预防和/或治疗疱疹病毒的截短的疫苗抗原肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种针对带状疱疹的疫苗。本发明专利技术采用水痘

【技术实现步骤摘要】
预防和/或治疗疱疹病毒的截短的疫苗抗原肽及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种生物
，特别涉及一种用于预防和/或治疗疱疹病毒的截短的疫苗抗原肽及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]水痘
‑
带状疱疹病毒(varicella
‑
zoster virus，VZV)又称3型人疱疹病毒(human herpesvirus3，HHV
‑
3)，它与1型和2型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1 and 2，HSV
‑
1 andHSV
‑
2)同属于人α
‑
疱疹病毒。VZV主要由四层结构组成，由内至外依次为：双链病毒DNA 所组成的圆杆状病毒核心；由162个壳粒构成的直径约为100nm二十面体对称结构，即核衣壳；覆盖在核衣壳外侧，由蛋白质及酶类组成的一层无定型物质，亦称作皮层(tugement)；最外层为囊膜，呈典型脂质双分子层结构，上有大量突起，完整病毒颗粒呈圆形亦或多角形，直径为120～300nm。
[0003]在机体内，不同组织感染VZV会造成不同结果，同时引起不同的临床表型。VZV的初发感染多从上呼吸道粘膜上皮细胞开始，其子代病毒可传播至扁桃体和上呼吸道局部淋巴结，同时感染T细胞，并随循环系统传播至身体不同位点，引起全身弥散性的皮疹——水痘 (varicella)。带状疱疹易复发且还会诱发其他的并发症，包括脑膜脑炎、脊髓炎、颅神经麻痹、血管病变、角膜炎、视网膜病、溃疡、肝炎、胰腺炎等(Gershon et al.,2015)。抗病毒疗法可有效针对于带状疱疹，能够限制病毒复制，并减少疼痛、病症持续时间、并发症风险，不过无法根治带状疱疹及减缓带状疱疹后遗神经痛(Amlie
‑
Lefond and Gilden,2016)。
[0004]因此疫苗接种是控制老年人带状疱疹发病和其并发症的有效手段。现有上市或处于临床研究的重组带状疱疹疫苗，都是利用哺乳动物细胞制备的水痘
‑
带状疱疹病毒的糖蛋白gE，而利用哺乳动物细胞制备疫苗，存在诸多问题，如培养工艺繁琐，成本高，培养后获得的细胞成分复杂，纯化步骤多，不利于大规模生产等。由于gE为糖蛋白，现有技术研究中未能明确糖基化对蛋白功能的影响，以及该蛋白作为抗原激发人体免疫响应时糖基化程度的贡献，致使研究者优先选择糖基化能力更好的哺乳动物细胞生产该蛋白，但目前积累的研究结果表明带状疱疹发病的主要因素是机体针对VZV的细胞免疫响应的减弱，因此有效的抗原成分主要以T细胞表位多肽为主。因此，哺乳动物细胞并不是构建高表达具有较高免疫原性的gE 蛋白的最优表达系统。因此，亟需开发新的表达系统，能够高表达具有较高免疫原性的gE 蛋白抗原。

