可成为淀粉样蛋白球体(ASPD)的替代物的β淀粉样蛋白(Aβ)的交联体、以及ASPD的分析制造技术

本发明专利技术涉及可成为淀粉样蛋白球体(ASPD)的替代物的物质、以及ASPD的分析方法。本公开在一个方式中，涉及通过间隔臂长度为以上且以下的交联剂、或作为间隔臂具有1个以上且13个以下的氧亚乙基(

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】可成为淀粉样蛋白球体(ASPD)的替代物的
β
淀粉样蛋白(A
β
)的交联体、以及ASPD的分析


[0001]本公开涉及β淀粉样蛋白(Aβ)的交联体、可成为淀粉样蛋白球体(ASPD)的替代物的Aβ交联体(交联的Aβ)、以及ASPD的分析。

技术介绍

[0002]淀粉样蛋白球体(amylospheroids(ASPD))是β淀粉样蛋白(Aβ)约30个集合而成的直径为约10～15nm的球状的Aβ集合体，其是被认为在引起阿尔茨海默病的神经细胞死亡的方面发挥重要作用的结构体。
[0003]ASPD作为显示强的神经毒性的体外(in vitro)合成的Aβ集合体(即合成ASPD)而被分离出(非专利文献1)。制作了针对该合成ASPD特异性抗体(专利文献1和2)，使用该抗体从阿尔茨海默病的人患者的脑中实际分离出在生物体内形成的ASPD(即天然ASPD)(非专利文献1)。
[0004]天然ASPD及合成ASPD同样地选择性地诱发成熟神经细胞发生细胞死亡。发现该神经细胞死亡中的ASPD的靶是对神经的生存和功能发挥极为重要的作用的突触蛋白“Na
+
、K
+
‑
ATPase泵的α3亚单元(以下称为NAKα3)”，已清楚NAKα3的功能因ASPD的结合而降低，神经细胞过度兴奋而发生神经细胞死亡(专利文献3、非专利文献2)。
[0005]阿尔茨海默病中与临床症状最相关的是神经细胞脱落。已清楚可见神经细胞脱落的阿尔茨海默病患者的大脑皮质中的天然ASPD量与阿尔茨海默病的重症度相关地增加，并且几乎未见神经细胞脱落的阿尔茨海默病患者的小脑中的天然ASPD量仅微量存在(非专利文献3)。因此，认为淀粉样蛋白球体在阿尔茨海默病发病的不可逆阶段中发挥重要的作用。此外，从路易体痴呆患者的脑中也检测到天然ASPD(非专利文献3)，认为对于路易体痴呆而言，ASPD也在其发病中发挥重要的作用。
[0006]被认为与天然ASPD等价的合成ASPD可以通过缓慢搅拌含有Aβ的液体来制造(非专利文献1、专利文献4)。
[0007]另外，被认为与天然ASPD等价的细胞分泌型ASPD样结构体例如可以从表达特定的APP蛋白的CHO细胞分泌，可以从该CHO细胞的培养上清液得到(专利文献5)。
[0008]现有技术文献
[0009]专利文献
[0010]专利文献1：WO2006/016644
[0011]专利文献2：WO2009/057664
[0012]专利文献3：WO2013/099806
[0013]专利文献4：WO2013/094614
[0014]专利文献5：WO2017/179646
[0015]非专利文献
[0016]非专利文献1：Hoshi et al.,Spherical aggregates ofβ
‑
amyloid
(amylospheroid)show high neurotoxicity and activate tau protein kinase I/glycogen synthase kinase
‑
3β,PNAS May 27,2003vol.100no.11 6370
‑
6375
[0017]非专利文献2：Ohnishi et al.,Na,K
‑
ATPaseα3is a death target of Alzheimer patient amyloid
‑
βassembly,PNAS August 11,2015vol.112no.32E4465
‑
E4474
[0018]非专利文献3：Noguchi et al.,Isolation and characterization of patient
‑
derived,toxic,high mass amyloid beta
‑
protein(Abeta)assembly from Alzheimer disease brains,J Biol Chem.2009Nov 20；284(47)：32895
‑
905

