一种装载IL-33的DNA水凝胶的制备方法及其产品与应用技术

本发明专利技术公开一种装载IL

【技术实现步骤摘要】
一种装载IL
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33的DNA水凝胶的制备方法及其产品与应用


[0001]本专利技术属于药物制剂领域，特别涉及一种装载IL
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33的DNA水凝胶的制备方法及其产品与应用。

技术介绍

[0002]皮肤及其深度组织受到损伤后出现离断或缺损会导致伤口的形成，伤口的恢复愈合过程一般称为伤口愈合或创伤愈合，通过伤口处各种组织的再生和肉芽组织增生、瘢痕组织形成的复杂组合，表现出各种过程的协同作用实现。伤口愈合也就是伤口再生修复的过程，伤口愈合的基本过程包括急性炎症期、细胞增生期、瘢痕形成期和表皮及其他组织再生期。但有些伤口会由于其自身的特殊性，使得伤口持续处于急性炎症期并加重炎症过程，如褥疮/压疮和烧伤/烫伤愈合不良；或作为糖尿病、血管功能不全和免疫缺陷等疾病的并发症等都会导致伤口愈合困难，出现伤口慢性溃疡和继发坏疽，严重时甚至会危及患者的生命。现目前缺少针对伤口愈合困难行之有效的治疗方法，导致伤口愈合困难引起的一系列并发症的发病率和死亡率居高不下，对患者的身心健康造成影响，并给其带来了巨大的经济负担，还给国家和社会造成了巨大的医疗负担。
[0003]水凝胶是一种高吸水高保水材料，用途较广，在多种
中均有应用，其本身所具有高抗感染力、吸收伤口渗出液、保持伤口处湿润平衡、允许气体交换及装载、保护和输送生物活性分子的能力，其中通过单链DNA聚合形成的三维网络为物理交联的DNA水凝胶，其没有采用任何化学连接物或是化学修饰，并且具有低细胞毒性、免疫原性和良好的生物相容性等特点，因此DNA水凝胶作为理想伤口敷料之一使用的效果更为理想。
[0004]目前的研究指出，细胞因子免疫治疗在调节免疫系统中具有重要意义，特别是在促进糖尿病等疾病引起的并发症而导致的伤口愈合困难方面发挥了重要作用。其中白介素
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33(IL
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33)被认为能够促进伤口愈合，主要是利用其通过诱导M2巨噬细胞极化和调节性T细胞的增殖来抗炎的特性实现。但是由于白介素
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33存在半衰期短和稳定性差的特点导致其在用于皮肤创伤的治疗中效果不尽人如意，限制了其在伤口愈合治疗中的效果。

