一种疱疹病毒糖蛋白gE重组蛋白、疫苗、制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种水痘

【技术实现步骤摘要】
一种疱疹病毒糖蛋白gE重组蛋白、疫苗、制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种水痘
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带状疱疹病毒糖蛋白gE重组蛋白、疫苗、制备方法和其应用。

技术介绍

[0002]水痘
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带状疱疹病毒(varicella
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zoster virus，VZV)又称3型人疱疹病毒(human herpesvirus3，HHV
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3)，它与1型和2型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1and 2，HSV
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1and HSV
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2)同属于人α
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疱疹病毒。VZV主要由四层结构组成，由内至外依次为：双链病毒DNA所组成的圆杆状病毒核心；由162个壳粒构成的直径约为100nm二十面体对称结构，即核衣壳；覆盖在核衣壳外侧，由蛋白质及酶类组成的一层无定型物质，亦称作皮层(tugement)；最外层为囊膜，呈典型脂质双分子层结构，上有大量突起，完整病毒颗粒呈圆形亦或多角形，直径为120～300nm。
[0003]VZV具有严格的宿主特异性，仅感染人类。在机体内，不同组织感染VZV会造成不同结果，同时引起不同的临床表型。VZV的初发感染多从上呼吸道粘膜上皮细胞开始，其子代病毒可传播至扁桃体和上呼吸道局部淋巴结，同时感染T细胞，并随循环系统传播至身体不同位点，引起全身弥散性的皮疹——水痘(varicella)。带状疱疹还会诱发其他的并发症，包括脑膜脑炎、脊髓炎、颅神经麻痹、血管病变、角膜炎、视网膜病、溃疡、肝炎、胰腺炎等(Gershon et al.,2015)。
[0004]带状疱疹发病非常痛苦，多见于成年人，尤其是大于60岁的老年人群更易发病。随着年龄的增加，老年人群的带状疱疹发病几率也逐步增加，同时相关并发症的发生率也随着年龄的增长而增加。儿童和年轻人也可能出现带状疱疹，但通常其病症较轻，并发症风险较低。每年带状疱疹的发生率约为3/1000。由带状疱疹引起的疼痛可致残，持续数月甚至数年，严重影响老年人的生活质量。抗病毒疗法可有效针对于带状疱疹，能够限制病毒复制，并减少疼痛、病症持续时间、并发症风险，不过无法根治带状疱疹及减缓带状疱疹后遗神经痛(Amlie
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Lefond and Gilden,2016)。因此疫苗接种是控制老年人带状疱疹发病和其并发症的有效手段。
[0005]现有上市或处于临床研究的重组带状疱疹疫苗，都是利用哺乳动物细胞制备的水痘
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带状疱疹病毒的糖蛋白gE，而利用哺乳动物细胞制备疫苗，存在诸多问题，如培养工艺繁琐，成本高，培养后获得的细胞成分复杂，纯化步骤多，不利于大规模生产等。由于gE为糖蛋白，现有技术研究中未能明确糖基化对蛋白功能的影响，以及该蛋白作为抗原激发人体免疫响应时糖基化程度的贡献，致使研究者优先选择糖基化修饰能力更好的哺乳动物细胞生产该蛋白，但目前积累的研究结果表明带状疱疹发病的主要因素是机体针对VZV的细胞免疫响应的减弱，因此有效的抗原成分主要以T细胞表位多肽为主，糖基化修饰对蛋白激发人体细胞免疫响应的影响较小。因此，哺乳动物细胞并不利于构建高水平表达具有较高免疫原性的gE蛋白的表达系统。因此，亟需开发新的表达系统，能够高表达具有较高免疫原性的gE蛋白抗原。

