本发明专利技术提供一种重组表达载体系统、重组工程菌及其制备方法和用途，所述重组表达载体系统至少包含两个重组表达载体，每个所述重组表达载体上含有一个或多个核酸表达盒，每个核酸表达盒包含目的基因，以及与目的基因可操作地连接的启动子，每个所述目的基因分别独立选自HPV6 L1、HPV11 L1、HPV16 L1、HPV18 L1、HPV31 L1、HPV33 L1、HPV35 L1、HPV39 L1、HPV45 L1、HPV51 L1、HPV52 L1、HPV53 L1、HPV56 L1、HPV58 L1、HPV59 L1、HPV66 L1或HPV68 L1中的一种，且所有目的基因都互不相同。将重组表达载体系统转化至工程菌可以获得重组工程菌。重组工程菌可以同时表达多种HPV L1蛋白，用来制备HPV疫苗。苗。
【技术实现步骤摘要】
重组表达载体系统、重组工程菌及其制备方法和用途
[0001]本专利技术涉及一种生物工程技术，特别是涉及一种重组表达载体系统、重组工程菌及其制备方法和用途。
技术介绍
[0002]人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)主要感染人上皮细胞，引起上皮细胞损伤，从而导致包括生殖器疣、宫颈癌等一系列疾病，近年来，越来越多的研究表明HPV感染还可以引起其他肛门与生殖器相关癌症，如阴道癌、肛门癌、阴茎癌等，甚至还与口咽癌有关。其中关注度最高、HPV致病机理最清楚的是宫颈癌，作为世界第三大女性癌症，宫颈癌每年夺走25万人的生命，而99％以上的宫颈癌都是由于HPV感染引起的。
[0003]HPV的主要传播途径为性传播，其进入人体的主要机理与上皮细胞的微损伤有关。
[0004]目前已发现至少两百多种基因型的HPV，根据其感染后是否具有致癌性，可分为高危型和低危型两种，其中高危型HPV主要与各种恶性肿瘤相关，低危型HPV主要引起尖锐湿疣、呼吸系统刺瘤等良性肿瘤。虽然在不同的国家和地区的HPV流行病学数据有一定的差异，但总体来讲，目前世界范围内流行程度最广的高危型HPV型别为HPV16和HPV18，这两种型别与70％的宫颈癌有关，其他流行程度较高的的高危型HPV型别为HPV31、HPV33、HPV45、HPV52、HPV58等。低危型HPV的主要流行型别为HPV6和HPV11。基于以上的流行病学趋势，目前已有三种HPV预防性疫苗上市，分别是葛兰素史克的(HPV16/18)，默克公司的(HPV6/11/16/18)和9(HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58)，默克的两种疫苗可同时预防高危型和低危型的感染，极大程度地降低相应型别引起的宫颈癌发病率和尖锐湿疣发病率。
[0005]HPV属双链DNA病毒，环状基因组全长约7900～8000bp，编码7个非结构蛋白E1～E7和2个衣壳蛋白L1、L2。其中L1蛋白为主要衣壳蛋白，360拷贝的L1蛋白组成72个五聚体，形成T＝7的病毒粒子；L2蛋白为次要衣壳蛋白，不承担结构骨架的功能，但与受体结合后的病毒DNA释放有关。HPV主要的中和表位存在于L1蛋白上，基于这些中和表位的中和抗体可有效预防HPV的感染。
[0006]基于多种重组表达系统的研究已证明单独表达L1蛋白即可形成构象接近于天然病毒粒子的病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)，这些HPV-VLP保留了天然HPV的中和表位，同时缺少病毒复制必须的DNA，其安全性和可靠性已通过基于这些VLP的HPV预防性疫苗和9得到了充分的证明。是分别在杆状病毒系统内分别表达HPV16 L1和HPV18 L1，重组表达产物自组装成为VLP，两种重组表达产物分别经纯化、制剂后混匀制成疫苗制剂；是在酿酒酵母系统内分别表达HPV6L1、HPV11 L1、HPV16 L1、HPV18 L1，同样也是将四种重组表达产物分别纯化、制剂后再混匀成为最终的产品。默克公司的第二代HPV预防性疫苗9，是在的基础上增加了5个高危型HPV型别——HPV31、HPV33、HPV45、HPV52和HPV58，加上Gardasil原有的4价，成为保护
范围更广的9价疫苗。但无论是2价的4价的和最新的9价9疫苗，都需要为每个价型单独准备一套工艺，将单价的半成品制剂混匀后才得到多价疫苗制剂，这势必导致工艺复杂、繁琐，每增加一个价型都需要增加相应的投入，包括工程菌株的制备、相应的发酵、纯化、制剂等工艺的设备和人员投入，成本高、可控性差。
技术实现思路
[0007]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种重组表达载体系统、重组工程菌及其制备方法和用途，用于解决现有技术中制备HPV抗体工艺复杂、繁琐、成本高、可控性差的问题。
