包括蛋白酶激活治疗剂的组合物和方法技术

本公开涉及包含一个或多于一个肿瘤相关蛋白酶切割位点的掩蔽治疗剂的胶原结合修饰工程。在暴露于肿瘤微环境中的肿瘤相关蛋白酶后，多肽被切割，这暴露了治疗剂，减少了与全身施用相关的脱靶副作用和毒性。因此，本公开的方面涉及包含通过接头结合至掩蔽剂的治疗剂的多肽，其中所述接头包含一个或多于一个肿瘤相关蛋白酶切割位点，并且其中所述掩蔽剂阻断治疗剂与其治疗靶点的连接，并且其中多肽可操作地结合至胶原结合结构域或肿瘤靶向剂。作地结合至胶原结合结构域或肿瘤靶向剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包括蛋白酶激活治疗剂的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年7月25日递交的美国临时专利申请第62/878574号的优先权，其内容通过引用整体并入本文。

技术介绍

[0003]使用白介素(IL)
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12的细胞因子癌症免疫疗法在小鼠和人类中都显示出强的抗肿瘤效果。然而，由于其严重的毒性，一些IL12临床试验已终止或失败。至今IL12尚未被批准用于临床。免疫疗法用于激活免疫应答，正因如此，副作用通常来自健康器官中的药物作用。本领域需要降低治疗毒性的策略。

