调节性T细胞培养组合物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种用于有效地培养调节性T细胞的方法，具体地，含有IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】调节性T细胞培养组合物及其用途


[0001]本专利技术涉及一种用于培养T细胞的组合物及一种使用其来培养调节性T细胞的方法。

技术介绍

[0002]T细胞在细胞介导免疫中扮演核心角色。T细胞通过T细胞表面上的受体如T细胞受体(TCR)与其它淋巴细胞(包括B细胞)区分。此外，T细胞包括各种类型的T细胞，如辅助型T细胞(TH细胞)、细胞毒性T细胞(TC细胞或CTL)、记忆型T细胞(TM细胞)，包括中央记忆型T细胞(TCM细胞)及效应记忆型T细胞(TEM细胞)、自然杀手T细胞(NKT细胞)、γδT细胞(γδT细胞)及调节性T细胞(Treg细胞)。
[0003]其中，调节性T细胞(Treg)是抑制其它细胞的免疫反应的T细胞。例如，Treg细胞会在免疫反应期间抑制T细胞介导的免疫及抑制逃脱胸腺阴性选择的自反应性T细胞。Treg细胞大致上分成自然调节性T细胞(nTreg)及诱导型调节性T细胞(iTreg)。自然调节性T细胞系，又称为CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞，在胸腺中发展。诱导型调节性T细胞与天然存在的Treg细胞共享许多属性，然而从CD4+CD25
‑
FoxP3
‑
T细胞转换成CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的特性是已知的代表性差异。
[0004]因此，调节性T细胞与各种自体免疫系统异常引起的疾病中的重要性的研究积极地进行着。自从Gershon(R K Gershon and K Kondo,Immunology,1970,18:723
‑r/>37)在1970年代初首次导入及提出抑制性T细胞的概念，在免疫学的许多领域中一直有研究进行，用以阐明调节性T细胞的生物学特性和功能。特别是，自从Sakaguchi在1995年提出CD25可作为天然存在的CD4+调节性T细胞的重要的表型标记(S Sakaguchi et,al.,J Immunol,1995,155:1151
‑
1164)，一直有研究进行，着重于调节性T细胞在诱导周边对自身抗原的外周耐受性的角色及重要性。
[0005]调节性T细胞已知能分泌称为免疫抑制性细胞因子的IL
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10、TGF
‑
β、IL
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35等等(H Nishikawa et,al.,Int.J.Cancer,2010,127:759
‑
767)。研究证明，分泌免疫抑制性细胞因子的调节性T细胞可分泌IL
‑
10等等，以便诱导会引起自体免疫疾病的抗原特异性T细胞成为免疫耐受的抗原呈现细胞，从而诱导了免疫耐受性(S.Karumuthil
‑
Melethil et,al.,Diabetes,2015,64:1341
‑
1357)。
[0006]如此，调节性T细胞用于治疗自体免疫疾病的用途已广为人知，但可扩大自然杀手细胞以便有效地使用其等的特定方法仍然不足。