技术实现思路

[0005]鉴于此，本专利技术目的在于提供一种装载IL
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33的DNA水凝胶的制备方法及其产品与应用，其制备所采用的工艺简单，其产品应用于伤口愈合中时具有缓释、抗氧化及自我降解能力，该产品还能够特别针对于治疗糖尿病等伤口愈合困难的情况。
[0006]专利技术人通过长期的探索和尝试，以及多次的实验和努力，不断的改革创新，为解决以上技术问题，本专利技术提供的技术方案是，提供一种装载白介素IL
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33的DNA水凝胶的制备方法，包括如下步骤：
[0007]S1)备料：包括重组小鼠IL
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33和如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4及SEQ ID No.5所示的5种单链DNA；
[0008]S2)溶解：将S1)中所述的5种单链DNA各自分别溶解于PBS缓冲液中；
[0009]S3)构建单体：将S2)中通过如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的单链DNA分别溶解于PBS缓冲液得到的溶解液混合后得到的混合液依次通过恒温处理、降温处理进行反应得到Y单体，将S2)中通过如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的单链DNA分别溶解于PBS缓冲液得到的溶解液混合后得到的混合液依次通过恒温处理、降温处理进行反应得到L单体；
[0010]S4)孵育和混合：将S3)中得到的Y单体与重组小鼠IL
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33混合孵育后得到产物A，再将S3)中得到的L单体与重组小鼠IL
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33混合孵育后得到产物B，然后将产物A和产物B混合。
[0011]根据本专利技术一种装载白介素IL
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33的DNA水凝胶的制备方法的一个具体实施方式，所述S2)中的PBS缓冲液为1xPBS缓冲液。
[0012]根据本专利技术一种装载白介素IL
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33的DNA水凝胶的制备方法的一个优选实施方式，所述PBS缓冲液中添加有1～2mmol/L的MgCl2，所述PBS缓冲液的pH为7.2～8.0，S2)中将所述的5种单链DNA各自分别溶解于PBS缓冲液后其最终浓度均为1～2mmol/L。
[0013]根据本专利技术一种装载白介素IL
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33的DNA水凝胶的制备方法的一个进一步的实施方式，所述S3)中的恒温处理均为：将混合液在95℃的条件下静置1～3min；所述S3)中的降温处理均为：将恒温处理后的混合液在95℃的条件下，每0.06s降低0.1℃，直至温度降低至25℃，然后将得到的Y单体和L单体进行贮存，贮存温度为4～8℃。
[0014]根据本专利技术一种装载白介素IL
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33的DNA水凝胶的制备方法的一个进一步的实施方式，所述通过如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的单链DNA分别溶解于PBS缓冲液得到的溶解液混合后得到的混合液的浓度为250～300μmol/L，所述通过如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的单链DNA分别溶解于PBS缓冲液得到的溶解液混合后得到的混合液的浓度为375～500μmol/L。
[0015]根据本专利技术一种装载白介素IL
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33的DNA水凝胶的制备方法的一个进一步的实施方式，通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法或液相色谱
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质谱联用的测定方法对S3)中构建的Y单体或/和L单体进行处理，用于判断Y单体或/和L单体是否构建成功。
[0016]根据本专利技术一种装载白介素IL
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33的DNA水凝胶的制备方法的一个进一步的实施方式，所述S3)中Y单体的浓度与L单体的浓度比为2:3，所述S4)中Y单体与小鼠IL
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33的体积比为24:1，L单体与小鼠IL
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33的体积比为24:1。
[0017]根据本专利技术一种装载白介素IL
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33的DNA水凝胶的制备方法的一个进一步的实施方式，所述S1)中重组小鼠IL
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33的浓度为0.5～1ng/μL。
[0018]根据本专利技术一种装载白介素IL
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33的DNA水凝胶的制备方法的一个进一步的实施方式，所述S4)中在20～30℃的条件下将产物A和产物B通过摇床振荡1min～2min混合。
[0019]本专利技术还提供一种装载IL
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33的DNA水凝胶，所述装载IL
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33的DNA水凝胶通过上述的制备方法得到。
[0020]本专利技术还提供一种装载IL
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33的DNA水凝胶在伤口治疗中的应用，所述装载IL
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33的DNA水凝胶通过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种装载IL
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33的DNA水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1)备料：包括重组小鼠IL
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33和如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4及SEQ ID No.5所示的5种单链DNA；S2)溶解：将S1)中所述的5种单链DNA各自分别溶解于PBS缓冲液中；S3)构建单体：将S2)中通过如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的单链DNA分别溶解于PBS缓冲液得到的溶解液混合后得到的混合液依次通过恒温处理、降温处理进行反应得到Y单体，将S2)中通过如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的单链DNA分别溶解于PBS缓冲液得到的溶解液混合后得到的混合液依次通过恒温处理、降温处理进行反应得到L单体；S4)孵育和混合：将S3)中得到的Y单体与重组小鼠IL
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33混合孵育后得到产物A，再将S3)中得到的L单体与重组小鼠IL
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33混合孵育后得到产物B，然后将产物A和产物B混合。2.根据权利要求1所述的一种装载IL
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33的DNA水凝胶的制备方法，其特征在于，所述S2)中的PBS缓冲液为1xPBS缓冲液。3.根据权利要求2所述的一种装载IL
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33的DNA水凝胶的制备方法，其特征在于，所述PBS缓冲液中添加有1～2mmol/L的MgCl2，所述PBS缓冲液的pH为7.2～8.0，S2)中将所述的5种单链DNA各自分别溶解于PBS缓冲液后其最终浓度均为1～2mmol/L。4.根据权利要求1所述的一种装载IL
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33的DNA水凝胶的制备方法，其特征在于，所述S3)中的恒温处理均为：将混合液在95℃的条件下静置1～3min；所述S3)中的降温处理均为：将恒温处理后的混合液在95℃的条件下，每0.06s降低0.1℃，直至温度降低至25℃，然后将得到的Y单体和L单体进行贮存，贮存...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑晓峰，王成世，李威，王政昊，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：