用于过继免疫疗法的具有嵌合受体的靶向细胞毒性细胞制造技术

本发明专利技术提供了用于调节用于免疫疗法的免疫效应细胞的特异性和活性的组合物和方法。在一个实施方案中，本发明专利技术提供了一种嵌合抗原受体(CAR)，其中CAR被称为“NKR

【技术实现步骤摘要】
用于过继免疫疗法的具有嵌合受体的靶向细胞毒性细胞
[0001]本申请是申请日为2015年9月17日的、专利技术名称为“用于过继免疫疗法的具有嵌合受体的靶向细胞毒性细胞”的中国专利申请201580060960.X(PCT/US2015/050715)的分案申请。
[0002]相关申请
[0003]本申请要求2014年9月17日提交的PCT申请号PCT/CN2014/086694和2014年11月7日提交的PCT 申请号PCT/CN2014/090578的优先权。这些申请各自的全部内容通过引用并入本文。
[0004]专利技术背景
[0005]使用基因转移技术，T细胞可以被遗传修饰以在其表面上稳定地表达抗体结合结构域，其赋予T细胞特异性，所述特异性独立于主要组织相容性复合体(MHC)所施加的约束。嵌合抗原受体(CAR)代表在T细胞(CART细胞)上表达的合成蛋白，其将抗体的抗原识别片段(例如scFv或单链可变区片段)与CD3
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ζ链的胞内结构域融合。在与表达scFv的同源抗原的靶细胞相互作用时，在T细胞上表达的CAR可以触发导致靶细胞杀伤(也称为靶细胞裂解)的T细胞活化。当与额外的共刺激信号例如CD137或CD28的胞内结构域组合时，这些受体也能够产生增殖。然而，与正常T细胞受体(TCR)应答不同，这种增殖的一些似乎是抗原独立的(Milone et al.,2009,Mol Ther 17(8):1453
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64)。人工受体不完全再现由天然TCR结合到与MHC分子复合的抗原肽所产生的细胞内信号转导(Brocker,2000,Blood 96(5):1999
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2001)。在不存在高水平的细胞因子如IL
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2的情况下过继转移时，信号传导缺陷可以限制CART细胞的长期存活(Lo et al.,2010,Clin CancerRes 16(10):2769
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80)。它们还具有改变的调节，其可能在一些抗癌应用中是有益的(Loskog et al.,2006, Leukemia 20(10):1819
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28)，但是这些调节缺陷也导致了控制它们对也表达抗原(甚至在极低水平)的正常组织的“脱靶”活性的潜在挑战。这些“脱靶”效应是对基于CAR的疗法的严重限制，并且已导致在CAR
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修饰的T细胞的早期I期评估期间可能的死亡(Morgan et al.,2010,Mol Ther 18(4):843
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51)。
[0006]因此，本领域需要用于构建克服当前基于CAR的治疗剂的限制的CAR的替代方法。本专利技术解决了本领域中的这种未满足的需求。
[0007]专利技术概述
[0008]在第一方面，本专利技术的特征在于纯化的或非天然存在的自然杀伤细胞免疫功能受体
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嵌合抗原受体 (NKR
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CAR)多肽，其包含一个，两个或全部细胞外抗原结合结构域，跨膜结构域，例如NKR跨膜结构域和胞质结构域，例如NKR胞质结构域。在一个实施方案中，NKR
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CAR多肽包含细胞外抗原结合结构域，以及以下的一个或两个:跨膜结构域，例如NKR跨膜结构域；或胞质结构域，例如NKR胞质结构域。在一个实施方案中，所述NKR
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CAR多肽包含细胞外抗原结合结构域；跨膜结构域和NKR胞质结构域。在一个实施方案中，NKR
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CAR多肽包含胞外抗原结合结构域，NKR跨膜结构域和胞质结构域。在一个实施方案中，NKR
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CAR多肽包含胞外抗原结合结构域，NKR跨膜结构域和胞质结构域。
[0009]在一个实施方案中，所述NKR
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CAR多肽包含KIR
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CAR，例如actKIR
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CAR或inhKIR
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CAR，NCR
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CAR，例如actNCR
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CAR，SLAMF
