用于培养T细胞的组合物及使用其来培养T细胞的方法技术

本发明专利技术涉及用于增殖T细胞的组合物，其包含融合蛋白二聚体，所述融合蛋白二聚体含有IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于培养T细胞的组合物及使用其来培养T细胞的方法


[0001]本专利技术涉及用于培养T细胞的组合物，其包含含有CD80蛋白与IL
‑
2野生型或其变体的融合蛋白，及使用其的T细胞培养方法。

技术介绍

[0002]诺华的Kymriah(INN：替萨根微核(Tisagenlecleucel)，产品代码：CTL019)，近来获得美国食品药物管理局(FDA)及欧洲药品管理局(EMA)批准上市，是一种由基因改造的自体T细胞构成的基因治疗剂(美国专利No.9,499,629)。该产品是由患者自身的T细胞，经过编码人CD19的嵌合抗原受体(CAR)的慢病毒载体的转导而生成。该T细胞的作用为抗原依赖性的，且以独立于主要组织兼容性复合体的方式特异性靶定与摧毁CD19阳性B细胞。
[0003]Kymriah的制程如下：通过两个不同的过程增殖T细胞，用结合CD3与CD28抗体的磁珠刺激该增殖的T细胞，然后用CTL019 HIV
‑
1转导。然后，透过培养一段时间增殖表达CAR的自体T细胞，然后经过清洗过程除去杂质如结合CD3/CD28的珠。然而，近来确认一种在Kymriah的制程中用于T细胞增殖及活化的CD3/CD28抗体结合磁珠，有可能引起急性毒性。
[0004]此外，药用产品中的复制型慢病毒(RCL)已知具有感染性，可经过人与人的接触传染。在对具有可能通过捐献血液、器官、组织或细胞进行输血或移植而传播新的慢病毒的风险的患者给药Kymriah然后，可能会因原病毒与宿主基因组序列间的互补而通过载体的转移形成RCL。因此，还有可能在之前是HIV阳性的患者中生成新的HIV病毒。如此，一般认为，理论上，此对环境的潜在影响是严重的，因为新的复制型慢病毒可能传染并扩散至人群。
[0005]据此，越来越需要有一种无此副作用的新的自体T细胞治疗剂。

