液体药物组合物中高度稳定的具有治疗活性的阿地白介素制造技术

本公开涉及阿地白介素/SDS聚集体的液体药物组合物及其在治疗自身免疫性疾病、炎性病症、基因治疗和癌症中的用途。还描述了制备所述组合物的方法。述组合物的方法。述组合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
液体药物组合物中高度稳定的具有治疗活性的阿地白介素
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请是2019年6月13日提交的国际专利申请PCT/US19/37012的部分继续申请，其要求2018年6月13日提交的美国临时申请号62/684,288(其以引用的方式整体并入本文)在35U.S.C.
§
119(e)下的优先权的权益。


[0003]本公开涉及包含在溶液中稳定的阿地白介素/SDS聚集体的新药物组合物及其制药用途。

技术介绍

[0004]白介素2(IL
‑
2)是调节T细胞和NK细胞的存活、增殖和分化的关键细胞因子(1)。这些生物学活性的发现导致IL
‑
2在1994年被批准用于转移性肾癌的癌症免疫治疗的临床应用，1998年被批准用于转移性黑素瘤的临床应用。此后，IL
‑
2成为推动从患者的肿瘤中提取的T淋巴细胞(肿瘤浸润淋巴细胞，TIL)的体外扩增的试剂，所述T淋巴细胞随后转移回患者以避免未来癌症的发展(2)。最近，IL
‑
2也已用于扩增用抗原特异性T细胞受体转导的T细胞(3)或用于癌症治疗的用嵌合抗原受体(CAR)转导的T细胞(4)。由于发现IL
‑
2在免疫应答中具有以下双重功能，最近出现了IL
‑
2医学应用的新领域：a)众所周知的作为炎性应答的活化剂的活性，以及b)作为炎性应答的下调因子诱导调节性T细胞(CD4
+
Foxp3
+
Treg细胞)扩增(5)。可通过两种具有高或低的亲和力的IL
‑
2受体的存在以及它们的特定细胞分布来解释此种看似矛盾的双重性(5)。此种IL
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2的双重性导致了如下所述的相反的疗法：a)如在最初的癌症治疗中一样以高剂量使用IL
‑
2来刺激免疫应答，以及b)如在自身免疫或炎性病症的治疗中一样以低剂量使用IL
‑
2来抑制过度或异常的免疫应答。
[0005]当前的IL
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2的多数临床应用(如果不是全部的话)是使用称为阿地白介素(des
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ala
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2ser125)(PROLEUKIN
TM
)的天然IL
‑
2的重组突变形式进行的。美国专利4,604,377教导了如何制备在无菌、稳定的冻干配制物中始终稳定(consistent)的重组IL
‑
2(包括阿地白介素)的药物组合物，其中重组IL
‑
2与提供体积的水溶性载体(例如甘露醇)和足以确保重组IL
‑
2在水中的溶解度的量的十二烷基硫酸钠混合。所述配制物适合在水性注射剂中复水，所述注射剂用于肠胃外施用，在人患者中稳定和耐受良好。另一方面，最近在欧洲专利EP 1,688,146B中公开了制备PROLEUKIN
TM
产品的过程的详细描述。
[0006]专利技术简述
[0007]因此，本公开的某些实施方式提供了关于细胞的分离和有效刺激的方法和组合物，以及这些细胞在治疗和/或预防免疫介导的疾病、癌症、病毒感染或由病原体介导的感染、神经失调等的方法。
[0008]在某些实施方式中，本专利技术的一个方面是制备在用于对需要IL
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2免疫疗法的患者进行肠胃外施用的液体药物组合物中高度稳定的阿地白介素的方法，所述方法一般包括以下步骤：a)发酵用经工程化以高表达阿地白介素基因的表达载体转染的大肠杆菌(E.coli)
菌株，b)破碎细菌，c)收集含有阿地白介素聚集体的包涵体，d)使用SDS清洁剂溶解阿地白介素聚集体，e)用氧化性化合物(例如氯化铜)氧化，f)陶瓷羟基磷灰石色谱，g)用有机腈(例如乙腈)稀释，h)C4柱HPLC色谱，i)透析过滤(diafiltration)，以及j)过滤灭菌。
[0009]在某些实施方式中，组合物包含在药学上适合的水性载剂中的阿地白介素，用于给需要IL
