嵌合的免疫球蛋白制造技术

本申请涉及抗体工程领域，具体而言，涉及一种嵌合的免疫球蛋白。其由第一多肽和第二多肽融合得到：所述第一多肽包括位于N端的IgG可变区；以及所述第二多肽包括位于C端的IgA CH2

【技术实现步骤摘要】
嵌合的免疫球蛋白


[0001]本申请涉及抗体工程领域，具体而言，涉及一种嵌合的免疫球蛋白。

技术介绍

[0002]免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)由四条多肽链组成，各多肽链之间由数量不等的链间二硫键连接。Ig可呈“Y”字型结构，称为Ig单体，是构成抗体的基本单位。天然Ig分子含有四条异源性多肽链，其中，分子量较大的两条链称为重链(heavy chain，H)，而分子量较小的两条链称为轻链(light chain，L)。同一Ig分子中的两条重链和两条轻链的氨基酸组成完全相同。重链分子量为50 000～75 000，由450～550个氨基酸残基组成。由于重链恒定(CH)区的氨基酸组成和排列顺序不同，其抗原性也不同。据此，可将Ig分为五类(class)，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在这五类中，IgG、IgD、IgE均为单体结构。IgM是由B细胞分泌的一种基本抗体，在分泌形态中则是由五个Y型单体构成的五聚体形式，具有极高的亲和力。IgM的分子量极大，因此在抗原凝集反应中非常有效。IgM是一种多价态抗体。IgA可以单体或二聚体、三聚体或四聚体形式存在。分泌型IgA多以二聚体、三聚体形式存在，也是一种多价态抗体。由于一个单体抗体具有2个抗原结合位点，因此，IgA通常具有4个或6个抗原结合位点，而IgM则具有10或12个抗原结合位点，均为多价态抗体。
[0003]抗体主要由B淋巴细胞合成。每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成多克隆，并合成多种抗体。1975年，英国的科学家Kohler和Milstein合作将已适应于体外培养的小鼠骨髓瘤细胞与绵羊红细胞免疫小鼠脾细胞(B淋巴细胞)进行融合，发现形成的杂交细胞既能在体外无限增殖，又能持续的分泌特异性的抗体，通过克隆化的培养可获得的纯的细胞可以产生单克隆抗体，由此专利技术了单克隆抗体技术。单克隆抗体技术的出现，是免疫学领域的重大突破。到二十世纪八十年代中期，单克隆抗体技术已日臻完善，开始广泛应用于生物医学研究和生物技术以及临床检测和治疗等许多领域。
[0004]随着科学技术进步，体外诊断已经成为临床医学诊断的重要帮手，扮演着医生眼睛的角色。单克隆抗体作为临床医学体外诊断试剂中的核心原材料之一充分发挥其优势。单克隆抗体的特异性强，大大提高了抗原—抗体反应的特异性，减少了和其它物质发生交叉反应的可能性，使试验结果可信度更大。单克隆抗体的均一性和生物活性的单一性，使抗原—抗体反应结果便于控制，利于标准化和规范化。
[0005]免疫诊断试剂是体外诊断试剂的细分领域。免疫诊断(immunodiagnosis)是应用免疫学的理论、技术和方法诊断各种疾病和测定免疫状态。免疫诊断的方法包括放射免疫、酶联免疫、化学发光、荧光层析或胶体金层析等。这些方法的基本原理如下描述。使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性，选择合适的标记物与抗原或抗体通过化学法形成抗原或抗体标记复合物。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和抗原或抗体标记复合物按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最终结合在固相载体上的标记复合物
与标本中受检物质的量成一定的比例。加入与标记复合物反应的底物后，底物被催化变为有色产物。因为有色产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。然而，目前对免疫检测用抗体效价的提升还多依赖于抗体免疫及筛选过程的改进，其效果具有很大的随机性，不能很好地满足检测需要。