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CAR，例如inhSLAMF
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CAR，FcR
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CAR，例如，CD16
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CAR，例如actCD16
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CAR 或CD64
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CAR，例如actCD64
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CAR，或Ly49
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CAR，例如actLy49
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CAR或inhLy49
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CAR。
[0010]在一个实施方案中，NKR
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CAR多肽包含杀伤细胞免疫球蛋白样受体嵌合抗原受体(KIR
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CAR)，其中 KIR
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CAR包含来自KIR的跨膜结构域(KIR跨膜结构域)或包含来自KIR的功能信号传导结构域的胞质结构域(KIR胞质结构域)的一个或两者。在一个实施方案中，KIR跨膜结构域包含选自以下的蛋白质的跨膜结构域:KIR2DS2,KIR2DL3,KIR2DL1,KIR2DL2,KIR2DL4,KIR2DL5A,KIR2DL5B,KIR2DS1,KIR2DS3, KIR2DS4,KIR2DS5,KIR3DL1,KIR3DS1,KIR3DL2,KIR3DL3,KIR2DP1和KIR3DP1。在一个实施方案中，KIR胞质结构域包含选自以下的蛋白质的功能信号传导结构域:KIR2DS2,KIR2DL3,KIR2DL1, KIR2DL2,KIR2DL4,KIR2DL5A,KIR2DL5B,KIR2DS1,KIR2DS3,KIR2DS4,KIR2DS5,KIR3DL1, KIR3DS1,KIR3DL2,KIR3DL3,KIR2DP1和KIR3DP1。在一个实施方案中，KIR
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CAR进一步包含KIR D0 结构域，KIR D1结构域和/或KIR D2结构域中的一个或多个。
[0011]在一个实施方案中，所述NKR CAR多肽包含天然细胞毒性受体嵌合抗原受体(NCR
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CAR)，其中所述 NCR
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CAR包含来自NCR的跨膜结构域(NCR跨膜结构域)或包含来自NCR的功能信号传导结构域的胞质结构域(NCR胞质结构域)中的一个或两个。在一个实施方案中，NCR跨膜结构域包含选自NKp46，NKp30 和NKp44的蛋白质的跨膜结构域。在一个实施方案中，其中NCR胞质结构域包含选自NKp46，NKp30 和NKp44的蛋白质的功能信号传导结构域。
[0012]在一个实施方案中，NKR CAR多肽包含信号传导淋巴细胞活化分子家族嵌合抗原受体 (SLAMF
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CAR)，其中SLAMF
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CAR包含来自SLAMF的跨膜结构域(SLAMF跨膜结构域)或包含来自 SLAMF的功能信号传导结构域的胞质结构域(SLAMF胞质结构域)。在一个实施方案中，SLAMF跨膜结构域包含选自SLAM,CD48,CD229,2B4,CD本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.包含编码激活杀伤细胞免疫球蛋白样受体嵌合抗原受体(actKIR
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CAR)的序列的核酸，其中所述actNKR
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CAR包含:(i)来自抗体分子或非抗体支架的细胞外抗原结合结构域，(ii)激活杀伤细胞免疫球蛋白样受体(actKIR)的跨膜结构域，和(iii)胞质结构域。2.权利要求1的核酸，其中所述actKIR跨膜结构域能够与DAP12多肽的跨膜结构域相互作用。3.权利要求1的核酸，其中所述actKIR跨膜结构域包含带正电荷的部分。4.权利要求1的核酸，其中胞质结构域是KIR胞质结构域。5.权利要求1的核酸，其中抗原结合结构域包含与间皮素、CD19、CD123、EGFRvIII、CLL
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1、BCMA、CD33、Claudin6或WT1结合的抗体。6.权利要求5的核酸，其中抗原结合结构域包含结合间皮素或CD19的抗体。7.由权利要求1
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6任...

【专利技术属性】
技术研发人员：G，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚大学托管会，
类型：发明
国别省市：