‑
2免疫疗法的患者肠胃外施用，其中所述阿地白介素已使用本公开的制备方法制备，其确保阿地白介素在药物液体组合物中稳定达至少一年。用本公开的阿地白介素的组合物可制备在一个或多个预填充注射器中始终稳定的药物产品，每个注射器含有适合给定治疗的剂量，包装在盒中。该产品在注射至患者前不需要任何操作，避免了例如微生物或其它可能的污染。另一方面，可有利地引入本专利技术的稳定的液体阿地白介素制剂并将其均匀分布在通常在医学中用于输注、输液或临床营养的肠胃外溶液中。最近，开发出了由给定药物加阿地白介素组成的治疗(例如CEPLENE
TM
(组胺二盐酸盐)与低剂量的proleukin联合施用以维持急性髓性白血病患者的首次缓解)。对于此类治疗，本公开的稳定的液体阿地白介素制剂可用作精制独特的组合制剂或组合试剂盒的基础。Proleukin也已用于诱导待用于细胞治疗程序的易感细胞的体外增殖(5)。对于这些程序，为了避免可以导致微生物污染的操作并且也为了获得阿地白介素在细胞培养物中的快速且均匀的分布，以低浓度配制的本公开的稳定的液体阿地白介素可以是非常有利的。这些仅为很少的实例，然而，本领域技术人员可以容易地想到本公开的稳定的液体阿地白介素制剂的其它应用。实际上，IL
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2制剂可用于刺激NK细胞、T细胞、修饰的T细胞、修饰的NK细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)以及所有其它在其膜上表达IL
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2受体的细胞，并且可找到其作为不同医学治疗中的药物的应用。在某些实施方式中，阿地白介素用作用于涉及在其细胞膜中表达IL
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2受体的细胞(包括NK细胞、T细胞、树突状细胞、非淋巴细胞、细胞系、转化细胞或它们的组合)的治疗的药物。
[0010]在某些实施方式中，药物组合物包含范围为约0.001mg
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3mg/mL的IL
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2(例如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2)，约0.0001mg/ml至约10mg/mL的SDS、非离子渗透剂、pH 7
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8的磷酸盐缓冲液或它们的组合。在某些实施方式中，药物组合物由范围为约0.001mg
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3mg/mL的IL
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2，范围为约0.0001mg/ml至约10mg/mL的十二烷基磺酸钠(SDS)、非离子渗透剂、pH 7
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8的磷酸盐缓冲液组成。在某些实施方式中，渗透剂包括甘露醇、山梨糖醇、木糖醇或pH 7
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8的磷酸盐缓冲液。在某些实施方式中，组合物可包含IL
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2蛋白(例如SEQ ID NO：1)、加缓冲液、抗氧化剂(例如抗坏血酸)、低分子量多肽(例如具有少于10个氨基酸的多肽)、蛋白质、氨基酸、碳水化合物(例如葡萄糖、蔗糖或糊精)、螯合剂(例如EDTA)、谷胱甘肽和/或其它稳定剂、赋形剂和/或防腐剂。组合物可配制成液体或冻干本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.药物组合物，其包含约范围为0.001mg
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3mg/mL的IL