技术实现思路

[0006]本专利技术人经过不断地努力，在不使用CD3/CD28抗体结合磁珠的情况下增加T细胞的增殖及活性，结果发现在含有CD80蛋白与IL
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2野生型或其变体的融合蛋白的存在下，于细胞培养基中培养外周血单核细胞，可增加T细胞的增殖及活性，并完成本专利技术。
[0007]为达到以上目的，根据示例性的实施方案，提供一种用于培养T细胞的组合物或培养基，其包含作为活性成分的含有IL
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2蛋白或其变体与CD80蛋白或其片段的融合蛋白二聚体。
[0008]根据另一示例性的实施方案，提供一种T细胞培养方法，其使用含有IL
‑
2蛋白或其变体与CD80蛋白或其片段的融合蛋白二聚体。
[0009]根据又另一示例性的实施方案，提供一种药物组合物，其包含作为活性成分的T细胞，其培养在包含含有IL
‑
2蛋白或其变体与CD80蛋白或其片段的融合蛋白二聚体的培养基中。
[0010]通过根据本专利技术的用于培养T细胞的T细胞培养基组合物及使用其来培养T细胞的T细胞培养方法培养的T细胞，可在不使用CD3/CD28抗体结合磁珠的情况下增加T细胞的增
殖及活性。因此，可更安全地制备T细胞，因为不会生成杂质如磁珠。此外，培养患者自身的外周血单核细胞来增殖T细胞，如此不用担心人的副作用，因此将能广泛地用作新的T细胞治疗剂。
附图说明
[0011]结合下列说明与附图可更详细地了解例示实施例，其中：
[0012]图1是本专利技术中使用的融合蛋白的制备实施例的示意图；
[0013]图2显示通过SDS
‑
PAGE确认所获得的融合蛋白(GI
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101)；
[0014]图3显示通过尺寸排除色谱法(size exclusion chromatography,SEC)确认所获得的融合蛋白(GI
‑
101)；
[0015]图4显示通过SDS
‑
PAGE确认所获得的Fc
‑
IL2v2融合蛋白；
[0016]图5显示通过尺寸排除色谱法(SEC)确认所获得的Fc
‑
IL2v2融合蛋白；
[0017]图6显示通过SDS
‑
PAGE确认所获得的Fc
‑
IL2wt融合蛋白二聚体；
[0018]图7显示通过尺寸排除色谱法(SEC)确认所获得的Fc
‑
IL2wt融合蛋白二聚体；
[0019]图8显示通过SDS
‑
PAGE确认所获得的hCD80
‑
Fc
‑
IL2wt融合蛋白；
[0020]图9显示通过尺寸排除色谱法(SEC)确认所获得的hCD80
‑
Fc
‑
IL2wt融合蛋白；
[0021]图10显示通过SDS
‑
PAGE确认所获得的hCD80
‑
Fc融合蛋白；
[0022]图11显示通过尺寸排除色谱法(SEC)确认所获得的hCD80
‑
Fc融合蛋白；
[0023]图12显示在含有表1的基本培养基的培养组合物中培养时，CD4
‑
PBMC细胞的总数；
[0024]图13显示在含有表1的基本培养基的培养组合物中培养时，CD4
‑
PBMC细胞的存活力；
[0025]图14显示在含有表2的基本培养基的培养组合物中培养时，CD4
‑
PBMC细胞的总数；
[0026]图15显示在含有表2的基本培养基的培养组合物中培养时，CD4
‑
PBMC细胞的存活力；
[0027]图16显示在含有表1的基本培养基的培养组合物中，通过根据本专利技术的GI
‑
101或的hCD80
‑
Fc与Fc
‑
IL2v添加剂处理的CD4
‑
PBMC细胞以流式细胞术进行细胞表面分析的结果；
[0028]图17是通过荧光活化细胞分选(FACS)分析法，对在含有表1的基本培养基且经本专利技术的GI
‑
101或hCD80
‑
Fc与Fc
‑
IL2v添加剂处理的培养组合物中培养14天的CD4
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PBMC细胞进行T细胞(CD3+CD19
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细胞)总数的定量的图；
[0029]图18是通过FACS分析法，对在含有表1的基本培养基且经本专利技术的GI
‑
101或hCD80
‑
Fc与Fc
‑
IL2v添加剂处理的培养组合物中培养14天的CD4
‑
PBMC细胞进行CD8 T细胞数的定量的图；
[0030]图19是通过FACS分析法，对在含有表1的基本培养基且经本专利技术的GI
‑
101或hCD80
‑
Fc与Fc
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于增殖T细胞的组合物，其包含作为活性成分的融合蛋白二聚体，所述融合蛋白二聚体包含IL
‑
2蛋白或其变体与CD80蛋白或其片段。2.如权利要求1的组合物，其中所述IL
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2蛋白或其变体与该CD80蛋白或其片段系经由接头连接。3.如权利要求1的组合物，其中所述IL
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2蛋白具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。4.如权利要求1的组合物，其中该CD80具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列。5.如权利要求1的组合物，其中该融合蛋白具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。6.一种用于增殖T细胞的培养基，其包含融合蛋白二聚体，所述融合蛋白二聚体包含IL
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2蛋白或其变体与CD80蛋白或其片段。7.如权利要求6的培养基，其进一步包含用于培养T细胞的培养基。8.如权利要求7的培养基，其中该用于培养T细胞的培养基包含氨基酸、糖、无机盐及维生素。9.一种用于培养T细胞的方法，其包含：在包含融合蛋白二聚体的培养基中培养CD8+T细胞，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张明浩，洪天杓，崔荣周，李俊燮，
申请(专利权)人：吉爱希公司，
类型：发明
国别省市：