[0008]本专利技术的第一方面提供了一种重组表达载体系统，所述重组表达载体系统至少包含两个重组表达载体，每个所述重组表达载体上含有一个或多个核酸表达盒，每个核酸表达盒包含目的基因，以及与目的基因可操作地连接的启动子，每个所述目的基因分别独立选自HPV6 L1、HPV11 L1、HPV16 L1、HPV18 L1、HPV31 L1、HPV33 L1、HPV35 L1、HPV39 L1、HPV45 L1、HPV51 L1、HPV52 L1、HPV53 L1、HPV56 L1、HPV58 L1、HPV59 L1、HPV66 L1或HPV68 L1中的一种，且所有目的基因都互不相同。
[0009]所述多个可以是两个。所述多个可以是三个。所述多个可以是四个。
[0010]一种实施方式中，所述HPV6 L1如SEQ ID NO：1所示。
[0011]一种实施方式中，所述HPV11 L1如SEQ ID NO：2所示。
[0012]一种实施方式中，所述HPV16 L1如SEQ ID NO：3所示。
[0013]一种实施方式中，所述HPV18 L1如SEQ ID NO：4所示。
[0014]一种实施方式中，所述HPV31 L1的序列为AEI60965.1。
[0015]一种实施方式中，所述HPV33 L1的序列为AAA46964.1。
[0016]一种实施方式中，所述HPV35 L1的序列为ARQ82609.1。
[0017]一种实施方式中，所述HPV39 L1的序列为AGU90477.1。
[0018]一种实施方式中，所述HPV45 L1的序列为CAA52578.1。
[0019]一种实施方式中，所述HPV51 L1的序列为AMK51256.1。
[0020]一种实施方式中，所述HPV52 L1的序列为ACX32362.1。
[0021]一种实施方式中，所述HPV53 L1的序列为ABU54083.1。
[0022]一种实施方式中，所述HPV56 L1的序列为ABO76795.1。
[0023]一种实施方式中，所述HPV58 L1的序列为ACL12325.1。
[0024]一种实施方式中，所述HPV59 L1的序列为ALT54908.1。
[0025]一种实施方式中，所述HPV66 L1的序列为ABO76872.1。
[0026]一种实施方式中，所述HPV68L1的序列为AGU90680.1。
[0027]HPV6 L1 DNA编码序列(SEQ ID NO：1)
[0028]atgtggagaccatctgactcgactgtctacgttcctccacctaacccagtctctaaggttgtggctaccgacgcctacgtgactagaaccaacatcttctaccacgcatcgtcctctagattgctggccgttggacatccttacttctccatcaagagagccaacaaaaccgtcgtgccaaaggtttctggctaccagtatagagtcttcaaggtggttctgcctgaccctaacaag本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种重组表达载体系统，其特征在于：所述重组表达载体系统至少包含两个重组表达载体，每个所述重组表达载体上含有一个或多个核酸表达盒，每个核酸表达盒包含目的基因，以及与目的基因可操作地连接的启动子，每个所述目的基因分别独立选自HPV6 L1、HPV11 L1、HPV16 L1、HPV18 L1、HPV31 L1、HPV33 L1、HPV35 L1、HPV39 L1、HPV45 L1、HPV51 L1、HPV52 L1、HPV53 L1、HPV56 L1、HPV58 L1、HPV59 L1、HPV66 L1或HPV68 L1中的一种，且所有目的基因都互不相同。2.根据权利要求1所述的重组表达载体系统，其特征在于：每个所述重组表达载体还包含一个或者多个含有选择物标记基因的核酸表达盒。3.一种重组工程菌，其特征在于：所述重组工程菌包含如权利要求1所述的重组表达载体系统。4.根据权利要求3所述的重组工程菌，其特征在于：所述重组工程菌是酵母，优选地，所述酵母选自酿酒酵母、多形汉逊酵母、巴斯德毕赤酵母、脆壁克鲁维氏酵母、乳酸克鲁维氏酵母、或栗酒裂殖酵母中的任一种或多种。5.一种制备如权利要求1或2所述的重组表达载体系统的方法，所述方法为通过改造原始质粒获得，具体包括以下步骤：将目的基因的启动子和终止序列分别替换两个原始质粒的启动子和终止序列；再将目的基因分别插入启动子和终止序列之间。6.据权利要求5所述的重组表达载体系统的制备方法，所述方法为：将质粒pPICZB改造获得，具体包括以下步骤：(1)质粒pMMZ的构建：采用第一启动子MOX插入片段和第一终止序列AOXTT分别替换质粒中的启动子和终止序列，获得质粒pMOXZ-1；采用第二启动子MOX插入片段和第二终止序列AOXTT分别替换质粒中的启动子和终止序列，获得质粒pMOXZ-2；连接质粒pMOXZ-1和质粒pMOXZ-2；(2)替换质粒上的选择标记物基因，获得与步骤(1)中的质粒具有不...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁珊，潘婷，姬美彤，
申请(专利权)人：上海博唯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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