PD-1/CTLA-4结合蛋白及其医药用途制造技术

本公开涉及PD

【技术实现步骤摘要】
PD
‑
1/CTLA
‑
4结合蛋白及其医药用途


[0001]本公开属于生物医药领域，涉及PD
‑
1/CTLA
‑
4结合蛋白及其用于治疗疾病(例如癌症)。

技术介绍

[0002]PD
‑
1(Programmed Cell death
‑
1)属于CD28受体家族，是免疫抑制性受体。PD
‑
1是I型跨膜蛋白，主要表达在活化的B细胞、T细胞和骨髓细胞(Chen等人2013，Nat.Rev.Immunol.13:227
‑
42)，有两种细胞表面的糖蛋白配体，分别是PD
‑
L1和PD
‑
L2。PD
‑
1与PD
‑
L1或PD
‑
L2结合后，会下调T细胞的功能，包括降低T细胞的活化、分化增殖和细胞因子的分泌等。阻断PD
‑
1和PD
‑
L1的相互作用能够逆转免疫抑制，而同时抑制PD
‑
1和PD
‑
L1、PD
‑
L2的作用能够起到协同作用。
[0003]CTLA
‑
4(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4，又称CD152)，是一种具有免疫检查点和下调免疫反应功能的受体蛋白，表达于活化的CD4
+
和CD8
+
T细胞，能够中止激活的T细胞的反应以及介导Treg的抑制功能，因此，CTLA
‑
4抗体或CTLA
‑
4配体可以阻止CTLA
‑
4结合其天然配体，从而阻断CTLA
‑
4转导T细胞负调节信号和增强T细胞对多种抗原的响应性(Margaret K等(2010)，Semin Oncol.37(5):473
‑
484.4)。目前，已有CTLA
‑
4抗体伊匹单抗(ipilimumab，)获批上市治疗黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、间皮瘤、结直肠癌、肝细胞癌。另有tremelimumab、zalifrelimab等CTLA
‑
4抗体正在临床研究中，用于治疗膀胱癌、小细胞肺癌、子宫颈癌肿瘤、血管肉瘤、软组织肉瘤等癌症。
[0004]驼科动物会产生单域抗体，分子量只有12
‑
15kDa，是传统抗体的十分之一。单域抗体含有3个CDR，其中CDR3对亲和力起到主要作用。与人抗体VH相比，单域抗体的CDR3更长，可以形成凸环(bulge loop)结构，能够深入抗原内部，从而更好地结合抗原。此外，单域抗体中FR2的疏水残基被亲水残基取代，水溶性更好，不易形成聚集体。与传统抗体相比，单域抗体具有高结合力、高特异性、高溶解度、高稳定性和高表达量等诸多优点。
[0005]目前，全球范围内针对PD
‑
1的单域抗体均处于早期开发阶段，尚没有靶向PD
‑
1的单域抗体药物上市，也没有针对PD
‑
1/CTLA
‑
4的双抗药物上市，均处于早期开发阶段。本公开提供了能同时结合PD
‑
1和CTLA
‑
4的双特异性抗体，能阻断PD
‑1‑
和CTLA
‑
4介导的免疫系统抑制，以促进免疫系统的激活或继续激活，有效治疗癌症和病原体相关的疾病。