技术实现思路

[0019]专利技术所要解决的课题
[0020]如上所述，淀粉样蛋白球体(ASPD)在阿尔茨海默病或路易体痴呆中发挥重要的作用。对于ASPD参与的疾病的预防、诊断、治疗等而言，对对象(患者)的生物试样中的ASPD进行分析的必要性提高。
[0021]另外，在开发出以ASPD为靶的治疗药时，为了其伴随诊断而需要ASPD的分析。
[0022]在对物质进行分析(包括测定)的情况下，通常需要标准物质(标准品)。标准物质例如用于制作校准或标准曲线。天然ASPD、合成ASPD以及细胞分泌型ASPD样结构体可以作为ASPD分析的标准物质使用。
[0023]另一方面，作为诊断试剂盒的标准物质，期望能够稳定制造、保管稳定性优异且制造成本低。天然ASPD、合成ASPD以及细胞分泌型ASPD样结构体作为用于分析ASPD的试剂盒的标准物质，从制造的容易性、保管稳定性、制造成本等观点出发，存在问题。
[0024]因此，本公开在一个方式中，提供可成为ASPD的替代物的物质、或者在ASPD的分析中可成为ASPD的标准物质的物质。
[0025]另外，本公开在另一方式中，提供一种能够对生物试样、例如血液、脑脊髓液中的ASPD进行分析的方法。
[0026]用于解决课题的手段
[0027]本公开在一个方式中涉及一种对ASPD特异性抗体与ASPD发生竞争的物质，其是Aβ通过交联剂交联而成的物质，所述交联剂是间隔臂长度为以上且以下的交联剂、或作为间隔臂具有1个以上且13个以下的氧亚乙基(
‑
CH2CH2O
‑
)和/或氧亚丙基(
‑
CH2CH2CH2O
‑
)的交联剂。
[0028]本公开在另一方式中涉及一种Aβ的交联体，其是Aβ通过间隔臂长度为以上且以下的交联剂、或作为间隔臂具有1个以上且13个以下的氧亚乙基和/或氧亚丙基的交联剂交联而成的。
[0029]本公开在另一方式中涉及一种ASPD的分析方法，其包含下述工序：
[0030](1)使有可能含有ASPD的生物体来源的试样与结合于不溶性载体的、能够与ASPD结合的抗体(第一抗体)接触，在含有ASPD的情况下使ASPD与第一抗体结合的工序，以及
[0031](2)使抗ASPD单克隆抗体(第二抗体)与在工序(1)中已结合于第一抗体的ASPD反应的工序；
[0032]其中，第一抗体为人源化抗ASPD单克隆抗体huASD2、或单克隆抗体BAN50a，第二抗体为抗ASPD单克隆抗体mASD3或其标记化抗体。
[0033]专利技术效果
[0034]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种对淀粉样蛋白球体特异性抗体与淀粉样蛋白球体发生竞争的物质，其是β淀粉样蛋白通过交联剂交联而成的物质，其中，将所述淀粉样蛋白球体记为ASPD，将所述β淀粉样蛋白记为Aβ，所述交联剂是间隔臂长度为以上且以下的交联剂、或作为间隔臂具有1个以上且13个以下的氧亚乙基即
‑
CH2CH2O
‑
和/或氧亚丙基即
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CH2CH2CH2O
‑
的交联剂。2.一种Aβ的交联体，其是Aβ通过间隔臂长度为以上且以下的交联剂、或作为间隔臂具有1个以上且13个以下的氧亚乙基即
‑
CH2CH2O
‑
和/或氧亚丙基即
‑
CH2CH2CH2O
‑
的交联剂交联而成的。3.一种用于分析ASPD的试剂盒，其包含权利要求1所述的物质或权利要求2所述的交联体、和抗ASPD抗体。4.权利要求1所述的物质或权利要求2所述的交联体在ASPD分析中作为标准物质的用途。5.权利要求1所述的物质或权利要求2所述的交联体在伴随ASPD的蓄积的疾病的诊断中的用途。6.根据权利要求5所述的用途，其中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：星美奈子，荒井由江，町田清隆，
申请(专利权)人：公益财团法人神户医疗产业都市推进机构，
类型：发明
国别省市：