组合物，其中该CD80片段由SEQ ID NO:11的氨基酸序列中的第35个至第242个氨基酸构成。5.如权利要求1的组合物，其中该融合蛋白由SEQ ID NO:9的氨基酸序列构成。6.一种用于培养自然杀手细胞的方法，其包含：i)从外周血单核细胞(PBMCs)中分离出不表达CD3的细胞；ii)从以上步骤中所分离出的不表达CD3的细胞中分离出表达CD56的细胞；及iii)在含有IL
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2或其变体与CD80或其片段的融合蛋白二聚体的存在下，培养该经分离的细胞。7.如权利要求6的方法，其中所述融合蛋白二聚体以1nM至500nM的浓度予以处理。8.如权利要求6的方法，其中在该培养步骤中的培养期为5天至25天。9.一种自然杀手细胞，其是通过如权利要求6的方法所制得的。10.如权利要求9的自然杀手细胞，其中在该自然杀手细胞中CD16及NKp46的表达是增加的。11.如权利要求9的自然杀手细胞，其中在该自然杀手细胞中颗粒酶B及穿透细胞膜蛋白质的表达是增加的。12.一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含如权利要求9的自然杀手细胞作为活性成分。13.如权利要求9的药物组合物，其中该癌症是选自于由下列所构成的群组的任一个：胃癌、肝癌、肺癌、结直肠癌、乳癌、前列腺癌、卵巢癌、胰脏癌、子宫颈癌、甲状腺癌、喉癌、急性淋巴母细胞白血病、脑瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、头颈癌、唾液腺癌及淋巴瘤。14.一种用于培养自然杀手细胞的方法，其包含：i)从PBMCs中分离出不表达CD3的细胞；...

【专利技术属性】
技术研发人员：张明浩，洪天杓，高东佑，李俊燮，
申请(专利权)人：吉爱希公司，
类型：发明
国别省市：