技术实现思路

[0006]本公开提供一种PD
‑
1结合蛋白，更具体的，提供一种PD
‑
1/CTLA
‑
4结合蛋白或PD
‑
1结合蛋白和CTLA
‑
4结合蛋白的联用，及其医药用途。
[0007]PD
‑
1/CTLA
‑
4结合蛋白
[0008]本公开提供了一种PD
‑
1/CTLA
‑
4结合蛋白，其包含特异性结合PD
‑
1的第一抗原结合结构域和特异性结合CTLA
‑
4的第二抗原结合结构域，所述特异性结合PD
‑
1的第一抗原结合结构域包含至少一个免疫球蛋白单一可变结构域，所述免疫球蛋白单一可变结构域包含
三个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中：
[0009]CDR1包含如X
22
KCMG(SEQ ID NO：152)所示的氨基酸序列，其中，X
22
选自N、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R或S，CDR2包含如VVDRFGGTIYAX
25
SVKG(SEQ ID NO：187)所示的氨基酸序列，其中，X
25
选自A或D，CDR3包含如GSYTSA X
23
SCQPDAL(SEQ ID NO：153)所示的氨基酸序列，其中，X
23
选自N、A、E、F、G、H、K、P、Q、R或S；或
[0010]CDR1包含SEQ ID NO：62所示氨基酸序列，CDR2包含X1IDSVGX2TX3YX4X5SVKG(SEQ ID NO：115)所示氨基酸序列，其中，X1选自S或T，X2选自T或A，X3选自D、N或G，X4选自T或A，X5选自N或D，CDR3包含SEQ ID NO：64所示氨基酸序列；或
[0011]CDR1包含SEQ ID NO：81所示氨基酸序列，CDR2包含VVDRX
24
GGX6IYAX7SVKX8(SEQ ID NO：116)所示氨基酸序列，其中，X
24
选自Y或F，X6选自I或T，X7选自A或D，X8选自K或D，CDR3包含GSYTX9X
10
X
11
SCX
12
PDAL(SEQ ID NO：117)所示氨基酸序列，其中，X9选自S或D，X
10
选自A或D，X
11
选自N或G，X
12
选自Q或H；或
[0012]CDR1包含YNX
13
MX
14
(SEQ ID NO：118)所示氨基酸序列，其中，X
13
选自F或Y，X
14
选自S或T，CDR2包含SEQ ID NO：66所示氨基酸序列，CDR3包含SEQ ID NO：67所示氨基酸序列；或
[0013]CDR1包含SEQ ID NO：84所示氨基酸序列，CDR2包含VINTGX
15
NX
16
TYYADSVKG(SEQ ID NO：119)所示氨基酸序列，其中，X
15
选自A或T，X
16
选自S或T，CDR3包含SEQ ID NO：86所示氨基酸序列；或
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.PD
‑
1/CTLA
‑
4结合蛋白，其包含：特异性结合PD
‑
1的第一抗原结合结构域、和特异性结合CTLA
‑
4的第二抗原结合结构域，所述特异性结合PD
‑
1的第一抗原结合结构域包含至少一个免疫球蛋白单一可变结构域，所述免疫球蛋白单一可变结构域包含三个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中：CDR1、CDR2和CDR3分别包含如SEQ ID NO：152、187、153所示的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的PD
‑
1/CTLA
‑
4结合蛋白，所述免疫球蛋白单一可变结构域包含如下的CDR1、CDR2和CDR3：1)CDR1包含如SEQ ID NO：129所示的氨基酸序列，CDR2包含如SEQ ID NO：71或82所示的氨基酸序列，CDR3包含如SEQ ID NO：145所示的氨基酸序列；或2)CDR1包含如SEQ ID NO：129
‑
141任一所示的氨基酸序列，CDR2包含如SEQ ID NO：71或82所示的氨基酸序列，CDR3包含如SEQ ID NO：83所示的氨基酸序列；或3)CDR1包含如SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，CDR2包含如SEQ ID NO：71或82所示的氨基酸序列，CDR3包含如SEQ ID NO：142
‑
151任一所示的氨基酸序列；或4)CDR1包含如SEQ ID NO：132所示的氨基酸序列，CDR2包含如SEQ ID NO：71或82所示的氨基酸序列，CDR3包含如SEQ ID NO：145所示的氨基酸序列；或5)CDR1包含如SEQ ID NO：129所示的氨基酸序列，CDR2包含如SEQ ID NO：71或82所示的氨基酸序列，CDR3包含如SEQ ID NO：146所示的氨基酸序列；或6)CDR1包含如SEQ ID NO：132所示的氨基酸序列，CDR2包含如SEQ ID NO：71或82所示的氨基酸序列，CDR3包含如SEQ ID NO：146所示的氨基酸序列；或7)CDR1包含SEQ ID NO：81所示氨基酸序列，CDR2包含SEQ ID NO：71或82任一所示氨基酸序列，CDR3包含SEQ ID NO：83所示氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的PD
‑
1/CTLA
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王雷，刘钰莹，王宇，陈思萌，张伟，张满，廖成，
申请(专利权)人：北京拓界生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：