本发明专利技术的单核细胞分离装置具有：从存储有血液试样的容器(100)的底面注入离心分离介质的注入装置(210)、使从底面侧起依次层叠有离心分离介质和血液试样的容器(100)离心分离的离心分离装置(300)、检测离心分离后存在于单核细胞层的凝血块的检测装置(400)、除去检测出的凝血块的除去装置(220)、采集单核细胞的采集装置(230)。此外，本发明专利技术的单核细胞分离方法具有与本发明专利技术的单核细胞分离装置的各部件构成要素相对应的注入工序、离心分离工序、检测工序、除去工序、采集工序。
Monocyte Separation Device and Monocyte Separation Method
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】单核细胞分离装置及单核细胞分离方法
本专利技术涉及单核细胞分离装置及单核细胞分离方法。
技术介绍
近年来，开始了一种细胞治疗，是通过采集缺血性疾病患者的骨髄液，用比重离心法分离存在于骨髄液中的单核细胞，将分离出的单核细胞移植到缺血的部分或血管内，由此促进血管再生。使用比重离心法从骨髄液中分离出单核细胞的目的，是要除去骨髄液中含有的粒细胞及红细胞，认为通过除去这些细胞可以提升细胞治疗的治疗效果。另一方面，由于骨髄液极其容易凝固，因此从患者身上采集骨髄液时，即使充分使用了抗凝血药，也很难完全防止凝血块的形成。凝血块指的是，纤维蛋白聚集形成网状结构，红细胞在此汇集而产生的物质，凝血块的主成分是纤维蛋白、血小板及红细胞。使用骨髄细胞进行治疗时，凝血块大多会妨碍治疗，因此，例如在对白血病患者进行非亲缘骨髄细胞移植时，会采集500ml以上的骨髄液，首先通过孔径不同的3种骨髄移植用滤网，除去凝血块，然后通过比重离心法分离出存在于骨髄液中的单核细胞。有文献提出，对于四肢缺血患者，使用自身骨髄液进行再生治疗会促进血管再生(非专利文献1)，但与白血病患者的非亲缘骨髄细胞移植同样地采集500ml以上的骨髄液，通过孔径不同的3种骨髄移植滤网除去凝血块，然后使用细胞分离机器，通过比重离心法分离出存在于骨髄液中的单核细胞，移植给患者。此外，有文献提出，对于脑梗塞患者，使用自身骨髄液进行再生治疗会促进神经功能恢复(非专利文献2)，但较之于白血病患者和四肢缺血患者，采集的骨髓液较少，为25ml或50ml，在细胞培养处理中心内手工分离单核细胞，并且手工除去混入含有单核细胞的层中的凝血块后，移植给患者。另外，较之于四肢缺血患者，脑梗塞患者使用较少量骨髄液的理由，是因为即使少量也可期待充分的效果(非专利文献3)、以及大量采集骨髄造成的血压下降可能会引起脑梗塞症状恶化。此外，若在进行较少量的骨髄液的分离提纯时使用滤网除去凝血块，则滤网部分的容量损失较多，骨髄液量会显著减少，因此难以使用滤网。与我们相同，在手工分离骨髄单核细胞并给予心肌梗塞患者的试验中，显示出了细胞移植的有效性(非专利文献4)，但是也有文献报告，使用了没有凝血块除去功能的细胞分离机器所分离出的细胞的临床试验中，没有确认到其有效性(非专利文献5)。但是，在细胞培养处理中心内手工分离单核细胞，不仅其操作繁琐，而且细胞培养处理中心的建立及维持需要耗费很大的费用。因此，除了现有的机器以外，也有如专利文献1地设计出无需细胞培养处理中心的骨髄单核细胞的分离装置，但是没有除去凝血块的功能。现有技术文献专利文献专利文献1：国际专利公开WO2011/001936非专利文献非专利文献1：Taguchietal.EurJVascEndovascSurg.2003Mar；25(3):276-8非专利文献2：Taguchietal.StemCellsDev.2015Oct1；24(19):2207-18非专利文献3：Uemuraetal.CurrVascPharmacol.2012May；10(3):285-8.非专利文献4：SchachingerVNEnglJMed.2006Sep21；355(12):1210-21非专利文献5：TraverseJH,JAMA.2012Dec12；308(22):2380-9.