技术实现思路

[0007]据此，本专利技术人研究一种用于有效地培养调节性T细胞的方法，结果发现，在一分子中含有IL
‑
2蛋白与CD80蛋白的新颖融合蛋白二聚体可有效地增殖T细胞，并完成本专利技术。
[0008]解决问题的方法
[0009]为达到以上目的，根据示例性的实施方案，一种用于培养调节性T细胞的组合物
(composition)或培养基(medium)，其包含作为活性成分的含有IL
‑
2蛋白或其变体与CD80蛋白或其片段的融合蛋白二聚体。
[0010]根据另一示例性实施方案，提供一种用于培养调节性T细胞的方法，其使用含有IL
‑
2蛋白或其变体与CD80蛋白或其片段的融合蛋白二聚体。
[0011]根据又另一示例性实施方案，一种药物组合物，其包含作为活性成分的调节性T细胞，其培养在包含含有IL
‑
2蛋白或其变体与CD80蛋白或其片段的融合蛋白二聚体的培养基中。
[0012]本专利技术的效果
[0013]根据本专利技术的培养组合物(culture composition)不仅可有效地增殖T细胞，且特别地，可有效地增殖调节性T细胞。特别是，确定了与使用常规的IL
‑
2的培养方法相比，调节性T细胞的存活率显著地增加。亦确定在所获得的调节性T细胞中，Foxp3+的表达增加。因此，此增殖方法可用于使用调节性T细胞的细胞疗法的领域。
附图说明
[0014]结合下列说明与附图可更详细地了解示例性的实施方案，其中：
[0015]图1A是本专利技术中使用的融合蛋白二聚体的示意图；
[0016]图1B显示确定所获得的融合蛋白二聚体(GI
‑
101)的SDS
‑
PAGE影像；
[0017]图1C显示根据吸亮度的融合蛋白二聚体(GI
‑
101)的含量；
[0018]图1D显示所获得的融合蛋白二聚体(GI
‑
101)的分析型尺寸排除色谱(SEC)分析；
[0019]图2A显示确定所获得的hCD80
‑
Fc融合蛋白二聚体的SDS
‑
PAGE影像；
[0020]图2B显示所获得的hCD80
‑
Fc融合蛋白二聚体的分析型尺寸排除色谱(SEC)分析；
[0021]图3A显示确定所获得的Fc
‑
IL2v2融合蛋白二聚体的SDS
‑
PAGE影像；
[0022]图3B显示所获得的Fc
‑
IL2v2融合蛋白二聚体的分析型尺寸排除色谱(SEC)分析；
[0023]图3C显示确定所获得的Fc
‑
IL2wt融合蛋白二聚体的SDS
‑
PAGE影像；
[0024]图3D显示所获得的Fc
‑
IL2wt融合蛋白二聚体的分析型尺寸排除色谱(SEC)分析；
[0025]图4A显示确定所获得的hCD80
‑
Fc
‑
IL2wt融合蛋白二聚体的SDS
‑
PAGE影像；
[0026]图4B显示所获得的hCD80
‑
Fc
‑
IL2wt融合蛋白二聚体的分析型尺寸排除色谱(SEC)分析；
[0027]图5显示使用融合蛋白二聚体来培养Treg细胞的方法的示意图；
[0028]图6显示培养在含RPMI1640培养基的组合物中的调节性T细胞的数量；
[0029]图7显示培养在含RPMI1640培养基的组合物中的调节性T细胞的存活率；
[0030]图8显示培养在含TexMACS培养基的组合物中的调节性T细胞的数量；
[0031]图9显示培养在含TexMACS培养基的组合物中的调节性T细胞的存活率；
[0032]图10显示本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于增殖调节性T细胞的组合物，其包含作为活性成分的融合蛋白二聚体，所述融合蛋白二聚体含有IL
‑
2蛋白或其变体与CD80蛋白或其片段。2.如权利要求1的用于增殖调节性T细胞的组合物，其中所述IL
‑
2蛋白或其变体与所述CD80蛋白或其片段通过接头连接。3.如权利要求1的用于增殖调节性T细胞的组合物，其中所述IL
‑
2蛋白具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列。4.如权利要求1的用于增殖调节性T细胞的组合物，其中所述CD80具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列。5.如权利要求1的用于增殖调节性T细胞的组合物，其中所述融合蛋白具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列。6.如权利要求1的用于增殖调节性T细胞的组合物，其中所述调节性T细胞是CD4+CD25+CD127
‑
细胞。7.一种用于增殖调节性T细胞的培养基，其包含融合蛋白二聚体，所述融合蛋白二聚体含有IL
‑
2蛋白或其变体与CD80蛋白或其片段。8.如权利要求7的用于增殖调节性T细胞的培养基，其进一步包含CD4+T细胞培养基。9.如权利要求8的用于增殖调节性T细胞的培养基，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张明浩，洪天杓，金彩河，金惠利，
申请(专利权)人：吉爱希公司，
类型：发明
国别省市：