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2、约0.0001mg/ml至约10mg/mL的十二烷基硫酸钠(SDS)、非离子渗透剂或它们的组合。2.权利要求1的药物组合物，其中所述IL
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2包含SEQ ID NO：1或其变体。3.权利要求1的药物组合物，其中所述渗透剂包含甘露醇、山梨糖醇、木糖醇或pH 7
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8的磷酸盐缓冲液。4.一种在体内诱导调节性T细胞的增殖的方法，所述方法包括给有需要的对象施用治疗有效量的阿地白介素，其中所述调节性T细胞与对照相比增加，体内诱导调节性T细胞的增殖。5.权利要求4的方法，其中所述阿地白介素包含在药物组合物中。6.权利要求4的方法，其中所述阿地白介素包含SEQ ID NO：1或其变体。7.权利要求1的方法，其中通过体外生物学活性测定测量，所述阿地白介素在所述药物液体组合物中保持稳定达至少一年。8.权利要求1的方法，其中通过动态光散射测量，所述阿地白介素包含所述液体组合物中的稳定的阿地白介素/SDS聚集体分布达至少一年，所述分布在约4nm
‑
18nm范围内，具有约8nm处的峰。9.权利要求1的方法，其中在人癌症的动物模型中测量，所述阿地白介素在所述液体组合物中具有稳定的治疗活性达至少一年。10.一种治疗有需要的对象的自身免疫性疾病或病症的方法，包括：给有需要的对象施用包含治疗有效量的阿地白介素的药物组合物，其中所述调节性T细胞与对照相比增加，体内诱导调节性T细胞的增殖。11.权利要求10的方法，其中通过体外生物学活性测定测量，所述阿地白介素在所述药物液体组合物中保持稳定达至少一年。12.权利要求6的方法，其中通过动态光散射测量，所述阿地白介素包含所述液体组合物中的稳定的阿地白介素/SDS聚集体分布达至少一年，所述分布在约4nm
‑
18nm范围内，具有约8nm处的峰。13.权利要求6的方法，其中在人癌症的动物模型中测量，所述阿地白介素在所述液体组合物中具有稳定的治疗活性达至少一年。14.一种调节有需要的对象中与疾病或病症相关的免疫应答的方法，包括：给有需要的对象施用包含治疗有效量的阿地白介素的药物组合物，其中所述调节性T细胞与对照相比增加，体内诱导调节性T细胞的增殖。15.权利要求10的方法，其中通过体外生物学活性测定测量，所述阿地白介素在所述药物液体组合物中保持稳定达至少一年。16.权利要求10的方法，其中通过动态光散射测量，所述阿地白介素包含所述液体组合物中的稳定的阿地白介素/SDS聚集体分布达至少一年，所述分布在约4nm
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18nm范围内，具有约8nm处的峰。17.权利要求10的方法，其中在人癌症的动物模型中测量，所述阿地白介素在所述液体组合物中具有稳定的治疗活性达至少一年。18.权利要求10的方法，其中所述疾病或病症包括：自身免疫性疾病、癌症、炎症、病毒感染、细菌感染、神经退行性疾病以及它们的组合。
19.一种生产阿地白介素的方法，所述阿地白介素适合于制备包含药物水性载剂中的阿地白介素的组合物，所述方法包括：将用编码阿地白介素基因的表达载体转染的细菌细胞进行发酵；破碎所述细菌细胞；收集含有阿地白介素的包涵体；通过清洁剂使所述包涵体溶解，然后进行氧化和第一色谱；用有机腈稀释并且进行第二色谱；对所述阿地白介素进行透析过滤和灭菌。20.权利要求19的方法，其中所述细菌细胞是大肠杆菌(Escherichia coli)细菌细胞。21.权利要求19的方法，其中所述清洁剂是十二烷基硫酸钠(SDS)。22.权利要求19的方法，其中所述氧化是用氧化性化合物进行的。23.权利要求19的方法，其中所述第一色谱是陶瓷羟基磷灰石色谱。24.权利要求19的方法，其中所述第二色谱是高效液相色谱(HPLC)。25.权利要求24的方法，其中所述HPLC是C4柱HPLC色谱。26.权利要求1的方法，其中通过体外生物学活性测定测量，所述阿地白介素在所述药物液体组合物中保持稳定达至少一年。27.权利要求19的方法，其中通过动态光散射测量，所述阿地白介素包含所述液体组合物中的稳定的阿地白介素/SDS聚集体分布达至少一年，所述分布在约4nm
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18nm范围内，具有约8...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：阿姆塞特制药公司，
类型：发明
国别省市：