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术鉴于所涉及的问题点而作，目的在于提供一种源自含有红细胞等的凝血块的细胞难以混入到所获取的单核细胞成分中的单核细胞分离装置及单核细胞分离方法。用以解决课题的方法本专利技术涉及的单核细胞分离装置，具有：从存储有血液试样的容器的底面注入离心分离介质的注入装置、使从底面侧起依次层叠有离心分离介质和血液试样的容器离心分离的离心分离装置、检测离心分离后存在于骨髄单核细胞层的凝血块的检测装置、除去检测出的凝血块的除去装置、和采集骨髄单核细胞的采集装置。此外，本专利技术涉及的单核细胞分离方法，具有：从存储有血液试样的容器的底面注入离心分离介质的注入工序、使从底面侧起依次层叠有离心分离介质和血液试样的容器离心分离的离心分离工序、检测离心分离后存在于单核细胞层的凝血块的检测工序、除去检测出的凝血块的除去工序、采集单核细胞的采集工序。专利技术的效果根据本专利技术，源自含有红细胞等的凝血块的细胞难以混入到分离获取到的单核细胞成分中。附图说明[图1]图1是本实施方式涉及的单核细胞分离装置的外观图。[图2]图2是说明凝血块拍摄装置的概念图，其中，(A)是说明侧部拍摄装置的图，(B)是说明上部拍摄装置的图。[图3]图3是从将血液试样存储于容器后至管嘴开口端移动到容器底部为止的工序的说明图。[图4]图4是从向容器底部注入离心分离介质开始至离心分离结束为止的工序的说明图。[图5]图5是从开始吸取血浆至吸取结束为止的工序的说明图。[图6]图6是从开始除去存在于单核细胞层的上部的凝血块至凝血块的除去结束为止的工序的说明图。[图7]图7是从开始采集单核细胞层至采集结束为止的工序的说明图。[图8]图8是Atrophyindex(萎缩指数)的测定方法的说明图。[图9]图9是显示通过本实施例涉及的方法分离出的骨髄单核细胞的缺血障碍抑制效果的图。[图10]图10是显示给予通过本实施例涉及的方法分离出的骨髄单核细胞的大脑皮质功能恢复促进效果的图。符号说明10血浆层20单核细胞层30离心分离介质40红细胞层50血液试样90凝血块100容器210注入装置220除去装置230采集装置300离心分离装置400检测装置410上部拍摄装置420侧部拍摄装置900单核细胞分离装置具体实施方式以下参照附图具体说明本专利技术的实施方式，但该实施方式是为了使本专利技术的原理容易理解，本专利技术的范围不限定于下述的实施方式，本领域技术人员将以下实施方式的构成进行适当置换后的其他实施方式也包含于本专利技术的范围内。如图1所示，本实施方式涉及的单核细胞分离装置900具有：从存储有血液试样的容器100的底面注入离心分离介质的注入装置210、使从底面侧起依次层叠有离心分离介质和血液试样的容器100进行离心分离的离心分离装置300、检测离心分离后存在于单核细胞层的凝血块的检测装置400、除去检测出的凝血块的除去装置220、和采集单核细胞的采集装置230。容器100例如是玻璃或塑料制的离心管。血液试样并无特别限定，例如为骨髄液。骨髄液例如可以通过将脊椎动物(包括人)麻醉(局部麻醉或全身麻醉)，用针刺骨，用注射器吸取而进行采集。骨可举出例如大腿骨、胸骨、形成骨盆的髋骨等，但不限定于这些。注入离心分离介质的注入装置210具备：与未图示的离心分离介质供给装置连接、可以向容器100内注入离心分离介质的管嘴；使该管嘴的开口端向存储有血液试样的容器100的底面移动的未图示的移动装置。离心分离介质供给装置可以采用公知的液体供给装置，例如由收纳离心分离介质的槽、送液注射器、流路、电磁阀等构成。离心分离介质并无特别限定，可以使用例如Percoll(注册商标)、Lymphoprep(注册商标)等作为密度梯度形成用而市售的介质，此外，也可以使用Ficoll-Paque(注册商标)和Nycoprep(注册商标)等，但优选Ficoll-PaquePREMIUM(Ficoll是注册商标)。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种单核细胞分离装置，具有：从存储有血液试样的容器(100)的底面注入离心分离介质的注入装置(210)，使从底面侧起依次层叠有离心分离介质和血液试样的容器(100)离心分离的离心分离装置(300)，检测离心分离后存在于单核细胞层的凝血块的检测装置(400)，除去检测出的凝血块的除去装置(220)，采集单核细胞的采集装置(230)。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.01.27 JP 2017-0127421.一种单核细胞分离装置，具有：从存储有血液试样的容器(100)的底面注入离心分离介质的注入装置(210)，使从底面侧起依次层叠有离心分离介质和血液试样的容器(100)离心分离的离心分离装置(300)，检测离心分离后存在于单核细胞层的凝血块的检测装置(400)，除去检测出的凝血块的除去装置(220)，采集单核细胞的采集装置(230)。2.根据权利要求1所述的单核细胞分离装置，其特征在于，所述检测装置(400)具有：从铅直上方方向拍摄容器(100)内的单核细胞层的上部拍摄装置(410)，以及从水平方向拍摄容器(100)内的单核细胞层的侧部拍摄装置(420)。3.根据权利要求1或2所述的单核细胞分离装置，其特征在于，将所述凝血块近似为旋转椭球体的形状时的赤道半径或极半径中的任意一个在5mm以上时，所述检测装置(400)将其检测出为凝血块除去对象。4.根据权利要求1至3中任意一...
【专利技术属性】
技术研发人员：田口明彦，新纳由纪子，津村尚史，森田健一，
申请(专利权)人：公益财团法人神户医疗产业都市推进机构，
类型：发明
国别省市：日本,JP
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