技术实现思路

[0004]本公开涉及包含一个或多于一个肿瘤相关蛋白酶切割位点的掩蔽治疗剂的胶原结合修饰工程。在暴露于肿瘤微环境中的肿瘤相关蛋白酶后，多肽被切割，这暴露了治疗剂，减少了与全身施用相关的脱靶副作用和毒性。因此，本公开的方面涉及包含通过接头结合至掩蔽剂的治疗剂的多肽，其中所述接头包含一个或多于一个肿瘤相关蛋白酶切割位点，并且其中所述掩蔽剂阻断治疗剂与其治疗靶点的连接，并且其中多肽可操作地结合至胶原结合结构域或肿瘤靶向剂。
[0005]本公开的其他方面涉及包含通过接头连接至掩蔽剂的细胞因子的多肽，其中所述接头包含一个或多于一个肿瘤相关蛋白酶切割位点，并且其中掩蔽剂包含特异性结合至细胞因子的细胞因子受体多肽或其片段。掩蔽剂指阻断治疗剂与至少一种结合伴侣结合的分子。在一些实施方案中，治疗剂包括抗体，并且结合伴侣包括抗原。在一些实施方案中，治疗剂包括细胞因子，并且结合伴侣包括结合受体多肽。
>[0006]其他方面涉及包含本公开的多肽的组合物。另外的方面涉及编码本公开的多肽的核酸和包含本公开的核酸和/或多肽的宿主细胞。还提供了用于制备多肽的方法，其包括在宿主细胞中表达本公开的核酸并分离表达的多肽。其他方面涉及用于治疗癌症的方法，其包括将本公开的多肽或组合物施用于有需要的对象，例如患有癌症的对象。
[0007]在一些实施方案中，细胞因子包括白介素
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12(IL12)，并且其中掩蔽剂包括白介素12受体(IL12R)多肽或其IL12结合片段。在一些实施方案中，IL12包含p35和p40亚基中的一个或两个。在一些实施方案中，IL12包含通过二硫键连接的p35和p40亚基。在一些实施方案中，IL12包含通过肽接头连接的p35和p40亚基。在一些实施方案中，IL12R多肽或片段包含白介素12受体β1(IL12Rβ1)或其片段。在一些实施方案中，IL12R多肽或片段包含白介素12受体β2(IL12Rβ2)或其片段。在一些实施方案中，IL12Rβ1多肽包含纤连蛋白结构域D1和D2中的一个或两个。
[0008]在一些实施方案中，掩蔽剂与IL12的p35亚基的N端融合，并且其中包含肿瘤相关蛋白酶切割位点的接头位于掩蔽剂与IL12的p35亚基之间。在一些实施方案中，掩蔽剂与IL12的p35亚基的C端融合，并且其中包含肿瘤相关蛋白酶切割位点的接头位于掩蔽剂与
IL12的p35亚基之间。在一些实施方案中，掩蔽剂与IL12的p40亚基的C端融合，并且其中接头位于掩蔽剂与IL12的p40亚基之间。在一些实施方案中，掩蔽剂与IL12的p40亚基的N端融合，并且其中接头位于掩蔽剂与IL12的p40亚基之间。在一些实施方案中，细胞因子包括白介素
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2(IL
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2)，并且掩蔽剂包括白介素2受体α亚基(IL
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2Rα)、白介素2受体β亚基(IL
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2Rβ)、白介素2受体γ亚基(IL
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2Rγ)、片段或其片段的组合。在一些实施方案中，细胞因子包括干扰素γ(IFNγ)，并且掩蔽剂包括干扰素γ受体1(IFNγR1)、干扰素γ受体2(IFNγR2)、片段或其片段的组合。
[0009]在一些实施方案中，多肽包含至少两个肿瘤相关蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，多肽包含至少、至多或恰好1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、或8个肿瘤相关蛋白酶切割位点，或其中可推导的任何范围。在一些实施方案中，肿瘤相关蛋白酶切割位点包括uPA、基质金属蛋白酶、或凝血酶切割位点。在一些实施方案中，肿瘤相关蛋白酶切割位点包括至少一个本文所述的肿瘤相关蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，肿瘤相关蛋白酶切割位点包括具有SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:109至SEQ ID NO:190之一的氨基酸的切割位点。在一些实施方案中，多肽包含至少两个不同的肿瘤相关蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，多肽包含至少2个、3个或4个不同的肿瘤相关蛋白酶切割位点，或其中可推导的任何范围。在一些实施方案中，多肽包含至少2个相同的肿瘤相关蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，多肽包含至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、或8个相同的蛋白酶切割位点，或其中可推导的任何范围。在包含多于一个蛋白酶切割位点的实施方案中，蛋白酶切割位点可以是邻近的或具有插入的氨基酸。在一些实施方案中，至少、至多或恰好0个、1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、或20个氨基酸或其中可推导的任何范围，将一个肿瘤相关蛋白酶切割位点与另一个肿瘤相关蛋白酶切割位点分开。
[0010]在一些实施方案中，细胞因子包括抗炎细胞因子。在一些实施方案中，细胞因子包括促炎细胞因子。
[0011]在一些实施方案中，多肽与肿瘤靶向剂缀合。在一些实施方案中，肿瘤靶向剂包括抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包括基质靶向抗体或其基质结合片段。在一些实施方案中，抗体或结合片段特异性结合至纤连蛋白、纤连蛋白的选择性剪接结构域、胶原、生腱蛋白、骨膜蛋白、黏结蛋白聚糖、蛋白聚糖或肿瘤基质细胞特异性抗原。在一些实施方案中，抗体或结合片段特异性结合至纤连蛋白的额外结构域A(EDA)或额外结构域B(EDB)。在一些实施方案中，肿瘤靶向剂包括Fab，其特异性结合至包含额外结构域A(EDA)的纤连蛋白的选择性剪接结构域。在一些实施方案中，肿瘤靶向剂包含特异性结合至肿瘤相关抗原的抗体或抗原结合片段。其他肿瘤靶向剂包括列于US20140294723A1、WO2001062298A2、WO1997045544A1、WO2006119897A2、WO2006050834A2、WO2008120101A2、WO2010078916A1中引用的那些，其通过引用并入本文。
[0012]在一些实施方案中，肿瘤靶向剂包含胶原结合结构域。在一些实施方案中，多肽包含至少两个胶原结合结构域。在一些实施方案中，多肽包含至少2个、3个、4个、5个或6个胶原结合结构域。在一些实施方案中，多肽包含来自饰胶蛋白聚糖或血管性假血友病因子(VWF)的胶原结合结构域。
[0013]在一些实施方案中，多肽还包含与多肽缀合的血清蛋白。在一些本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含通过接头连接至掩蔽剂的细胞因子的多肽，其中接头包含一个或多于一个肿瘤相关蛋白酶切割位点，并且其中掩蔽剂包含特异性结合至细胞因子的细胞因子受体多肽或其片段。2.根据权利要求1所述的多肽，其中细胞因子包含IL12，并且其中掩蔽剂包含IL12R多肽或其IL12结合片段。3.根据权利要求2所述的多肽，其中IL12包含p35和p40亚基中的一个或两个。4.根据权利要求3所述的多肽，其中IL12包含通过二硫键连接的p35和p40亚基。5.根据权利要求3所述的多肽，其中IL12包含通过肽接头连接的p35和p40亚基。6.根据权利要求2至5中任一项所述的多肽，其中IL12R多肽或片段包含L12Rβ1或其片段。7.根据权利要求6所述的多肽，其中IL12Rβ1多肽包含纤连蛋白域D1和D2中的一个或两个。8.根据权利要求2至7中任一项所述的多肽，其中掩蔽剂与IL12的p35亚基的N端融合，并且其中接头在掩蔽剂与IL12的p35亚基之间。9.根据权利要求2至7中任一项所述的多肽，其中掩蔽剂与IL12的p40亚基的C端融合，并且其中接头在掩蔽剂与IL12的p40亚基之间。10.根据权利要求1所述的多肽，其中细胞因子包括IL12，并且掩蔽剂包括IL
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2Rα、IL
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2Rβ、其片段、或片段组合。11.根据权利要求1所述的多肽，其中细胞因子包括IFNγ，并且掩蔽剂包括IFNγR1、IFNγR2、其片段、或片段组合。12.根据权利要求1至11中任一项所述的多肽，其中多肽包含至少两个肿瘤相关蛋白酶切割位点。13.根据权利要求1至12中任一项所述的多肽，其中肿瘤相关蛋白酶切割位点包括uPA、基质金属蛋白酶、或凝血酶切割位点。14.根据权利要求1至13中任一项所述的多肽，其中细胞因子包括促炎性细胞因子。15.根据权利要求1至14中任一项所述的多肽，其中多肽缀合至肿瘤靶向剂。16.根据权利要求16所述的多肽，其中肿瘤靶向剂包括抗体或其抗原结合片段。17.根据权利要求16所述的多肽，其中抗体或抗原结合片段包括基质靶向抗体或其基质结合片段。18.根据权利要求17所述的多肽，其中抗体或结合片段特异性地结合至纤连蛋白、纤连蛋白的选择性剪接结构域、胶原、生腱蛋白、骨膜蛋白、黏结蛋白聚糖、蛋白聚糖或肿瘤基质细胞特异性抗原。19.根据权利要求18所述的多肽，其中抗体或结合片段特异性地结合至纤连蛋白的额外结构域A(EDA)或额外结构域B(EDB)。20.根据权利要求18所述的多肽，其中肿瘤靶向剂包括Fab，所述Fab特异性地结合至包含额外结构域A(EDA)的纤连蛋白的选择性剪接结构域。21.根据权利要求16所述的多肽，其中肿瘤靶向剂包含特异性地结合至肿瘤相关抗原的抗体或其抗原结合片段。22.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰弗里，
申请(专利权)人：芝加哥大学，
类型：发明
国别省市：