技术实现思路

[0006]在现有技术的基础上，本专利技术为了克服现有技术中存在的诸多缺陷(如表达产量低，纯化困难、成本高等)，提供了一种成本低廉、稳定、高效的可在细菌中直接可溶性表达疱疹病毒gE蛋白的方法。为了实现高效和可控地表达所需蛋白，本专利技术构建了gE蛋白多核苷酸编码序列，重组表达载体，重组工程菌，优化了重组gE蛋白的重组表达方法。本专利技术方法利用的是细菌表达系统，所述细菌表达系统具有培养成本低廉、工艺放大简便等优势，更有助于疱疹病毒疫苗的开发。
[0007]本专利技术一方面是提供一种用于编码gE蛋白的多核苷酸，所述多核苷酸的序列如SEQID NO：1所示或与SEQ ID NO：1具有90％及以上同一性。
[0008]本专利技术另一方面是提供一种重组表达载体，所述重组表达载体中含有如上所述的多核苷酸。
[0009]本专利技术另一方面是提供一种重组工程菌，所述重组工程菌中含有或者整合有如上所述的重组表达载体。
[0010]本专利技术另一方面是提供一种表达系统，包括如上所述的重组工程菌，所述重组工程菌中含有或者整合有如上所述的重组表达载体。
[0011]本专利技术另一方面是提供一种制备gE蛋白的方法，包括如下步骤：构建整合有或者含有如上所述的多核苷酸的重组工程菌，培养，收集菌体，纯化，即可获得所述gE蛋白。具体地，所述方法包括：
[0012]1)构建上述gE蛋白的重组表达载体；
[0013]2)将上述重组表达载体转化至细菌中构建重组工程菌；
[0014]3)验证重组工程菌，获得正确构建的目的重组工程菌；
[0015]4)在特定条件下培养目的重组工程菌，收集培养菌体，破碎菌体获得裂解液，分离纯化裂解液，并进行重组gE蛋白的纯化，得到纯化的所述gE蛋白。
[0016]本专利技术另一方面是提供一种gE蛋白，采用如上所述的用于编码gE蛋白的多核苷酸编码获得或采用如上所述的制备gE蛋白的方法获得。
[0017]本专利技术另一方面是提供如上所述的用于编码gE蛋白的多核苷酸，重组表达载体，重组工程菌，表达系统，或gE蛋白在制备预防和/或治疗由疱疹病毒感染引起的疾病的药物，或在制备针对疱疹病毒的抗体，或在制备疱疹病毒疫苗和/或诊断试剂中的应用。
[0018]本专利技术另一方面是提供一种疫苗佐剂组合物，所述疫苗佐剂组合物包括脂质体和皂苷，所述皂苷和脂质体的体积比为3
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6：40
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60。
[0019]本专利技术另一方面是提供如上所述的疫苗佐剂组合物在制备疱疹病毒疫苗中的应用。
[0020]本专利技术另一方面是提供一种疱疹病毒疫苗，包含如上所述的用于编码gE蛋白的多核苷酸，重组表达载体，重组工程菌，表达系统，或gE蛋白中的一种或几种。
[0021]优选地，所述疱疹病毒疫苗包括gE蛋白、脂质体和皂苷，所述gE蛋白、脂质体和皂苷的用量关系为10
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20μg的gE蛋白、30
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60μL皂苷和400
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600μL脂质体。
[0022]本专利技术所述的应用、方法或制备的疫苗制品中，所述疱疹病毒为水痘
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带状疱疹病毒VZV、1型单纯疱疹病毒HSV
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1、2型单纯疱疹病毒HSV
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2中的一种或几种；优选为水痘
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带状疱疹病毒VZV。
[0023]如上所述，本专利技术具有以下有益效果：
[0024]本专利技术提供了一种疱疹病毒尤其是水痘
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带状疱疹病毒糖蛋白gE的重组表达策略，涉及gE蛋白编码基因的优化筛选、重组表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于编码gE蛋白的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO：1所示或与SEQ ID NO：1具有90％及以上同一性。2.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体中含有如权利要求1所述的多核苷酸；和/或，所述重组表达载体由pET28a
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gE构建获得。3.一种重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌中含有或者整合有如权利要求2所述的重组表达载体。4.如权利要求3所述的重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌为重组细菌；其中，所述细菌选自大肠杆菌、卵形拟杆菌、空肠弯曲菌、腐生葡萄球菌、粪肠球菌、多形拟杆菌、普通拟杆菌、单形拟杆菌、干酪乳杆菌、脆弱拟杆菌、鲁氏不动杆菌、具核梭杆菌、乔氏拟杆菌、拟南芥拟杆菌、鼠李糖乳杆菌、马赛拟杆菌、粪副拟杆菌、梭杆菌、finegoldii拟杆菌和短双歧杆菌中的一种或几种；优选的，所述重组工程菌为重组大肠杆菌。5.如权利要求4所述的重组工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌选自BL21、BW25113、JM109、MG1655、DH5a、TOP10、HB101、BLR、C43(DE3)、C41(DE3)或TB1中的一种或几种，所述BL21选自BL21(DE2)、BL21(DE3)、BL21 star(DE3)或BL21(DE3)PlysS；优选地，所述大肠杆菌为BL21(DE2)。6.一种表达系统，其特征在于，包括如权利要求3～5之任一项所述的重组工程菌。7.一种制备gE蛋白的方法，其特征在于，包括如下...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏慧，傅文彬，茅倩宇，王圆，
申请(专利权)人：上海博唯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：