技术实现思路

[0005]为克服现有技术中存在的诸多缺陷(如表达产量低，纯化困难、成本高等)，本专利技术提供了一种成本低廉、稳定、高效的可在真菌(如酵母)中直接可溶性表达水痘
‑
带状疱疹病毒 gE蛋白的方法。gE蛋白虽然是糖蛋白，但糖基化修饰结构对带状疱疹疫苗的抗原表位影响有限，原因在于带状疱疹发病的主要因素是机体针对VZV的细胞免疫响应的减弱，因此有
效的抗原成分主要以T细胞表位多肽为主，在不考虑糖基化修饰的前提下，本专利技术通过优化编码基因，筛选适宜的宿主细胞和培养条件等，通过酵母表达系统可以高效表达gE蛋白，用于VZV疫苗开发。现有技术中还未有关于gE蛋白的立体结构的解析，本专利技术通过对该gE 蛋白的分段截短表达和对应截短蛋白免疫原性的解析，阐述gE蛋白作为带状疱疹疫苗抗原的关键区域，有助于进一步理解gE蛋白的结构和功能。
[0006]本专利技术提供了一种用于预防和/或治疗疱疹病毒的疫苗。
[0007]本专利技术一方面提供了一组疱疹病毒免疫原，所述疱疹病毒免疫原为氨基酸序列如SEQID NO.1所示蛋白的截短多肽或其保守性变异多肽，即，所述疱疹病毒免疫原通过改造水痘
‑ꢀ
带状疱疹病毒中如SEQ ID NO.1所示的gE蛋白获得，具体为gE蛋白被截短为不同长度的包含N端或C端的多肽。
[0008]进一步地，所述疱疹病毒免疫原选自以下任一：包含截短或未截短的gE1‑
188
、gE
31
‑
188
、 gE1‑
208
、gE
31
‑
208
、gE
189
‑
546
、gE
169
‑
546
、gE
31
‑
168
、gE
31
‑
336
及gE
337
‑
538
或其保守性变异蛋白，所述 gE1‑
188
、gE
31
‑
188
、gE1‑
208
、gE
31
‑
208
、gE
189
‑
546
、gE
169
‑
546
、gE
31
‑
168
、gE
31
‑
336
及gE
337
‑
538
的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、 SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9及SEQ ID NO.10所示。
[0009]优选地，所述疱疹病毒免疫原包含截短或未截短的gE31
‑
336或其保守性变异蛋白以及截短或未截短的gE337
‑
538或其保守性变异蛋白，或截短或未截短的gE31
‑
336或其保守性变异蛋白，或截短或未截短的gE337
‑
538或其保守性变异蛋白；即所述疱疹病毒免疫原既包含截短或未截短的gE31
‑
336或其保守性变异蛋白，也包含截短或未截短的gE337
‑
538或其保守性变异蛋白，或所述疱疹病毒免疫原仅包含截短或未截短的gE31
‑
336或其保守性变异蛋白，或所述疱疹病毒免疫原仅包含截短或未截短的gE337
‑
538或其保守性变异蛋白。
[0010]本专利技术另一方面提供了一种用于编码所述疱疹病毒免疫原的多核苷酸。
[0011]本专利技术另一方面提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体中含有如上所述的多核苷酸。
[0012]本专利技术另一方面提供了一种重组工程菌，所述重组工程菌中含有或者整合有如上所述的重组表达载体。
[0013]所述重组工程菌为重组细菌或重组真菌；
[001本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种疱疹病毒免疫原，其特征在于，选自以下任一：a.包含第一gE蛋白片段与第二gE蛋白片段，所述第一gE蛋白片段包含截短或未截短的gE31
‑
336或其保守性变异多肽，所述第二gE蛋白片段包含截短或未截短的gE337
‑
538或其保守性变异多肽；b.包含第一gE蛋白片段，所述第一gE蛋白片段包含截短或未截短的gE31
‑
336或其保守性变异多肽；c.包含第二gE蛋白片段，所述第二gE蛋白片段包含gE337
‑
538或其保守性变异多肽；其中，所述gE31
‑
336的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述gE337
‑
538的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。2.如权利要求1所述的疱疹病毒免疫原，其特征在于，所述第一gE蛋白片段的氨基酸残基数为222
‑
348个，所述第二gE蛋白片段的氨基酸残基数为160
‑
286个。3.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1所述的疱疹病毒免疫原中的第一gE蛋白片段和/或第二gE蛋白片段，或所述多核苷酸选自SEQ ID NO.30和/或SEQ ID NO.31。4.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体中含有如权利要求3所述的多核苷酸和/或，所述重组表达载体由pPICZαB构建获得，所述重组表达载体中包含第一gE蛋白片段和/或第二gE蛋白片段。5.一种重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌中含有或者整合有如权利要求4所述的重组表达载体。6.如权利要求5所述的重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌为重组细菌或重组真菌；其中，所述细菌选自大肠杆菌、卵形拟杆菌、空肠弯曲菌、腐生葡萄球菌、粪肠球菌、多形拟杆菌、普通拟杆菌、单形拟杆菌、干酪乳杆菌、脆弱拟杆菌、鲁氏不动杆菌、具核梭杆菌、乔氏拟杆菌、拟南芥拟杆菌、鼠李糖乳杆菌、马赛拟杆菌、粪副拟杆菌、梭杆菌、finegoldii拟杆菌和短双歧杆菌中的一种或几种；其中，所述真菌选自酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、多形汉逊酵母(Ogataea angusta)...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏慧，傅文彬，蔡威特，沈琼，
申请(专利权)人：上海博唯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：