技术实现思路

[0006]本申请的第一方面涉及一种免疫球蛋白，其由第一多肽和第二多肽融合得到，其中
[0007]所述第一多肽包括位于N端的IgG可变区；以及
[0008]所述第二多肽包括位于C端的IgA CH2
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CH3区，或IgM CH3
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CH4区。
[0009]本申请的第二方面涉及多聚体，其以如上所述的免疫球蛋白为单体聚合得到。
[0010]本申请的第三方面涉及分离的核酸，其编码如上所述的免疫球蛋白。
[0011]本申请的第四方面涉及载体，其含有如上所述的核酸。
[0012]本申请的第五方面涉及宿主细胞，其含有如上所述的核酸或被如上所述的载体所转化。
[0013]本申请的第六方面涉及一种免疫球蛋白的制备方法，包括表达如上所述的宿主细胞或将上述的第一多肽和第二多肽进行融合表达，及由上述制备方法制备得到的免疫球蛋白。
[0014]本申请的第七方面涉及一种多聚体的制备方法，包括将以如上所述免疫球蛋白的制备方法制备得到的免疫球蛋白作为单体进行聚合，及由上述制备方法制备得到的多聚体。
[0015]本申请的第八方面涉及固相载体，其表面包被有如上所述的多聚体。
[0016]本申请的第九方面涉及含有如上所述的多聚体，或如上所述固相载体的试剂盒或试纸条。
[0017]本申请的第十方面涉及检测抗原的方法，包括用如上所述的多聚体，或如上所述的固相载体与所述抗原接触形成缀合物，并对所述缀合物进行检测；
[0018]所述抗原为能够与所述IgG可变区发生特异性结合的抗原。
[0019]本申请的第十一方面涉及所述的多聚体、固相载体、试剂盒或试纸条在免疫检测中的应用。
[0020]本申请所提供的IgG与IgM/IgA嵌合的免疫球蛋白具有更高的效价，并且当包被于固相时，相比于价态相同的IgG单体，仍然具有更高的效价，因此可广泛应用于检测领域。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本申请具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本申请的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1示出本申请一个实施例中MA
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9G7TB1和MA
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9G7TB2 IgG/IgM杂合重组抗体的电泳结果；
[0023]图2示出本申请一个实施例中3E50TB2杂合重组抗体的电泳结果；
[0024]图3示出本申请一个实施例中5F27TB2杂合重组抗体的电泳结果；
[0025]图4示出本申请一个实施例中21C5TB2杂合重组抗体的电泳结果。
具体实施方式
[0026]现将详细地提供本申请实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本申请。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本申请进行多种修改和变化而不背离本申请的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0027]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫球蛋白，其由第一多肽和第二多肽融合得到：所述第一多肽包括位于N端的IgG可变区；以及所述第二多肽包括位于C端的IgA CH2
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CH3区，或IgM CH3
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CH4区。2.根据权利要求1所述的免疫球蛋白，其中，所述第一多肽中的IgG还具有CH1区；可选的，所述第二多肽中IgA或IgM还具有CH1区；可选的，所述第一多肽还包含IgG的铰链区；可选的，所述第二多肽还包含IgA或IgM的铰链区；可选的，所述第一多肽中IgG还具有CH1
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CH2区；可选的，所述第一多肽中IgG还具有CH1
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CH2
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CH3区；可选的，所述第二多肽中IgM或IgA还具有CH1
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CH2区；可选的，所述IgG为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4；优选的，所述第一多肽和所述第二多肽中的至少一个包含CH1区；优选的，所述第一多肽和所述第二多肽中的至少一个包含铰链区。3.多聚体，其以权利要求1或2所述的免疫球蛋白为单体聚合得到；可选的，所述的多聚体为2、3或4个具有IgA CH2
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CH3区的免疫球蛋白单体聚合得到；或为5个具有IgM CH3
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CH4区的免疫球蛋白单体聚合得到；可选的，所述多聚体还缀合有信号物质。4.分离的核酸，其编码权利要求1或2所述的免疫球蛋白。5.载体，其含有权利要求4所述的核酸。6.宿主细胞，其含有权利要求4所述的核酸或被权利要求5所述的载体所转化。7.一种免疫球蛋白的制备方法，包括表达权利要求6所述的宿主细胞。8.一种免疫球蛋白的制备方法，包括将第一多肽和第二多肽进行融合表达：所述第一多肽包括位于N端的IgG可变区；以及所述第二多肽包括位于C端的IgA CH2
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CH3区，或IgM CH3
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CH4区。9.根据权利要求8所述的制备方法，其中，所述第一多肽中的IgG还具有CH1区；可选的，所述第二多肽中IgA或IgM还具有CH1区；可选的，所述第一多肽还包含IgG的铰链区；可选的，所述第二多肽还...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟媛，钟冬梅，
申请(专利权)人：东莞市朋志生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：